珍 珍

(日喀則市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所，西藏 日喀則 857000)

引言

馬鈴薯脫毒試管苗在生產(chǎn)上的應(yīng)用解決了馬鈴薯病毒病危害造成減產(chǎn)的問(wèn)題，但是目前微生物污染又成為脫毒試管苗生產(chǎn)的制約因素。因此，如何將污染控制到最低水平，并且將成本降到最低，成為目前組培實(shí)驗(yàn)室需要解決的重要問(wèn)題。由于西藏地區(qū)環(huán)境溫差大，氣候干燥，每當(dāng)換季交替之時(shí)常出現(xiàn)大量的組培苗污染情況，直接影響組培苗的質(zhì)量。因此，西藏脫毒馬鈴薯組培實(shí)驗(yàn)室的消毒是實(shí)驗(yàn)室最重要工作之一，研究選擇適合高海拔地區(qū)組培實(shí)驗(yàn)室的消毒劑，提高組培苗的質(zhì)量成為目前高海拔地區(qū)組培實(shí)驗(yàn)室亟需解決的最重要的問(wèn)題。目前，高海拔地區(qū)組培實(shí)驗(yàn)室常用的空氣消毒方法有甲醛和高錳酸鉀熏蒸、次氯酸鈉擦拭、紫外燈照射等方法，近2a組培室常用的方法有二氧化氯消毒法。每種消毒方法都有一定的缺陷，但都能不同程度的對(duì)組培環(huán)境起到滅菌效果。如，紫外線具有一定的輻射，對(duì)人體皮膚會(huì)造成損害；次氯酸鈉最后分解為氯氣和氧氣而散逸，因而易于除去，不留殘毒，但產(chǎn)生的刺激性氣體如氯氣和氯化氫對(duì)人體有毒害作用，這些氣體強(qiáng)烈刺激眼角膜、上呼吸道粘膜等，可引起喉痙孿、喉水腫、支氣管炎和急性腦炎等；甲醛殘存時(shí)間長(zhǎng)，還可致癌[1]，皮膚直接接觸甲醛可引起過(guò)敏性皮炎，產(chǎn)生色斑，吸入高濃度甲醛，可誘發(fā)過(guò)敏性哮喘[2]；各種空氣滅菌器消毒滅菌效果各異，一次性投入大，使用成本高[3]。二氧化氯消毒劑是國(guó)際上公認(rèn)的高效消毒滅菌劑，該消毒劑為無(wú)色、無(wú)特殊氣味液體，pH值為6.5,二氧化氯濃度為0.501%。其可以殺滅一切微生物，包括細(xì)菌繁殖體、細(xì)菌芽孢、真菌、分枝桿菌、病毒等，并且這些細(xì)菌不會(huì)產(chǎn)生抗藥性。二氧化氯對(duì)微生物細(xì)胞壁有較強(qiáng)的吸附穿透能力，可有效氧化細(xì)胞內(nèi)含巰基的酶，還可以快速抑制微生物蛋白質(zhì)的合成來(lái)破壞微生物。本研究目的是通過(guò)比較二氧化氯、甲醛、次氯酸鈉在高海拔組培室的熏蒸消毒效果，找到一種適合高海拔組培室的消毒效果且成本低的組培室空氣消毒方法。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)材料包括甲醛、次氯酸鈉、二氧化氯、無(wú)菌培養(yǎng)皿等。

1.2 試驗(yàn)地點(diǎn)

試驗(yàn)地點(diǎn)為西藏日喀則市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所薯類(lèi)脫毒中心。

1.3 方法

1.3.1 熏蒸滅菌

試驗(yàn)在3間組培室進(jìn)行，分別為次氯酸鈉、二氧化氯、甲醛熏蒸(對(duì)照)。根據(jù)組培室的面積，次氯酸鈉消毒劑含有效氯和表面活性劑，對(duì)細(xì)菌、芽孢、病毒、結(jié)核桿菌有較強(qiáng)的殺滅作用。經(jīng)過(guò)次氯酸鈉空氣噴霧后，空氣細(xì)菌含量顯著下降，其是一種純天然原料配制成的含氯消毒劑，能滲透各種有機(jī)物，快速殺滅多種細(xì)菌、病毒，作用快、效果好，是一種高效消毒劑。次氯酸鈉為含氯消毒劑，高效廣譜，為國(guó)內(nèi)外廣泛使用[4]。次氯酸鈉溶液在300～500ppm，環(huán)境消毒時(shí)間約為30min左右，但次氯酸鈉溶液有極強(qiáng)的腐蝕性。二氧化氯無(wú)色無(wú)味、無(wú)毒無(wú)殘留，安全可靠，屬于生態(tài)安全環(huán)保型消毒劑，殺菌效果顯著，使用簡(jiǎn)單便捷，重要的是對(duì)操作人員的健康不會(huì)產(chǎn)生危害。根據(jù)組培室的面積，二氧化氯熏蒸按10mL B劑倒入含2片A劑玻璃容器中后放在高度1.5m左右的臺(tái)子上后撤離，關(guān)閉門(mén)窗。甲醛為無(wú)色氣體，易溶于水，40%甲醛的溶液稱為福爾馬林，有很強(qiáng)的還原作用和特殊刺激性氣味。甲醛和高錳酸鉀為2∶1濃度，按照甲醛(40%)410mL·m-3、高錳酸鉀5g·m-3，將甲醛倒入裝有高錳酸鉀的容器后趕緊撤離實(shí)驗(yàn)室，關(guān)好門(mén)窗。

1.3.2 菌落數(shù)量與統(tǒng)計(jì)

本次試驗(yàn)設(shè)3次重復(fù)，相同面積的組培室為單位，面積18m2，采用自然沉降法檢測(cè)菌落數(shù)量，每個(gè)組培室采用5個(gè)點(diǎn)，分別是組培室4個(gè)角落(離墻1.5m)和中間，離地面1.5m高度，將準(zhǔn)備好的培養(yǎng)皿在同一高度打開(kāi)蓋放60min后再進(jìn)行采樣，熏蒸前采樣和熏蒸6d后采樣的培養(yǎng)皿蓋上蓋后放在恒溫箱工作溫度為35℃，培養(yǎng)時(shí)間為3d，然后按真菌、細(xì)菌進(jìn)行菌落數(shù)量統(tǒng)計(jì)和分類(lèi)。

1.3.3 統(tǒng)計(jì)方法

根據(jù)奧氏公式計(jì)算組培室空氣的含菌數(shù)(cfu·m-3)，再計(jì)算出殺菌率，分析各方法的滅菌效果。

空氣菌落總數(shù)(cfu·m-3)=50000N/A×T

式中，A為培養(yǎng)皿大小，cm2；T為環(huán)境中培養(yǎng)的時(shí)間，min；N為平均培養(yǎng)皿的菌落數(shù)量(cfu/皿)。

殺菌率=(消毒前組培室平均菌落數(shù)-消毒后組培室平均菌落數(shù))/消毒前組培室平均菌落數(shù)×100%

2 結(jié)果與分析

2.1 次氯酸鈉的熏蒸效果

從表1可以看出，用次氯酸鈉熏蒸后，組培環(huán)境熏蒸前后真菌、細(xì)菌含量明顯減少，真菌的滅菌率達(dá)72.83%，細(xì)菌的滅菌率達(dá)76.59%。組培室平均滅菌率達(dá)到73.75%，而且次氯酸鈉對(duì)細(xì)菌的滅殺效果要優(yōu)于真菌。

2.2 二氧化氯的熏蒸效果

從表2可以看出，使用二氧化氯熏蒸后，對(duì)組培環(huán)境起到明顯的殺菌效果，熏蒸前后細(xì)菌、真菌含量明顯減少。真菌的滅菌率達(dá)85.71%，細(xì)菌的滅菌率達(dá)81.06%，平均滅菌達(dá)到83.93%，并且對(duì)真菌滅殺效果優(yōu)于細(xì)菌。

表1 次氯酸鈉在組培室的熏蒸效果

表2 二氧化氯在組培室的熏蒸效果

2.3 甲醛的熏蒸效果

從表3可以看出，使用甲醛熏蒸后，對(duì)組培環(huán)境具有明顯殺菌效果，熏蒸前后真菌、細(xì)菌數(shù)量明顯減少。真菌滅菌率達(dá)78.11%，細(xì)菌的滅菌率達(dá)73.84%，平均滅菌達(dá)到76.92%，并且甲醛對(duì)真菌的滅殺效果要優(yōu)于細(xì)菌，但對(duì)細(xì)菌的滅菌稍微低。

表3 甲醛在組培室的熏蒸效果

3種熏蒸消毒方法都對(duì)組培室環(huán)境中真菌、細(xì)菌起到很好的殺菌效果。其中，二氧化氯消毒殺菌效果最好，其次是甲醛，次氯酸鈉較差。從真菌和細(xì)菌的滅菌效果來(lái)看，二氧化氯對(duì)真菌的殺菌效果優(yōu)于細(xì)菌，甲醛對(duì)真菌的效果優(yōu)于細(xì)菌，次氯酸鈉對(duì)細(xì)菌的效果優(yōu)于真菌。

3 結(jié)論

總體來(lái)說(shuō)，二氧化氯、甲醛、次氯酸鈉3種環(huán)境消毒方法都對(duì)環(huán)境起到明顯的殺菌效果，對(duì)環(huán)境中的細(xì)菌、真菌都能達(dá)到滅菌的效果。從滅菌效果、工作人員健康影響、進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室時(shí)間、成本各方面考慮，二氧化氯最適合于組培室環(huán)境消毒。

針對(duì)高海拔地區(qū)組培實(shí)驗(yàn)室的污染源進(jìn)行消毒是植物組織培養(yǎng)的重要環(huán)節(jié)[5]，高效安全、低毒無(wú)害、環(huán)境友好是組培實(shí)驗(yàn)室消毒的本質(zhì)要求和發(fā)展趨勢(shì)。馬鈴薯組培室的空氣清潔度是減少組培污染的重要條件，用于組培室消毒的常規(guī)消毒試劑次氯酸鈉，不僅味道刺鼻而且對(duì)人體有毒害作用,這些氣體強(qiáng)烈刺激眼角膜、上呼吸道粘膜等，可引起喉痙孿、喉水腫、支氣管炎和急性腦炎等；甲醛熏蒸法會(huì)對(duì)人體造成一定的危害，長(zhǎng)期在組培室工作可能會(huì)產(chǎn)生致癌等問(wèn)題；而使用二氧化氯消毒劑，沒(méi)有刺鼻的氣味，不傷皮膚，經(jīng)北京市疾控中心檢測(cè)為實(shí)際無(wú)毒級(jí)產(chǎn)品，優(yōu)良的殺菌效果及可靠的安全性能，是食用菌生產(chǎn)用消毒劑首選，使用簡(jiǎn)便，價(jià)格低廉，效果顯著，既能達(dá)到消毒效果，又不會(huì)造成人體危害。通過(guò)本次試驗(yàn)數(shù)據(jù)證明，二氧化氯的消毒效果顯著且消毒后18h后可以進(jìn)組培室，實(shí)現(xiàn)高海拔組培室消毒劑高效安全、低毒無(wú)害、環(huán)境友好是組培消毒的本質(zhì)要求和發(fā)展趨勢(shì)，綜合考慮二氧化氯適合用于高海拔地區(qū)組培室的消毒，通過(guò)二氧化氯消毒劑可減少組培室組培苗的污染，提高組培苗的質(zhì)量，從根本上解決了馬鈴薯病蟲(chóng)害造成的減產(chǎn)。而甲醛氣味存留時(shí)間長(zhǎng)，一般消毒后7d左右才能進(jìn)組培室且對(duì)人體會(huì)造成一定危害，成本也高；次氯酸鈉熏蒸后3d后可以進(jìn)組培室，消毒結(jié)束后應(yīng)將消毒廢液及時(shí)倒掉，防止有害氣體揮發(fā)。消毒操作時(shí)須戴好口罩，不宜用手揉眼摸臉等動(dòng)作，以免對(duì)眼睛或皮膚造成傷害。組培室實(shí)驗(yàn)的消毒要進(jìn)行全方位考慮，包括消毒效果、消毒時(shí)間、對(duì)人體的傷害、成本等方面，以達(dá)到最想要的效果。