呂燕 劉建利 李靖宇 候琳琳 孫敏 茍琪

（北方民族大學生物科學與工程學院，銀川 750021）

寧夏枸杞（Lycium barbarum L.）為茄科，枸杞屬，多年生落葉灌木，是典型藥食同源性植物，是寧夏、甘肅、青海、內(nèi)蒙古、新疆等少數(shù)民族地區(qū)脫貧的重要經(jīng)濟林品種，由于其極強耐旱、耐鹽堿、耐貧瘠和抗沙荒等環(huán)境適應能力，也是西北地區(qū)干旱區(qū)生態(tài)恢復、鹽堿地改良的首選土著植物［1］。枸杞之所以成為一種典型的生態(tài)和經(jīng)濟功能兼?zhèn)涞闹参?，其根際微生物在提高枸杞抗逆性方面具有重要的作用［2］。

叢枝菌根真菌（arbuscular mycorrhizal fungi，AMF）屬于真菌的Glomeromycotina亞門，是最普遍的植物共生微生物之一，借助其菌絲網(wǎng)絡，AMF幫助植物吸收營養(yǎng)物質(zhì)，提高對非生物脅迫和生物脅迫的抗性，從而影響植物的健康［3-4］，提高植物的生產(chǎn)力［5］。AMF在寧夏枸杞適應鹽脅迫、干旱脅迫中發(fā)揮重要作用。劉洪光［6］研究發(fā)現(xiàn)，接種Glomus versiforme能調(diào)節(jié)寧夏枸杞內(nèi)源激素緩解鹽脅迫抑制作用，促進枸杞根系的生長發(fā)育，保證枸杞對水分和養(yǎng)分的吸收；韋素貞［7］研究發(fā)現(xiàn)，接種Rhizophagus irregularis能增強干旱脅迫下寧夏枸杞抗氧化酶體系的活力、光合作用以及鉀離子通道基因的表達，促進植物對鉀離子的吸收；張海涵［8］研究發(fā)現(xiàn)接種AMF和DSE提高了寧夏枸杞耐旱能力。

AMF多樣性受氣候、植被和土壤理化性質(zhì)等環(huán)境因子變化的影響［9］。寧夏枸杞中也已開展相關研究，肖龍敏等［10］采用巢氏PCR-DGGE研究發(fā)現(xiàn)，寧夏枸杞根際AMF定殖和多樣性受種植年限的影響，且隨著種植年限增加多樣性存在下降趨勢；劉洪光［6］發(fā)現(xiàn)土壤肥力影響AM真菌多樣性指數(shù)，不同的宿主會影響AMF的群落結構。張海涵［8］采用巢氏PCR-DGGE研究不同品種和不同產(chǎn)區(qū)枸杞根際土壤AMF群落，發(fā)現(xiàn)季節(jié)和品種影響AMF 群落多樣性。唐明等［11］、劉洪光［6］亦采用濕篩傾析法研究寧夏枸杞根系土壤中AMF的孢子和孢子果分布，發(fā)現(xiàn)不同的采樣地點枸杞AMF α-多樣性指數(shù)和群落組成存在差異。

AMF不僅以菌絲網(wǎng)和孢子廣泛分布于植物根區(qū)土壤中，更重要的是侵入植物根系內(nèi)形成叢枝或泡囊等共生結構［12］。根系AMF由于占據(jù)獨特的生態(tài)位而具有特殊的功能，有研究表明，根系AMF群落與植物根區(qū)土壤AMF群落不同［13-14］。以上研究均以寧夏枸杞根區(qū)土壤中AMF為研究材料，而對根系AMF并未關注。

本研究以不同品種、不同產(chǎn)區(qū)寧夏枸杞根系為材料，采用AMF特異性引物擴增后，基于Illumina Miseq測序平臺進行測序，研究寧夏枸杞根系AMF多樣性及群落組成，探究品種與產(chǎn)區(qū)對AMF群落的影響以及AMF與果實有效成分相關性，為寧夏枸杞AMF菌劑開發(fā)奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 材料

4個寧夏枸杞品種的樹齡均為3年，采集其根系和果實樣品，每個品種3個生物學重復：“寧杞7號”品種（“N7”）3個重復（“JYAG”、“JYBG”、“JYCG”），“寧杞9號”品種（“N9”）3個重復（“JYGG”、“JYHG”、“JYTG”），“蒙杞1號”品種（“M1”）3個重復（“JYKG”、“JYLG”、“JYMG”），“蒙杞2號”品種（“M2”）3個重復（“JYPG”、“JYRG”、“JYSG”），均來自甘肅靖遠縣五合鄉(xiāng)田窩村。

4個不同寧夏枸杞產(chǎn)區(qū)根系和果實樣品，品種均為“寧杞7號”，樹齡均為3年，每個產(chǎn)區(qū)3個生物學重復：寧夏中寧產(chǎn)區(qū)（“Zhongning”）3個樣品（“ZNAG”、“ZNBG”、“ZNCG”），甘肅靖遠產(chǎn)區(qū)（“Gansu”）3個樣品（“JYAG”、“JYBG”、“JYCG”），寧夏海原產(chǎn)區(qū)（“Haiyuan”）3個樣品（“GYAG”、“GYBG”、“GYCG”），內(nèi)蒙古烏拉特產(chǎn)區(qū)（“inner mongolia”）3個樣品（“NMAG”、“NMBG”、“NMCG”）。

1.2 方法

1.2.1 樣品前處理 用自來水沖洗掉枸杞根上黏附泥土，再在無菌條件下用無菌水洗3次，用70%乙醇消毒4 min，無菌水沖洗3次，5%次氯酸鈉消毒5 min，無菌水沖洗3次，0.1%氯化汞消毒3 min，無菌水沖洗3次，置于滅菌濾紙上晾干，-70℃冷凍保存。

1.2.2 DNA抽提、18S rDNA序列擴增及高通量測序 參照基因組DNA提取試劑盒說明（MoBio Power Fecal ? DNA Isolation Kit）提取樣品總基因組DNA，Nanodrop2000檢測DNA純度和濃度；1%瓊脂糖凝膠檢測DNA完整性。采用2對特異性引物進行PCR擴增，第一輪擴增引物為AML1/AML2（5′-ATCAACTTTCGATGGTAGGATAGA-3′；5′-GAACCCAAACACTTTGGTTTCC-3′），PCR反應體系為5×FastPfu Buffer 4 μL、2.5 mmol/L dNTPs 2 μL、Forward Primer（5 μmol/L）0.8 μL、Reverse Primer（5 μmol/L）0.8 μL、FastPfu Polymerase 0.4 μL、BSA 0.2 μL、Template DNA 10 ng，補ddH2O至20 μL；擴增程序為95℃ 3 min；95℃ 30 s，55℃ 30 s，72℃ 45 s，32個循環(huán)；72℃ 10 min；第二輪擴增引物為AMV4.5NF/AMDGR（5′-AAGCTCGTAGTTGAATTTCG-3′；5′-CCCAACTATCCCTATTAATCAT-3′）［15］，擴增程序為95℃ 3 min；95℃ 30 s，55℃ 30 s，72℃ 45 s，30個循環(huán)；72℃ 10 min。將PCR產(chǎn)物進行文庫構建，Miseq測序：PE250平臺由上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司完成。

1.2.3 生物信息學分析 Miseq測序得到的PE reads首先根據(jù)overlap關系進行拼接，對序列質(zhì)量進行質(zhì)控和過濾，導入上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司交互式微生物多樣性云分析平臺（http：//www.i-sanger.com/），區(qū)分樣本后進行OTU按97%相似度聚類，按最小樣品序列數(shù)抽平樣本序列，形成新OTU表，選擇每個OTU的代表序列比對數(shù)據(jù)庫Maarjam081/AM［16］，將序列相似度≥97%，查詢序列對齊長度≥95%，e值<1e-50視為虛擬分子種（virtual taxa，VTs）［17］。

物種組成、物種差異、樣本比較等分析參數(shù)設置如下：合并低于1%的OTU；物種、樣本層級聚類方式用average，分組的樣本豐度計算用均值；多重檢驗校正fdr后檢驗Tukey；多組比較策略oneagainst-all。

1.2.4 枸杞鮮果中活性成分含量測定 甜菜堿含量測定采用雷氏鹽比色法［18］，總糖、總黃酮含量測定采用比色法［19］。

2 結果

2.1 α-多樣性分析

從不同品種和不同產(chǎn)區(qū)樣品中分別獲得132 972和130 948條有效序列，平均長度為237.63 bp和237.48 bp，所有樣品的coverage均達到1.00，測序深度能真實反應樣品中AMF物種多樣性（表1和表2）。衡量物種多樣性Shannon指數(shù)在品種間由高到低依次為“寧杞7號”>“寧杞9號”>“蒙杞1號”>“蒙杞2號”，而產(chǎn)區(qū)間無顯著性差異，Simpson指數(shù)反映出的顯著性差異結果和Shannon指數(shù)一致。反映樣品豐富度ACE指數(shù)中“寧杞7號”最高，而在“寧杞9號”、“蒙杞1號”與“蒙杞2號”之間無顯著差異，產(chǎn)區(qū)間無顯著性差異，Chao1指數(shù)反映出的多樣性大小和ACE指數(shù)一致。反映樣品均勻度Heip指數(shù)的與ACE指數(shù)顯著性差異一致。因此，品種影響寧夏枸杞根系AMF群落α-多樣性指數(shù)，“寧杞7號”最高，“蒙杞2號”最低，而產(chǎn)區(qū)無影響。

表1 不同品種樣品中AMF α-多樣性指數(shù)Table 1 α-diversity index of arbuscular mycorrhizal fungi in different varieties samples based on OTU

表2 不同產(chǎn)區(qū)樣品中AMF α-多樣性指數(shù)Table 2 AMF α-diversity index in samples from different cultivation regions

2.2 物種組成分析

所有寧夏枸杞根系樣品中共獲得49個AMF OTUs，屬于真菌界球囊菌亞門球囊菌綱3個目（球囊霉目、類球囊霉目和球囊菌綱未鑒定目）3個科（球囊霉科、類球囊霉科和球囊菌綱未鑒定科）3個屬23個種。

在屬水平，4個寧夏枸杞品種和4個不同產(chǎn)區(qū)AMF豐度>1%的屬有球囊霉屬（Glomus）、根孢囊霉屬（Rhizophagus）、近明球囊霉屬（Claroideoglomus）和未知屬（unclassified_c_Glomeromycetes）4種?！懊设?號”品種球囊霉屬（Glomus）所占比例高達97.9%，“寧杞9號”和“蒙杞2號”品種所占比例為66.7%，“寧杞7號”品種為79.7%；“蒙杞1號”品種根孢囊霉屬（Rhizophagus）所占比例為1.7%，“寧杞7號”和“蒙杞2號”品種所占比例為18.0%和33.3%；“寧杞9號”品種未知屬（unclassified_c_Glomeromycetes）所占比例為32.5%（圖1-A）?！昂Ｔ碑a(chǎn)區(qū)球囊霉屬（Glomus）所占比例為96.3%，“甘肅”產(chǎn)區(qū)為81.2%；根孢囊霉屬（Rhizophagus）僅在“甘肅”產(chǎn)區(qū)出現(xiàn)，占比為18.0%；“內(nèi)蒙古”產(chǎn)區(qū)和“中寧”產(chǎn)區(qū)只出現(xiàn)球囊霉屬（Glomus）和球囊菌綱未知屬（unclassified_c_Glomeromycetes）2種，占比分別為66.7%、33.3%和66.6%、32.9%（圖2-A）。球囊霉屬（Glomus）是4個品種和4個產(chǎn)區(qū)的優(yōu)勢屬，根孢囊霉屬（Rhizophagus）為“寧杞7號”、“蒙杞1號”和“蒙杞2號”品種和“甘肅”產(chǎn)區(qū)的次優(yōu)勢屬；所有屬在所有品種（圖1-B）和所有產(chǎn)區(qū)（圖2-B）樣品中無顯著性差異。

圖1 屬水平不同寧夏枸杞品種樣品中AMF相對分布圖Fig.1 Relative abundance of AMF genus among different varieties

圖2 屬水平不同寧夏枸杞產(chǎn)區(qū)樣品中AMF相對分布圖Fig.2 Relative abundance of AMF at genus level among cultivated regions

在種水平，4個品種寧夏枸杞根系AMF豐度>1%的有9個VTs和3個未鑒定的球囊霉菌（表3），4個產(chǎn)區(qū)根系AMF豐度>1%的有12個VTs和2個未鑒定的球囊霉菌（表4）。所有樣品共有種為Glomus.sp.VTX00113，Glomus.sp.VTX00113為“寧杞7號”、“蒙杞1號”品種的優(yōu)勢種；“寧杞9號”品種的優(yōu)勢種為Glomus.sp.VTX00156，為“寧杞7號”品種的次優(yōu)勢種，“蒙杞2號”品種AMF種最少，優(yōu)勢種為Rhizophagus intraradices VTX00100、Glomus.sp.VTX00113和Glomus.sp.VTX00393?！昂Ｔ碑a(chǎn)區(qū)和“甘肅”產(chǎn)區(qū)的優(yōu)勢種為Glomus.sp.VTX00113，次優(yōu)勢種為Glomus.sp.VTX00156；“內(nèi)蒙古”產(chǎn)區(qū)和“中寧”產(chǎn)區(qū)的優(yōu)勢種分別為未鑒定出的球囊霉菌unclassified_OTU32和unclassified_OTU39，次優(yōu)勢種分別為Glomus.sp.VTX00301和Glomus.sp.VTX00155。所有AMF種在4個寧夏枸杞品種根樣品中無顯著差異（圖3-A），Glomus.sp.VTX00113在4個寧夏枸杞產(chǎn)區(qū)根樣品中有顯著性差異（P<0.001））（圖3-B）。

圖3 種水平不同寧夏枸杞品種和產(chǎn)區(qū)樣品中AMF組間顯著差異圖Fig.3 Significant differences of AMF among different varieties and cultivated regions at species level

表3 種水平不同寧夏枸杞品種樣品中AMF相對分布表Table 3 Relative abundance of AMF among different varieties at species level

表4 種水平不同寧夏枸杞產(chǎn)區(qū)樣品中AMF相對分布表Table 4 Relative abundance of AMF among different cultivation regions at species level

不同品種樣品所得的OTUs數(shù)目分別為“寧杞7號”16個、“寧杞9號”12個、“蒙杞1號”9個和“蒙杞2號”5個，OTUs數(shù)目大小依次為“寧杞7號”>“寧杞9號”>“蒙杞1號”>“蒙杞2號”，“寧杞7號”品種OTUs數(shù)目最多（圖4-A）；不同產(chǎn)區(qū)樣品所得的OTUs數(shù)目分別為“中寧”產(chǎn)區(qū)22個、“海原”產(chǎn)區(qū)13個、“內(nèi)蒙古”產(chǎn)區(qū)10個和“甘肅”產(chǎn)區(qū)14個，OTUs數(shù)目大小依次為“中寧”產(chǎn)區(qū)>“甘肅”產(chǎn)區(qū)>“海原”產(chǎn)區(qū)>“內(nèi)蒙古”產(chǎn)區(qū)，4個產(chǎn)區(qū)共有OTUs有3個（圖4-B）。共現(xiàn)性網(wǎng)絡圖顯示OTU20為4個品種和4個產(chǎn)區(qū)的重要節(jié)點（圖5-A），4個產(chǎn)區(qū)相互關聯(lián)的OTUs數(shù)目更多（圖5-B），表明不同品種間AMF OTUs組成存在差異，“寧杞7號”和“寧杞9號”品種OTUs組成更相似，不同產(chǎn)區(qū)AMF在OTU水平組成更相似。

圖4 寧夏枸杞根系AMF OTU分布Venn圖Fig.4 Venn of AMF in L. barbarum roots at OTU level

圖5 寧夏枸杞根系AMF OTU和樣品共現(xiàn)性網(wǎng)絡圖Fig.5 Co-occurrence patterns of AMF in L. barbarum roots at OTU level

2.3 β-多樣性分析

基于OTU水平和Bray_Curtis距離的非度量多維尺度分析（non-metric multi-dimensional scaling，NMDS）統(tǒng)計結果顯示，不同寧夏枸杞品種根系AMF群落組成差異不大（圖6-A）；“海原”產(chǎn)區(qū)和“中寧”產(chǎn)區(qū)的寧夏枸杞根系AMF群落組成相似，而“內(nèi)蒙”產(chǎn)區(qū)和“中寧”產(chǎn)區(qū)存在差異（圖6-B）。PERMANOVA分析顯示，不同品種AMF群落組成（Bray_Curtis距離）無顯著差異（P=0.123），不同產(chǎn)區(qū)AMF群落組成差異顯著（P=0.001）。

圖6 基于Bray_Curtis距離AMF群落的NMDS排序圖Fig.6 NMDS ordination based on Bray_Curtis similarities of AMF community

2.4 果實有效成分含量與AMF類群關聯(lián)分析

在種水平，通過對寧夏枸杞根系豐度前30AMF與樣品果實中多糖（“PS”）、總黃酮（“fl”）、甜菜堿（“bet”）做相關性分析，所有樣品中AMF種與多糖含量無相關性。在不同品種樣品中，Glomus.sp.VTX00113與甜菜堿含量呈顯著正相關，unclassified_OTU14與甜菜堿含量呈顯著負相關，Glomus.sp.VTX00393與總黃酮含量呈顯著正相關，其余AMF種與總黃酮含量無相關性（圖7-A）；在不同產(chǎn)區(qū)樣品中，Glomus.sp.VTX00113與甜菜堿含量呈顯著正相關，Glomus.sp.VTX00247與總黃酮含量呈顯著正相關，其余AMF種與甜菜堿和總黃酮含量無相關性（圖7-B）。因此，寧夏枸杞果實多糖含量與AMF無相關性，Glomus.sp.VTX00113與甜菜堿含量顯著正相關，unclassified_OTU14僅在不同品種樣品中與甜菜堿含量顯著負相關，Glomus.sp.VTX00393僅在不同品種樣品中與總黃酮含量顯著正相關，Glomus.sp.VTX00247僅在不同產(chǎn)區(qū)樣品中與總黃酮含量顯著正相關。

圖7 基于種水平寧夏枸杞根系AMF與枸杞有效成分相關性heatmap圖Fig.7 Correlation heatmap of AMF and main active ingredients in L. barbarum roots at species level

3 討論

AMF作為植物共生菌，既定殖于宿主植物根系內(nèi)，又存在于環(huán)境土壤中［12］，研究AMF多樣性可選擇的研究材料主要有根系、孢子和土壤［20］。唐明等［11］用濕篩傾析法在寧夏鹽池和海原地區(qū)的枸杞（Lycium chinense）根系土壤中AMF的孢子和孢子果發(fā)現(xiàn)繞孢球囊霉（Glomus ambisporum）和單孢球囊霉（Glomus monosporum）；盛敏［21］采用濕篩傾析法鑒定西北鹽堿土生境中枸杞（Lycium chinense）根際土壤AMF孢子，發(fā)現(xiàn)6種AMF，包括薄壁原囊霉（Archaespora leptotichum）、地表多孢囊霉（Diversispora versiforme）、縮球囊霉（Glomus constrictum）、副冠球囊霉（Glomus coronatum）、根內(nèi)球囊霉（Glomus intraradices）和摩西球囊霉（Glomus mosseae），其中地表多孢囊霉（Diversispora versiforme）是優(yōu)勢種，球囊霉屬（Glomus）AMF占主要地位。本研究通過高通量測序研究不同品種和不同產(chǎn)區(qū)寧夏枸杞根系AMF，結果表明“寧杞7號”、“蒙杞1號”和“蒙杞2號”品種AMF的優(yōu)勢種均為Glomus.sp.VTX00113，“寧杞9號”品種AMF優(yōu)勢種為Glomus.sp.VTX00156；“海原”產(chǎn)區(qū)和“甘肅”產(chǎn)區(qū)根系AMF優(yōu)勢種為Glomus.sp.VTX00103，“內(nèi)蒙古”產(chǎn)區(qū)和“中寧”產(chǎn)區(qū)的優(yōu)勢種均為無法鑒定的球囊霉菌，可能是Marrjam數(shù)據(jù)庫中缺乏一些SSU序列導致。

利用分子生物學技術對寧夏枸杞AMF群落結構進行研究都集中在根際土壤，肖龍敏［22］采用巢氏PCR-DGGE對寧夏枸杞根際土壤研究發(fā)現(xiàn)，不同樹齡“寧杞1號”品種枸杞大部分序列與球囊霉屬（Glomus）序列相似，不同樣地（寧夏中寧六隊、長灘、上橋、硝池塘、七隊和寧夏農(nóng)林科學院枸杞研究所）“寧杞1號”品種枸杞優(yōu)勢AMF為球囊霉屬（Glomus）和管柄囊霉屬（Funneliformis），不同樣地（寧夏中寧六隊、長灘、上橋）“寧杞7號”品種枸杞優(yōu)勢 AMF為球囊霉屬（Glomus）；張海涵［8］采用巢氏PCR-DGGE對寧夏農(nóng)林科學院園林場不同枸杞品種（“寧杞1號”、“寧杞5號”和“檸杞菜1號”）根際土壤研究發(fā)現(xiàn)克隆測序的所有序列均屬于球囊霉屬（Glomus）；納小凡等［23］利用Illumina MiSeq測序?qū)ΨN植5年、10年和15年寧夏枸杞根際土壤微生物ITS基因的部分區(qū)域進行測序，發(fā)現(xiàn)AMF球囊霉屬比例均未發(fā)生顯著變化。本研究在4個不同品種和4個不同產(chǎn)區(qū)寧夏枸杞根系中分別發(fā)現(xiàn)24和35個AMF OTUs，結果表明寧夏枸杞根系中AMF含量較低，且優(yōu)勢屬均為球囊霉屬（Glomus），與根際土壤中研究結果一致。

選育寧夏枸杞品種時大多采用自然選優(yōu)、雜交育種和倍性育種等方法［24］，通過扦插繁育技術來擴大品種。本研究選取的4個寧夏枸杞品種均是從“寧杞1號”的突變株選育而來，內(nèi)蒙古選育的“蒙杞1號”和“蒙杞2號”育成時間最晚。本研究發(fā)現(xiàn)內(nèi)蒙古選育的 “蒙杞2號”品種AMF多樣性和豐富度最低，“寧杞7號”品種最高。Holland等［25］研究葡萄AMF群落時發(fā)現(xiàn)在葡萄品種之間AMF物種豐富度和群落結構沒有差異，本研究結果表明不同品種寧夏枸杞根系AMF群落結構不存在顯著差異，可能與物種有關，有待于后續(xù)實驗采用更多寧夏枸杞品種深入研究來確證。

我國北方農(nóng)田土壤中以球囊霉屬（Glomus）的頻度最高，農(nóng)田土壤中AMF優(yōu)勢種類明顯，土壤理化性質(zhì)對其影響不大［26］。生境特征和地理距離的變化可能導致AMF的地理分布格局不同［27］。AMF的分布不僅與植物種類、基因型有關，還與溫度、日照時間、水分、CO2濃度、O2分壓、氮沉降等氣候因子、土壤理化因子和耕作栽培措施等人類活動有關［28-29］。李越鯤等［30］采用MiSeq 高通量測序ITS區(qū)研究我國枸杞產(chǎn)區(qū)（寧夏中寧、寧夏興仁、新疆精河、青海格爾木）根際土壤真菌群落結構發(fā)現(xiàn)不同地區(qū)枸杞根際土壤真菌種群結構有一定差異。本研究發(fā)現(xiàn)“海原”和“靖遠”產(chǎn)區(qū)的根系AMF群落結構最相似，且優(yōu)勢AMF種相同；不同產(chǎn)區(qū)的寧夏枸杞根系AMF群落結構組成存在差異，這可能是由于不同產(chǎn)區(qū)不同的氣候、耕作方式以及形成不同的土壤理化等導致。

AMF會影響宿主植物次生代謝產(chǎn)物的積累。Al-Garni［31］研究表明，在鹽脅迫下AMF侵染會促進蘆葦中甜菜堿的積累，Amiri等［32］研究表明接種AMF會促進香葉天竺葵葉片中總黃酮和酚類物質(zhì)的含量，改善植株的化學生理特性。賀學禮等［33］研究發(fā)現(xiàn)接種Glomus mosseae后民勤絹蒿在應對水分脅迫中葉片總黃酮含量顯著升高，植物抗旱性增強。呂桂云［34］和賀超興等［35］研究發(fā)現(xiàn)，接種Glomus mosseae和Glomus versiforme能夠提高黃瓜和甜瓜果實中維生素C、可溶性糖和氨基酸的含量并增加果實產(chǎn)量。王銳竹等［36］研究發(fā)現(xiàn)，接種Rhizophagus irregularis不僅會提高番茄果實中可溶性固形物和番茄紅素的含量，還可改善植物根區(qū)環(huán)境，提高土壤有機質(zhì)含量。曹冠華等［37］研究發(fā)現(xiàn)，滇黃精根狀莖中多糖和總黃酮含量等主要功效成分與AMF、DSE定殖率呈正相關。AMF能影響宿主植物次生代謝產(chǎn)物積累的機理也開展部分研究。Mirjani等［38］和劉靈［39］研究發(fā)現(xiàn)，AMF通過提高類黃酮生物合成途徑（PAL）和酚酸生物合成途徑相關酶（C4H和4CL2）的基因表達，增加類黃酮和酚酸類物質(zhì)的生物合成，提高抗氧化活性。王林闖等［40］研究發(fā)現(xiàn)，甜椒接種Glomus mossea后葉綠素含量和光合速率提高，植株的光合產(chǎn)物相應增多。也有研究顯示AMF與植物建立共生關系后能夠擴大植物根系吸收面積［41］，提高AMF和DSE定殖率［42］，使植物表現(xiàn)出更強的抗脅迫能力和更好的生長發(fā)育狀況［43］。本研究發(fā)現(xiàn)Glomus.sp.VTX00393在不同品種中與總黃酮含量顯著正相關，Glomus.sp.VTX00247在不同產(chǎn)區(qū)中與總黃酮含量顯著正相關，Glomus.sp.VTX00113在所有產(chǎn)區(qū)和品種中顯示與甜菜堿含量顯著正相關，但AMF與寧夏枸杞果實多糖含量無顯著相關性。后續(xù)試驗需將通過高通量分子測序獲得的虛擬種和形態(tài)種對應，通過AMF孢子分離、人工擴繁、回接進一步驗證AMF與寧夏枸杞果實甜菜堿與總黃酮間的關系。

4 結論

品種影響寧夏枸杞根系AMF群落α-多樣性、優(yōu)勢種，但不影響β-多樣性，產(chǎn)區(qū)影響β-多樣性、優(yōu)勢種，不影響α-多樣性指數(shù)；AMF與枸杞果實甜菜堿、總黃酮含量相關，與多糖含量無相關性。