肖霖力，許曉玲，宋玉清，白佳樺，馮 濤，秦玉圣，楊 婷，劉 彥

（北京市農(nóng)林科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，北京 100097）

繁殖障礙是奶牛生產(chǎn)的重大問題之一。據(jù)報(bào)道，我國奶牛繁殖障礙的發(fā)生率為15%～20%，每年因繁殖障礙被淘汰的奶牛占淘汰總數(shù)的60%～70%[1]。淘汰率增加使奶牛使用年限減少，飼養(yǎng)成本增加，給奶牛業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失[2]。由于奶牛繁殖障礙的臨床癥狀復(fù)雜多樣，目前還沒有準(zhǔn)確的診斷方法，生產(chǎn)中主要采用直腸檢查技術(shù)進(jìn)行診斷，即操作人員手指通過直腸壁觸摸奶牛的卵巢、子宮，感知卵巢和子宮是否發(fā)生異樣，進(jìn)行病變判斷，不能直觀看到卵巢和子宮的病變形態(tài)及結(jié)構(gòu)，難以客觀、準(zhǔn)確地將繁殖障礙奶牛進(jìn)行鑒別診斷并給予針對性治療。因此，奶牛繁殖障礙的治愈率較低。本研究采用B 超技術(shù)從卵巢、子宮的形態(tài)和結(jié)構(gòu)對患有繁殖障礙的奶牛進(jìn)行準(zhǔn)確診斷，為患有黃體囊腫、卵泡囊腫和卵巢靜止的繁殖障礙奶牛制定精準(zhǔn)的治療方案，為提高奶牛繁殖障礙病的治愈率及B 超技術(shù)在奶牛養(yǎng)殖業(yè)中的廣泛應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 對北京地區(qū)6 個(gè)規(guī)?；膛?016—2019 年共2 971 頭荷斯坦泌乳奶牛進(jìn)行連續(xù)觀察，查閱每頭奶牛的配種記錄和產(chǎn)犢記錄。選取產(chǎn)后配種次數(shù)≥3 次或產(chǎn)后150 d 未孕的繁殖障礙奶牛545 頭，其中329 頭進(jìn)行B 超檢測診斷，216 頭常規(guī)直腸檢查診斷。牛只健康，飼養(yǎng)規(guī)范，牛場飼養(yǎng)方式全部為散欄飼養(yǎng)，采用全混合日糧（TMR）飼喂。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器及用品 獸用B 超儀型號為HS-1600V，探頭為5.0 MHz/7.5 MHz/10.0 MHz 可變頻線陣探頭，本田電子有限公司制造。線陣探頭頻率一般選擇7.5～10.0 MHz，柔和度2 級，銳度1 級，聲功率60～80 W，增益70～100，動(dòng)態(tài)調(diào)節(jié)范圍60～80 dB，深度50～90 mm，焦點(diǎn)位置20～50 mm。根據(jù)具體的探查情況相應(yīng)調(diào)節(jié)各參數(shù)，以可以正常清晰顯示檢測組織的圖像為基準(zhǔn)。

氯前列烯醇鈉（PG）[獸藥字（2013）110042207]、絨毛膜促性腺激素（HCG）[獸藥字（2012）110041281]和促卵泡素（FSH）[ 獸藥字（2012）110044648] 均為寧波三生生物科技有限公司生產(chǎn)。

其他用品包括耦合劑、TM-100 醫(yī)用型（天津市西苑寺制造）、長臂手套（廣西蔣氏動(dòng)物用品有限公司出品）。

1.3 B 超操作方法 準(zhǔn)備工作主要包括使用高錳酸鉀稀釋液對保定好的母牛外陰進(jìn)行消毒，對手臂消毒，戴長臂手套，并穿戴防護(hù)設(shè)備。調(diào)試好B 超儀，錄入牛號。檢查人員站在牛的正后方，五指呈錐形緩慢進(jìn)入母牛直腸，掏出直腸內(nèi)宿糞。手握B 超探頭，慢慢將探頭伸入到母牛直腸內(nèi)緊鄰卵巢及子宮角部位，緩慢移動(dòng)探頭，發(fā)現(xiàn)卵巢后，調(diào)整探頭角度，當(dāng)屏幕出現(xiàn)清晰的卵巢及黃體、卵泡圖像時(shí)，對黃體、卵泡的大小、卵泡壁的厚度以及卵泡腔內(nèi)進(jìn)行仔細(xì)觀測并保存圖像；然后移動(dòng)探頭尋找子宮角，仔細(xì)辨別子宮腔輪廓、子宮內(nèi)膜是否增厚以及子宮腔內(nèi)的結(jié)構(gòu)等并保存圖像。

1.4 直腸檢查操作方法 準(zhǔn)備工作同1.3。檢查人員要站在牛的正后方，一只手握住牛尾巴，另一只手先輕撫肛門（叩門），然后五指成圓錐形，從肛門緩緩插入直腸。如果遇有積糞，要爭取取出，灌腸排糞后再把手插入檢查。如果膀胱內(nèi)充滿尿液，可用手壓迫膀胱，使病牛排尿。如果病牛出現(xiàn)努責(zé)，插進(jìn)直腸內(nèi)的手可暫時(shí)不要再往內(nèi)插或者稍微退出來一點(diǎn)，并且用臂往下壓肛門，腸壁松弛不再努責(zé)時(shí)可再緩緩向內(nèi)插，直到觸摸到卵巢及卵巢表面的卵泡和黃體。

1.5 奶牛繁殖障礙的分類與B 超診斷標(biāo)準(zhǔn)

1.5.1 奶牛繁殖障礙的分類 根據(jù)不同檢測部位的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、大小、壁厚和腔內(nèi)回聲等所形成的B 超影像圖將奶牛繁殖障礙病分為黃體囊腫、卵泡囊腫、卵巢靜止、子宮疾病和其他疾病5 種。

1.5.2 診斷標(biāo)準(zhǔn) 診斷標(biāo)準(zhǔn)參考2018 年本團(tuán)隊(duì)成員發(fā)表的研究成果[3]。

黃體囊腫：B 超檢查卵泡直徑超過20 mm，卵泡壁厚大于3 mm，卵泡壁為均勻的中等強(qiáng)度環(huán)狀、帶狀回聲，囊腔內(nèi)有條索狀或團(tuán)塊狀強(qiáng)回聲（圖1-A）；解剖表現(xiàn)為卵巢囊腫、壁黃體化，有硬實(shí)感（圖1-B）。持續(xù)時(shí)間超過10 d 且無明顯變化。

卵泡囊腫：B 超檢查卵泡直徑明顯超過20 mm，卵泡壁厚小于3 mm，卵泡腔內(nèi)為無回聲液性暗區(qū)（圖1-C）；解剖表現(xiàn)為卵泡圓形、表面光滑，充滿液體，體積較大，有明顯的波動(dòng)感（圖1-D）。持續(xù)時(shí)間超過10 d 且無明顯變化。

卵巢靜止：B 超檢查卵巢呈現(xiàn)致密的較強(qiáng)回聲，卵巢內(nèi)部為均勻的低強(qiáng)度回聲或有點(diǎn)狀無回聲暗區(qū)（圖1-E）；解剖觀察發(fā)現(xiàn)卵巢表面無卵泡發(fā)育，也無黃體存在（圖1-F）。卵巢長期處于靜止?fàn)顟B(tài)。

子宮疾病：B 超診斷子宮炎時(shí)表現(xiàn)為子宮內(nèi)膜腫脹、增厚，腔輪廓模糊不清，宮腔膨脹伴有部分回聲及雪片狀物（圖1-G）；積膿時(shí)子宮體增大，宮壁清晰，宮腔內(nèi)有液性暗區(qū)，含低回聲光點(diǎn)（圖1-H）。

圖1 運(yùn)用B 超診斷奶牛繁殖障礙的判定標(biāo)準(zhǔn)

其他疾?。航?jīng)B 超監(jiān)測不屬于以上4 種疾病，且目前無法診斷和確診是何種繁殖疾病。

1.6 奶牛卵巢疾病直腸檢查分類診斷標(biāo)準(zhǔn) 黃體囊腫：卵巢表面有1 個(gè)或幾個(gè)凸起的囊腫物，質(zhì)地較硬彈性差或無彈性，間隔7～10 d 重復(fù)檢查無明顯變化。

卵泡囊腫：卵巢表面有1 個(gè)或幾個(gè)凸起的囊腫物，手指觸摸具有較明顯的波動(dòng)感，間隔7～10 d 重復(fù)檢查無明顯變化。

卵巢靜止：卵巢表面光滑無凸起物，卵巢體積較小，間隔7～10 d 重復(fù)檢查無明顯變化。

1.7 奶牛卵巢繁殖障礙的治療方案 黃體囊腫：單次肌肉注射氯前列烯醇鈉（PG）6 mL（0.6 mg）[4]，B 超監(jiān)測至黃體囊腫消失，卵泡正常生長發(fā)育。觀察到奶牛有明顯發(fā)情癥狀后進(jìn)行人工授精。

卵泡囊腫：肌肉注射絨毛膜促性腺激素（HCG），每次10 000 IU，1 次/d，連用3 d[5]，B 超監(jiān)測至卵泡囊腫消失，新卵泡生長發(fā)育。觀察到奶牛有明顯發(fā)情癥狀后進(jìn)行人工授精。

卵巢靜止：單次肌肉注射促卵泡素（FSH）100～200 IU，隔2 日1 次，注射3 次[6]，B 超監(jiān)測至有正常的卵泡生長發(fā)育。觀察到奶牛有明顯發(fā)情癥狀后進(jìn)行人工授精。

所有恢復(fù)發(fā)情的牛進(jìn)行人工授精28 d 后血液檢查妊娠情況。

1.8 統(tǒng)計(jì)分析 統(tǒng)計(jì)試驗(yàn)?zāi)膛５亩?、產(chǎn)犢日期、發(fā)情與配種記錄等基本數(shù)據(jù)，用B 超進(jìn)行診斷，收集影像數(shù)據(jù)并進(jìn)行分析。所用數(shù)據(jù)使用Excel 進(jìn)行整理，應(yīng)用SPSS 20.0 軟件進(jìn)行單因素方差分析。

2 結(jié)果

2.1 奶牛場繁殖障礙的發(fā)病率 經(jīng)篩選獲得繁殖障礙奶牛329 頭，占成母牛比例的11.07%（表1）。從年度分布來看，2016、2017、2018、2019 年奶牛繁殖障礙的發(fā)病率占成母牛的比例分別為11.64%、10.68%、11.82%、10.64%，無明顯區(qū)別，基本穩(wěn)定。

表1 牛場不同年度繁殖障礙奶牛的發(fā)病情況

2.2 奶牛繁殖障礙的種類 5 種繁殖障礙的發(fā)病數(shù)量和比例見表2。在329 頭繁殖障礙奶牛中，卵巢疾病（黃體囊腫+卵泡囊腫+卵巢靜止）172 頭，占繁殖障礙病的52.28%。卵巢疾病中又以黃體囊腫和卵泡囊腫最為常見，黃體囊腫和卵泡囊腫奶牛152 頭，占奶牛卵巢疾病數(shù)量172 頭的88.37%。

表2 奶牛繁殖障礙不同類型分布情況

2.3 卵巢疾病的治療效果

2.3.1 B 超與直腸診斷治愈率對比 根據(jù)1.5 和1.6 的診斷標(biāo)準(zhǔn)，患有卵巢疾病的奶牛分別為216 頭（直腸檢查診斷）和172 頭（B 超診斷），按照1.7 的治療方案開展相應(yīng)治療，結(jié)果如表3 所示。B 超診斷分類的黃體囊腫、卵泡囊腫的治愈率好于直腸檢查診斷分類（P＜0.05或P＜0.01），卵巢疾病（黃體囊腫+卵泡囊腫+卵巢靜止）B 超診斷治愈率高于直腸檢查診斷（P＜0.01）。

表3 直腸檢查和B 超診斷3 種卵巢疾病的奶牛治療效果

2.3.2 B 超與直腸診斷妊娠率對比 由表4 可見，B 超診斷的黃體囊腫、卵巢囊腫治療后妊娠率高于直腸檢查診斷（P＜0.05），卵泡囊腫、卵巢疾病（黃體囊腫+卵泡囊腫+卵巢靜止）治療后妊娠率也高于直腸檢查診斷（P＜0.01）。

表4 直腸檢查和B 超診斷3 種卵巢疾病的奶牛妊娠情況

3 討 論

本實(shí)驗(yàn)中奶牛繁殖障礙病的發(fā)病率低于密云縣奶牛的17.83%[7]，雖然2 個(gè)試驗(yàn)都在北京的牛場進(jìn)行，但先前的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)來源于2008 年。近些年來，我國不斷開展技術(shù)攻關(guān)和先進(jìn)成果技術(shù)的推廣應(yīng)用，奶牛養(yǎng)殖和管理水平顯著提升，繁殖效率、生產(chǎn)水平明顯提高[8-10]，繁殖障礙病的發(fā)病率明顯降低。

從5 種奶牛繁殖障礙病的發(fā)病比例看，其他疾?。壳安幻鞑∫?qū)е路敝痴系K）比例最高，占繁殖障礙病的29.18%，今后要不斷提高繁殖障礙病診斷方法和技術(shù)，減少其他疾病的比例；臨床發(fā)現(xiàn)卵泡囊腫多于黃體囊腫[8]。本實(shí)驗(yàn)卵泡囊腫比例稍大于黃體囊腫，卵泡囊腫與黃體囊腫形態(tài)較為接近，容易混淆，生產(chǎn)中應(yīng)仔細(xì)分辨。

奶牛繁殖障礙種類多，診斷難度大，無法制定出具有針對性的治療方案，導(dǎo)致治愈率不高[9-11]。例如，在直腸檢查中黃體囊腫和卵泡囊腫往往難以分辨，黃體囊腫和卵泡囊腫直腸檢查的準(zhǔn)確率只有50%，誤診率高，使奶牛繁殖障礙病治愈率偏低[12-13]。不同奶牛繁殖障礙的B 超影像圖不同，可以進(jìn)行比較直觀地判斷。除此之外，B 超檢查圖像還可根據(jù)卵泡直徑的大小、卵泡壁的厚度和卵泡內(nèi)的回聲將黃體囊腫和卵泡囊腫進(jìn)行清晰辨別。B 超可以監(jiān)測到直徑3 mm 以下的卵泡及無卵泡狀態(tài)[14-16]，奶牛卵巢處于相對靜止，從而診斷為卵巢靜止。本實(shí)驗(yàn)中，在準(zhǔn)確診斷的基礎(chǔ)上對黃體囊腫、卵泡囊腫、卵巢靜止3 種卵巢疾病進(jìn)行針對性治療，卵巢疾病的治愈率為78.49%，治愈牛妊娠率為42.44%，較傳統(tǒng)的直腸檢查診斷治愈率高22.01 個(gè)百分點(diǎn)，妊娠率高16.98 個(gè)百分點(diǎn)?？梢?，B 超診斷結(jié)合針對性治療，在奶牛生產(chǎn)中對卵巢疾病治療效果良好。

4 結(jié) 論

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，采用B 超診斷技術(shù)可以對奶牛繁殖障礙進(jìn)行精準(zhǔn)診斷，在精準(zhǔn)診斷的基礎(chǔ)上對黃體囊腫、卵泡囊腫、卵巢靜止進(jìn)行針對性治療，效果顯著。因此，B 超診斷技術(shù)在今后的奶牛生產(chǎn)中可以推廣應(yīng)用。