周夢佳，李書偉，張錦秀，鄺聲耀，刁 慧，張 杰，魏小蘭

（四川省畜牧科學(xué)研究院，動物遺傳育種四川省重點實驗室，四川成都 610066）

芽孢菌屬能夠有效促進動物生長，促進腸道有益微生物的繁殖，維持機體健康的作用[1]。目前，枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）、地衣芽孢桿菌、蠟樣芽孢桿菌（Bacillus cereus）等芽孢桿菌可作為飼料添加劑應(yīng)用[2]。地衣芽孢桿因在不利環(huán)境下能產(chǎn)生孢子而具有極強的抗逆性，具備在極端條件下可長期儲存的特性。相關(guān)研究表明，芽孢桿菌產(chǎn)生的消化酶可增加動物腸道中營養(yǎng)物質(zhì)的消化率，因此飼料中添加地衣芽孢桿菌可提高動物體生長性能[3-5]。在飼糧中補充地衣芽孢桿菌可減輕產(chǎn)氣莢膜梭菌引起的肉雞壞死性腸炎，改善肉雞腸道形態(tài)[6-7]。本試驗旨在研究試驗飼糧中添加不同劑量的地衣芽孢桿菌對羅氏肉雞生長性能、血清抗氧化酶清除自由基的能力和腸道健康的影響，探索地衣芽孢桿菌在肉雞生產(chǎn)中的最優(yōu)推薦用量，為其進一步推廣與應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗菌種 地衣芽孢桿菌H2 菌粉由四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動物微生態(tài)研究中心提供（活菌數(shù)分別為1.0×109、2.0×109、4.0×109CFU/mL）。

1.2 試驗設(shè)計及試驗日糧 192 只1 日齡羅氏肉雞，隨機分為4 組，每組4 個重復(fù)，空白對照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，低、中、高劑量組飼喂基礎(chǔ)飼糧+0.1% 地衣芽孢桿菌菌粉，地衣芽孢桿菌活菌數(shù)分別為1.0×109、2.0×109、4.0×109CFU/mL，試驗期42 d?；A(chǔ)飼糧參照NRC（1994）的營養(yǎng)標準配制，基本配方參考王鶴松[8]的日糧設(shè)計配制完成，日糧組成及營養(yǎng)成分見表1。

表1 試驗飼糧組成及營養(yǎng)成分

1.3 測定指標與方法

1.3.1 生長指標 試驗第1 天和第42 天時，統(tǒng)計每個組肉雞的體重和耗料量，計算肉雞平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）和耗料增重比（F/G）。

1.3.2 血清抗氧化指標 試驗結(jié)束時，隨機從每個重復(fù)中選取2 只肉雞進行翅下靜脈采血，3 000 r/min 離心15 min 制備血清樣品，-20℃冰箱冷凍分裝保存。參照彭豫東等[9]的方法測定肉雞血清丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）和過氧化氫酶（CAT）活性。試劑盒為南京建成生物工程研究所產(chǎn)品。

1.3.3 腸道形態(tài) 試驗42 d 時，從每個重復(fù)中隨機選取2 只肉雞，剪取回腸中段約1 cm 的腸道組織，用生理鹽水小心清洗并置于4%甲醛中進行固定，常溫保存。按照常規(guī)方法制作回腸腸道組織切片，光學(xué)顯微鏡下觀察腸道的絨毛和隱窩形態(tài)，利用圖像處理系統(tǒng)計算回腸樣品的絨毛高度、隱窩深度及絨毛高度和絨毛高度/隱窩深度（V/C）。

1.4 統(tǒng)計分析 地衣芽孢桿菌添加量為單一影響因素，使用SPSS 20.0 軟件進行單因素方差分析，P＜0.05 表示顯著差異，結(jié)果以平均值±標準差表示。

2 結(jié)果

2.1 地衣芽孢桿菌對肉雞生長性能的影響 與空白對照組相比，高劑量組肉雞的平均日增重提高了2.03%（P＜0.05），低、中、高劑量組肉雞平均日采食量分別降低了3.04%、2.78% 和3.05%（P＜0.05）。高劑量組F/G 低于空白對照組（P＜0.05）。

表2 地衣芽孢桿菌對肉雞生長性能的影響

2.2 地衣芽孢桿菌對肉雞血清抗氧化指標的影響 由表3 可以看出，與空白對照組相比，添加地衣芽孢桿菌組血清GSH-Px 均有所升高，其中中劑量和高劑量組顯著高于對照組。血清SOD 含量隨地衣芽孢桿菌添加量的增加而呈上升趨勢，且低、中、高劑量組顯著高于對照組。空白對照組血清MDA 含量略高于其他組（P＞0.05），血清CAT 含量隨著地衣芽孢桿菌添加量的增加而上升（P＞0.05）。

表3 地衣芽孢桿菌對肉雞血清抗氧化指標的影響

2.3 地衣芽孢桿菌對肉雞腸道形態(tài)的影響 從表4 可以看出，肉雞回腸絨毛高度與地衣芽孢桿菌在日糧中的添加量呈正相關(guān)，但與空白對照組無顯著差異。與空白對照組相比，高劑量組隱窩深度顯著降低，V/C 值顯著升高，低劑量組和中劑量組隱窩深度較空白組降低（P＞0.05）。

表4 地衣芽孢桿菌對肉雞腸道形態(tài)的影響

3 討 論

地衣芽孢桿菌能在動物體內(nèi)產(chǎn)生豐富的有益活性代謝產(chǎn)物，其產(chǎn)生的脂肪酶、纖維素酶和蛋白酶等酶類可補充腸道內(nèi)源酶的不足；地衣芽孢桿菌分泌的小肽類物質(zhì)還能消除飼料中的抗營養(yǎng)成分，消除其對動物消化吸收利用有效營養(yǎng)物質(zhì)的阻礙[10]。孫全友等[11]研究發(fā)現(xiàn)，在飼料中添加地衣芽孢桿菌能顯著提高肉雞的生長性能。在本試驗中，添加地衣芽孢桿菌制劑能顯著降低肉雞F/G，這可能是由于地衣芽孢桿菌在進入肉雞體內(nèi)后，快速并大量繁殖消耗了大量氧氣，使肉雞腸道處于厭氧狀態(tài)，更有利于肉雞原生益生菌（如乳酸菌類、雙歧桿菌等）的繁殖，在自身產(chǎn)生多種消化酶類的同時，也能促進肉雞體內(nèi)原生益生菌酶類的產(chǎn)生，直接和間接提高了肉雞體內(nèi)酶的活性，提高營養(yǎng)物質(zhì)的利用率，從而提高了肉雞的生長性能[12]。

相關(guān)研究表明，SOD、CAT、GSH-Px 是機體中主要的抗氧化酶，維持著機體的氧化平衡，它們能清除多余的超氧陰離子自由基，保護細胞免受氧化損傷[9]，而MDA 含量則反映脂質(zhì)過氧化程度，間接反映細胞受損傷程度[13]。趙瑩等[14]研究發(fā)現(xiàn)，添加地衣芽孢桿菌能顯著提高肉雞血清SOD、CAT、GSH-Px 和肝臟SOD、CAT 活性。本試驗結(jié)果亦表明，肉雞血清SOD和GSH-Px 活性隨著地衣芽孢桿菌添加量的增加而呈上升趨勢，肉雞血清抗氧酶活力提高可增強機體清除多余自由基的能力，對肉雞的健康和生長有促進作用，這可能是由于芽孢桿菌屬的代謝產(chǎn)物或本身所帶的抗原充當著免疫原的角色能激活肉雞體內(nèi)的免疫通路，提高肉雞的抗病和抗氧化能力。Rajput 等[15]研究發(fā)現(xiàn)，在飼糧中添加芽孢菌屬能顯著增加肉雞對新城疫（NDV）疫苗的應(yīng)答，且能增加腸道黏膜中淋巴細胞數(shù)量。

小腸絨毛長度和隱窩深度是衡量動物體腸道形態(tài)發(fā)育的重要指標，芽孢桿菌可刺激隱窩細胞的分化和成熟，從而降低隱窩深度，促進消化液的分泌[16]。Aliakbarpour 等[17]研究發(fā)現(xiàn)，芽孢菌屬能降低雛雞十二指腸和回腸的隱窩深度，改善腸道黏膜。陳家祥等[18]研究表明，在麻羽肉雞飼糧中添加地衣芽孢桿菌可以降低隱窩深度、改善腸道結(jié)構(gòu)。本試驗中，添加地衣芽孢桿菌能在一定程度上改善回腸的黏膜形態(tài)，這可能是由于地衣芽孢桿菌分泌的多糖等物質(zhì)刺激了肉雞回腸的發(fā)育[19]，在該試驗中的具體表現(xiàn)為隱窩深度的降低和V/C 值的升高，從而增加回腸黏膜的吸收面積，促進了相關(guān)營養(yǎng)物質(zhì)在肉雞回腸中的吸收能力。

4 結(jié) 論

本研究結(jié)果表明，與對照組相比，飼糧中添加地衣芽孢桿菌能顯著降低肉雞F/G，提高肉雞的血清抗氧酶活力，增強機體清除多余自由基的能力，改善肉雞回腸的黏膜形態(tài)，對肉雞的健康和生長有促進作用。結(jié)合生長性能、抗氧化能力和腸道形態(tài)看，肉雞飼糧中地衣芽孢桿菌的適宜添加量為4.0×109CFU/kg。