徐鵬飛，王昊乾，鄭新飛，郭 帥，包秋華，張和平

（內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)乳品生物技術(shù)與工程教育部重點實驗室 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部奶制品加工重點實驗室內(nèi)蒙古自治區(qū)乳品生物技術(shù)與工程重點實驗室 呼和浩特 010018）

益生菌是一種活的微生物，以適當(dāng)水平使用時，會給宿主帶來益處[1]。隨著微生物相關(guān)研究技術(shù)的成熟，對雙歧桿菌的研究也更加深入，并將雙歧桿菌作為有益微生物用于食品中。大量研究表明，雙歧桿菌因?qū)θ梭w健康的重要影響而被視為重要的腸道益生菌之一，其能夠在人體腸道內(nèi)定植[2]。雙歧桿菌在現(xiàn)代食品及食品添加劑中被廣泛應(yīng)用，具有調(diào)整腸道菌群，增強免疫功能[3]，促進消化吸收，緩解便秘[4]和改善神經(jīng)調(diào)節(jié)[5]等益生功能。乳雙歧桿菌Probio-M8 是分離自健康婦女母乳中的優(yōu)良乳源益生菌，具有改善免疫應(yīng)答功能[6]與較好的耐酸耐膽鹽等特性，在功能性食品和醫(yī)療行業(yè)具有較高的潛在應(yīng)用價值。

微生物在加工、貯藏、運輸過程中的存活率和穩(wěn)定性是影響其產(chǎn)品品質(zhì)的主要因素[7]。雙歧桿菌是嚴格厭氧的微生物，在生產(chǎn)利用的每個環(huán)節(jié)都可能受到氧化損傷。微膠囊化是生產(chǎn)菌制品工藝中最常用的方法[8]，可使敏感細菌避免高溫[9]、高壓，氧氣損傷，酸性環(huán)境，冷凍過程以及通過胃腸道的影響[10-11]。噴霧干燥和冷凍干燥技術(shù)的出現(xiàn)為益生菌用于食品及醫(yī)療行業(yè)提供了有效的生產(chǎn)方式。目前大部分雙歧桿菌制品的生產(chǎn)都是利用冷凍干燥技術(shù)生產(chǎn)的，在冷凍干燥過程中不可避免地造成部分雙歧桿菌損傷甚至死亡。噴霧冷凍干燥（Spray-freeze-drying，SFD）是一種新型的干燥方式，結(jié)合了噴霧干燥及冷凍干燥的優(yōu)點[12]，可以生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品，在產(chǎn)品品質(zhì)、結(jié)構(gòu)、生物活性及化合物保有率等方面，噴霧冷凍干燥技術(shù)比其它干燥技術(shù)更具優(yōu)勢[13-14]。

本研究采用噴霧冷凍干燥技術(shù)制備微膠囊，以乳雙歧桿菌Probio-M8 干燥后的存活率、水分含量和水分活度為指標(biāo)，進行噴霧冷凍干燥工藝優(yōu)化，篩選適合乳雙歧桿菌Probio-M8 的噴霧冷凍干燥工藝條件，研究膠囊粉末形態(tài)特征、干燥前、后脂肪酸變化及胃、腸液耐受能力，旨在為雙歧桿菌Probio-M8 工業(yè)化生產(chǎn)應(yīng)用提供技術(shù)支持。

1 材料及方法

1.1 材料與試劑

乳雙歧桿菌Probio-M8（Bifidobacterium animalis subsp.lactis Probio-M8，Bifidobacterium lactis Probio-M8），內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)乳酸菌資源庫（Lactic Acid Bacteria Collection Center，LABCC）。

脫脂乳、改良MRS 培養(yǎng)基（MRS＋0.5% L-半胱氨酸鹽酸鹽），廣東環(huán)凱微生物科技有限公司；氯仿（分析純）、甲醇（分析純）、甲醇鈉（分析純）、正己烷（分析純）、胃蛋白酶、胰蛋白酶、牛膽鹽，天津市匯杭化工科技有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

氣相色譜儀（Technologies 6850），安捷倫科技有限公司；智能水分活度測量儀（HD-3A 型），無錫市華科儀器儀表有限責(zé)任公司；掃描電鏡（TM4000PLUS），日本株式會社日立高新技術(shù)那珂事業(yè)所；臺式高速冷凍離心機（5424R 型），德國Eppendorf AG；離心機（DL-6M 型），湖南湘儀試驗室儀器開發(fā)有限公司；噴霧冷凍干燥器（YC-3000），上海雅程設(shè)備有限責(zé)任公司；智能安全型超凈工作臺（ZHJH-C 型），上海智城分析儀器有限公司；厭氧工作站（DG250），英國DWS 公司。

1.3 方法

1.3.1 菌種活化及增殖培養(yǎng) 將冷凍保存（-80℃） 的乳雙歧桿菌Probio-M8 菌種接種于改良的MRS 培養(yǎng)基中，37 ℃恒溫培養(yǎng)24 h，活化完成后，用移液槍以2%（體積分數(shù)） 的比例接種于種子培養(yǎng)基中，37 ℃恒溫厭氧培養(yǎng)24 h，按5%（體積分數(shù)）接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基（800 mL）中，37 ℃恒溫厭氧培養(yǎng)至穩(wěn)定期。

1.3.2 菌懸液制備 培養(yǎng)完成后的增殖培養(yǎng)液離心15 min（4 ℃，4 000 r/min），棄上清，取沉淀，用無菌磷酸緩沖液（PBS）洗滌并重新懸浮，上述操作重復(fù)3 次。以10%脫脂乳溶液復(fù)溶至原體積，充分混勻后噴霧冷凍干燥制備微膠囊。

1.3.3 Box-Behnken 響應(yīng)面試驗優(yōu)化因素的最佳水平 根據(jù)預(yù)試驗分析，利用Box-Behnken 的中心組合試驗設(shè)計原理，對3 因素3 水平進行試驗設(shè)計，采用Design Expert 8.0.6 軟件進行響應(yīng)面試驗結(jié)果的回歸分析。

1.3.4 活菌計數(shù)及存活率計算 準(zhǔn)確稱取5.00 g 噴霧干燥后收集的粉末，使用稀釋平板計數(shù)法進行活菌計數(shù)。選取3 個稀釋梯度的菌液1 mL 打入平板，傾入改良MRS 瓊脂培養(yǎng)基，混勻后37 ℃倒置培養(yǎng)72 h。記錄培養(yǎng)皿上的菌落數(shù)量（CFU），菌落數(shù)以CFU/g 表示。菌體存活率計算公式：

表1 響應(yīng)面試驗因素與水平Table 1 The factors and levels of response surface test

式中，N——干燥后樣品單位體積的活菌數(shù)（CFU/g）；N0——干燥前樣品單位體積活菌數(shù)（CFU/g）。

1.3.5 水分含量及水分活度測定 選取水分含量測定儀測定樣品的水分含量。稱取樣品3.00 g，測定，做3 次平行。選取智能水分活度儀測量樣品的水分活度，取適量脫脂乳均勻鋪平托盤，測定并預(yù)熱。稱取適量樣品，均勻鋪平托盤，平行測定3 次。

1.3.6 脂肪酸甲酯化提取及含量測定 脂肪酸提取采用Bligh&Dyer 法[15]。將菌體復(fù)溶，離心，用無菌磷酸緩沖液（PBS）洗滌2 次，稱取0.5 g 菌體，加入1.9 mL 氯仿-甲醇（體積比1∶2）溶液，振蕩15 min，加入0.625 mL 氯仿，加入0.625 mL 去離子水，振蕩15 min，4 ℃，5 000×g 離心10 min，吸取下層相，用氮氣吹干，加入1 mL 甲醇鈉-甲醇溶液，置冰中1 min，振蕩5 min，加600 μL 正己烷，振蕩5 min，4 ℃，5 000×g 離心5 min，取上層相，置氣相瓶中，進行氣-質(zhì)譜分析。

脂肪酸含量測定采用GC/MS 法。色譜條件：氣相色譜條件：PEG 毛細管填充柱（30 m×0.22 mm 柱內(nèi)徑，0.25 μm 膜厚，Restek）；載氣：氦氣；流速：29.6 mL/min；總流量：0.5 mL/min；柱壓：63.4 kPa；進樣口溫度：260 ℃；檢測器溫度：280 ℃；柱溫升溫程序：起始溫度100 ℃，保持1 min，隨后以4 ℃/min 速率增至250 ℃并在250 ℃保持5 min。計算脂肪酸各峰的峰面積、保留時間及質(zhì)譜范圍，根據(jù)標(biāo)樣進行比對（37 種sigma 脂肪酸和C19cyc11的標(biāo)樣），對每個樣品重復(fù)測定3 次。

脂肪酸含量采用歸一化法，所有組分出峰之和按100%計算，各脂肪酸相對含量為該脂肪酸峰面積與總體脂肪酸峰面積和的比值。

1.3.7 形態(tài)觀察 使用掃描電子顯微鏡（SEM）觀察微膠囊化樣品的形態(tài)特征。將樣品粉末安裝在樣品架上，鍍金，在15 kV 和真空下放大500 倍觀察。

1.3.8 胃、腸液耐受能力 評估膠囊化粉末在胃腸道條件耐受性，配制pH 2.5 的滅菌磷酸緩沖液，加入除菌的胃蛋白酶制成模擬人工胃液；配制pH 8.0 的滅菌磷酸緩沖液，加入除菌的胰蛋白酶和1.8%膽鹽制成模擬人工胰液。

將收集膠囊化粉末加入5.0 mL 磷酸緩沖液，混勻，作為原菌液，稀釋，計數(shù)，作為0 h 的數(shù)值。取原菌液0.5 mL 置4.5 mL 人工胃液試管中，37℃厭氧培養(yǎng)3 h，計數(shù)。取3 h 培養(yǎng)的0.5 mL 菌液置4.5 mL 腸液試管中，37 ℃厭氧培養(yǎng)4 h 和8 h，分別進行活菌計數(shù)，37 ℃厭氧培養(yǎng)72 h。

2 結(jié)果與分析

2.1 SFD 工藝條件對微膠囊品質(zhì)的影響

在干燥過程中，細菌受到很多干燥壓力，即熱、氧化和脫水等。菌體細胞膜、細胞壁、核糖體和DNA 在熱沖擊下受到影響，導(dǎo)致細菌活力喪失[16]。干燥熱的沖擊會導(dǎo)致細菌膜和蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能完整性發(fā)生不可逆轉(zhuǎn)的變化，這些基本功能和結(jié)構(gòu)的保存對于細菌的生存及其功能的保持至關(guān)重要。此外，殘留水分含量應(yīng)足夠低，以防止在儲存過程中產(chǎn)品變質(zhì)。益生菌粉的水分含量太低也會造成傷害。水分含量低于2%會增加細菌細胞膜中不飽和脂肪酸氧化的風(fēng)險，并破壞脂肪酸周圍的水合單位[17]，影響細菌活力。

2.1.1 干燥溫度對Probio-M8 微膠囊品質(zhì)的影響在進料速度15 mL/min，噴嘴直徑1.0 mm 條件下噴霧冷凍干燥，測定乳雙歧桿菌M8 微膠囊品質(zhì)，研究干燥溫度對微膠囊品質(zhì)的影響，結(jié)果見圖1。

由圖1可知，在噴霧冷凍干燥過程中，不同干燥溫度的菌株存活率存在差異，40 ℃時最高，存活率為72.92%。溫度過低時干燥所需能量不足，隨干燥時間延長，菌體脫水時間逐漸增加，菌體受損，進而導(dǎo)致死亡。溫度過高，超出菌體生長最適溫度，破壞細菌結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致存活率下降。隨著溫度升高，水分含量和水分活度下降，而水分含量都保持在2%以上，在此溫度范圍內(nèi)，細胞膜不飽和脂肪酸被氧化的風(fēng)險降低，同時說明菌體的水結(jié)合能力也在變化，并且低水分含量和低水分活度在微膠囊后續(xù)貯藏過程中起積極作用[18]。

圖1 干燥溫度對雙歧桿菌M8 微膠囊品質(zhì)的影響Fig.1 Effect of drying temperatures on the quality of Bifidobacterium M8 microcapsules

2.1.2 進料速度對Probio-M8 微膠囊品質(zhì)的影響制備M8 益生菌懸浮液，在干燥溫度40 ℃，噴嘴直徑1.0 mm 條件下噴霧冷凍干燥，測定M8 微膠囊的品質(zhì)，研究進料速度對微膠囊品質(zhì)的影響，結(jié)果見圖2。

由圖2可知，不同的進料速度對于菌體存活率及微膠囊的水分含量及水分活度影響不明顯。這是因為所用細菌屬嚴格厭氧菌，進料速度緩慢，細菌懸液暴露在空氣的時間稍長，菌體氧化損傷，影響菌體存活率。加快進料速度，縮短了噴霧冷凍干燥的時間，提高了生產(chǎn)效率。

圖2 進料速度對雙歧桿菌M8 微膠囊品質(zhì)的影響Fig.2 Effect of the feed rates on the quality of Bifidobacterium M8 microcapsules

2.1.3 噴嘴直徑對Probio-M8 微膠囊品質(zhì)的影響制備M8 益生菌懸浮液，在干燥溫度40 ℃，進料速度15 mL/min 條件下噴霧冷凍干燥，測定M8 微膠囊品質(zhì)，研究進料速度對微膠囊品質(zhì)的影響，結(jié)果見圖3。

圖3 不同噴嘴直徑對雙歧桿菌M8 微膠囊品質(zhì)的影響Fig.3 Effect of different nozzle diameters on the quality of Bifidobacterium M8 microcapsules

由圖3可知，噴嘴直徑1.5 mm 時菌體存活率最高，達73.41%。噴嘴直徑對微膠囊的水分含量和水分活度影響不顯著，微膠囊水分含量均小于5%。在試驗噴霧階段，1 mm 噴嘴偶有堵塞現(xiàn)象，影響?zhàn)ざ冗^大的懸浮液，在選擇噴嘴時需綜合考量。

益生菌產(chǎn)品須具有較好的益生特性和貯藏穩(wěn)定性，并且益生功能的發(fā)揮是建立在高存活率益生菌的基礎(chǔ)上，因此提高生產(chǎn)過程中益生菌的存活率是關(guān)鍵。

2.2 響應(yīng)面法優(yōu)化噴霧冷凍干燥制備微膠囊工藝

在單因素條件對微膠囊品質(zhì)影響的試驗基礎(chǔ)上，以存活率為評價指標(biāo)，設(shè)計三因素三水平共17 個點的響應(yīng)面分析。用來估計誤差的零點試驗重復(fù)5 次，具體設(shè)計及結(jié)果見表2。

表2 旋轉(zhuǎn)中心組合設(shè)計結(jié)果Table 2 Design results of combined rotation center

采用Design Expert 8.0 軟件響應(yīng)面分析程序進行二次多項回歸擬合，獲得3 種工藝參數(shù)與存活率的二次多項式回歸模型方程：

存活率=73.336-2.25A+0.92B-1.91C+0.07AB+0.45AC+1.03BC-7.27A2-2.65B2-4.00C2。

表3 二次多項式模型的系數(shù)及其方差分析Table 3 Coefficients and ANOVA for the developed quadratic polynomial model

對存活率的二次模型進行方差分析，結(jié)果表明：二次項A2、C2對噴霧冷凍干燥制備M8 微膠囊的存活率影響極顯著（P<0.01），二次項B2對噴霧冷凍干燥制備M8 微膠囊的存活率影響顯著（P<0.05）。整體模型為極顯著（P<0.01）；失擬項的P 值為0.1576>0.05，說明失擬項不顯著，無失擬因素存在，表明試驗設(shè)計誤差小，回歸方程與實際情況基本符合，可用該回歸方程代替真實的試驗點做預(yù)測；變異系數(shù)C.V.（Coefficient of variation）為2.40%（小于5%），表明方程有良好的重現(xiàn)性。此方程模型的系數(shù)R2=0.9598，調(diào)整后Radj2=0.9081，說明該回歸方程與試驗數(shù)據(jù)的擬合度為90.81%，具有較高的可信度。綜上所述，此回歸方程可用于噴霧冷凍干燥法制備Probio-M8 微膠囊存活率的預(yù)測。

由圖4a 可知，存活率隨干燥溫度的增加而上升，40 ℃時達到最大值，之后溫度增加導(dǎo)致存活率下降。隨進料速度的增加，存活率變化不顯著，而干燥溫度起積極作用，二者對提高存活率有交互作用。圖4b 顯示干燥溫度與噴嘴直徑對存活率的交互影響，兩者的增加對提高存活率有促進作用，達到峰值后，兩者的增加導(dǎo)致存活率下降。由圖4c 可知，進料速度與噴嘴直徑交互作用曲面的曲率無明顯差別，兩者之間交互作用不顯著。

圖4 因素交互作用響應(yīng)面圖及相應(yīng)的等高線圖Fig.4 Response surface plot and contour map of interactive effects of various factors

響應(yīng)面試驗結(jié)果：干燥溫度40 ℃，進料速度15 mL/min，噴嘴直徑1.5 mm，此時預(yù)測存活率為73.79%。為了驗證結(jié)果的可靠性，采用優(yōu)化的工藝條件進行驗證，得到平均存活率為73.21%，與理論預(yù)測值相比無顯著差異（P＞0.05）。

2.3 工藝條件對顆粒形態(tài)的影響

噴霧冷凍干燥法制備的產(chǎn)品形態(tài)對其應(yīng)用有重要的影響，例如：品質(zhì)、流動性、溶解性、貯藏時間等。使用掃描電鏡（SEM）對不同工藝條件制備的微膠囊粉末進行形態(tài)觀察。圖5a～5i 顯示，總體形態(tài)都存在近似球狀和不規(guī)則形狀的顆粒及聚集顆粒，而且顆粒表面存在機械裂縫，不同工藝條件產(chǎn)生的形狀存在差異。由圖5a、5b、5c 可知，不同干燥溫度導(dǎo)致顆粒狀態(tài)差別較大，圖5a 顯示：30℃時干燥能量低，干燥時間大大增加，顆粒皺縮嚴重，多顆粒聚集、黏附在一起，類球體結(jié)構(gòu)損傷大，不能較好地包裹菌體；圖5c 顯示存在多種顆粒形態(tài)，部分顆粒皺縮聚集，其余顆粒表面存在塌陷與氣孔，相比圖5b 所示，40 ℃時產(chǎn)生的顆粒形態(tài)較為完整。不同噴嘴直徑產(chǎn)生的顆粒大小不同，如圖5d、5e、5f 所示，在相同干燥溫度下，使用1.5 mm的噴嘴制備微膠囊顆粒比其它2 種口徑的噴嘴更為完整，用其它噴嘴直徑制備的顆粒表面存在嚴重的皺縮與塌陷。圖5g、5h、5i 所示，不同進料速度對顆粒形成的影響不明顯。

圖5 不同工藝條件下SEM 觀察的微膠囊顆粒形態(tài)Fig.5 Morphology of microcapsule particles observed by SEM under different process conditions

噴霧冷凍干燥產(chǎn)品的形態(tài)受工藝參數(shù)與保護性載體配方的影響[19]。有研究表明噴霧冷凍干燥制備的微膠囊形態(tài)大多為球形，顆粒形態(tài)基本一致，部分形狀不規(guī)則是由制備過程中多種因素相互作用產(chǎn)生的[20-21]。顆粒的大小與形態(tài)取決于載體溶液配方與工藝參數(shù)[21]。顆粒的形狀受多種載體溶液復(fù)合影響，特定的脫脂乳濃度、糖類、溶液濃度帶來不規(guī)則的顆粒形狀，在工藝參數(shù)的影響下，顆粒表面出現(xiàn)變化及聚集現(xiàn)象[22-23]。這與許多研究結(jié)果一致，在冷凍干燥過程中大量的顆粒會聚集成團[24]。此外，載體溶液的組成影響溶液的性能、黏度、分散性等，最終導(dǎo)致顆粒形態(tài)的不同[23]。

2.4 干燥前、后脂肪酸的變化

細胞膜脂肪酸組成對細菌抵抗外界不良因素有重要影響。外界環(huán)境變化時，細菌細胞膜首先受到?jīng)_擊，細菌作出反應(yīng)，細胞膜脂肪酸組成發(fā)生改變，不飽和脂肪酸增加，維持細胞膜的流動性[25]。在噴霧冷凍干燥過程中，細胞膜的流動性與細胞膜中UFA/SFA（不飽和脂肪酸與飽和脂肪酸的比值）的比值有著緊密的聯(lián)系。表4列出干燥前、后菌體細胞膜脂肪酸組分的變化。

從表4數(shù)據(jù)可知，Probio-M8 細胞膜脂肪酸成分主要由C12：0（月桂酸）、C14：0（肉豆蔻酸）、C16：0（棕櫚酸）、C16：1（棕櫚油酸）、C18：0（硬脂酸）、C18：1w9c（油酸）、C18：3（亞麻酸）、C19cyc11（環(huán)丙烷脂肪酸）8 種脂肪酸組成，它們占總脂肪酸含量的87%以上，說明這8 種脂肪酸是M8 主要脂肪酸。此外，還有部分脂肪酸被檢出，因含量較低且不能穩(wěn)定，檢測出而未做比較分析。干燥前、后，飽和脂肪酸含量下降7.42%（P<0.05），不飽和脂肪酸含量上升10.53%（P<0.05）。其中，不飽和脂肪酸C16：1、C18：1w9c、C19cyc11在干燥后顯著上升（P<0.05）。有研究表明，菌體所處環(huán)境變化，產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)，菌體產(chǎn)生環(huán)丙烷脂肪酸，影響細胞膜的彈性和伸縮性，增強細胞膜的流動性和細胞應(yīng)激能力，與本研究中，在干燥后C19cyc11（環(huán)丙烷脂肪酸）含量上升相符合[26-27]。干燥后UFA/SFA 的比值提高了0.37，可能是菌體為維持正常的生理代謝，細胞進行適應(yīng)性改變，提高自身的存活率。

表4 噴霧冷凍干燥前、后菌體膜脂肪酸相對含量Table 4 Relative content of fatty acids in the bacterial cell membrane before and after spray freeze drying

2.5 微膠囊胃、腸液耐受能力分析

為使益生菌充分發(fā)揮作用，必須確定益生菌可以抵抗胃腸道中低pH、胃蛋白酶和膽鹽等抑菌物質(zhì)，確保益生菌活著進入胃腸道并發(fā)揮作用[13]。本試驗選用的菌株具有良好的胃、腸液耐受性。

由表5可知，試驗組微膠囊在經(jīng)模擬人體胃液3 h 與腸液8 h 消化后，活菌數(shù)保持的數(shù)量級不變，存活率達81.99%，與菌懸液對照組相比，存活率提高1.44%。微膠囊主要在人工胃液階段喪失部分活力，在人工腸液中存活率達93.93%，保持較好的耐受性。試驗表明，Probio-M8 經(jīng)處理，菌體本身具有的優(yōu)良的胃、腸液耐受特性沒有改變，微膠囊化后耐受性未顯著提高。胃、腸液耐受性的提高可能是保護性載體的作用，在噴霧冷凍干燥制備過程中，益生菌被載體包裹，降低進入胃腸道過程中胃酸、膽汁酸等帶來的侵害作用。有研究表明將殼聚糖摻入制劑中，可以顯著改善保護作用。在配方中使用腸溶性聚合物可以增強微膠囊技術(shù)對益生菌的保護能力。除了增加細胞的抗性外，這些聚合物還促進雙歧桿菌在人體上層腸道更好的釋放，并提高了這些微生物在模擬胃腸道條件下的存活率[28]。

表5 噴霧冷凍干燥制備微膠囊的胃、腸液耐受性Table 5 Tolerance of microencapsulated gastrointestinal fluid prepared by spray freeze drying

3 結(jié)論

噴霧冷凍干燥法制備乳雙歧桿菌Probio-M8微膠囊結(jié)果表明：干燥溫度對微膠囊品質(zhì)起決定作用，適宜的溫度會賦予微膠囊高存活率、低水分含量與水分活度，并能基本維持菌體原有結(jié)構(gòu)與基本功能，對貯藏品質(zhì)與功能產(chǎn)生積極影響。在干燥溫度40 ℃，噴嘴直徑1.5 mm，進料速度15 mL/min 條件下，以噴霧冷凍干燥法制備的Probio-M8微膠囊具有較為完整的顆粒形態(tài)及高存活率。噴霧冷凍干燥前、后菌體細胞膜不飽和脂肪酸含量顯著提高，菌體細胞做出適應(yīng)性改變，以保持菌體完整性。微膠囊化的益生菌M8 在模擬人工胃、腸液中具有良好的耐受能力，消化處理后存活率達81.99%。綜上，噴霧冷凍干燥法制備優(yōu)良微膠囊具有工業(yè)化應(yīng)用潛力。