劉夢(mèng)燕，劉露，李素凱，李冬冬，陳笑宇，楊錦竹※，王偉

（1.吉林大學(xué)，吉林 長春 130012；2.吉林省食品檢驗(yàn)所，吉林 長春 130012）

本文中的郁李明薈片保健品是由郁李仁、決明子和蘆薈組成的復(fù)方片劑，從中醫(yī)學(xué)理論上來講，郁李仁歸脾、大腸小腸經(jīng)，可下氣行滯；決明子入肝腎、大腸經(jīng)，補(bǔ)腎益氣，利水通便；蘆薈治腸胃燥熱，可健胃下瀉，三者同用，具有益氣、利水和潤腸通便之效。蘆薈含有20多種蒽醌類物質(zhì)[1]，其中蘆薈苷和蘆薈大黃素是瀉下通便的主要成分，但用量過大可能會(huì)出現(xiàn)毒理安全性問題[2]。周宇紅等[3]實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，蘆薈食用安全性取決于其活性物質(zhì)蒽醌類瀉素（蘆薈苷）的含量。因此，對(duì)保健食品中的蘆薈苷進(jìn)行質(zhì)量控制十分必要。

目前，蘆薈苷的定量檢測(cè)方法包括紫外分光光度法、高效液相色譜法（HPLC）、質(zhì)譜法、薄層層析法、硼砂光度法、毛細(xì)管區(qū)帶電泳法及反向離子對(duì)色譜法[4-7]，HPLC法因其有高適應(yīng)性、高重復(fù)性等優(yōu)點(diǎn)，與其他色譜相比具有顯著優(yōu)越性，被廣泛應(yīng)用于藥品檢驗(yàn)、保健食品等領(lǐng)域。但郁李明薈片含中藥成分復(fù)雜，用已有的HPLC方法進(jìn)行含量測(cè)定分離效果極不理想，為對(duì)郁李明薈片中蘆薈苷含量進(jìn)行控制，保證該保健品的有效性和安全性，本試驗(yàn)建立了蘆薈苷含量測(cè)定的新方法，并進(jìn)行其方法學(xué)研究，結(jié)果表明該法準(zhǔn)確高效，重現(xiàn)性高，試樣處理簡(jiǎn)單，可作為該品中蘆薈苷的質(zhì)量控制依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器設(shè)備

Acchrom S3000型高效液相色譜儀;WondaSil C18 Superb（250 mm 4.6 mm，5m）色譜柱；KQ-250DE型數(shù)控超聲波清洗器；Sartorius BT 25s電子天平。

1.2 試劑與材料

蘆薈苷對(duì)照品（批號(hào)為110787-201206中國藥品生物制品檢定所）；郁李明薈片為實(shí)驗(yàn)室自制（郁李仁、蘆薈和決明子按5:5:2的比例配比，輔料為玉米淀粉、硬脂酸鎂。規(guī)格為0.6 g/片，每片含0.48 g蘆薈生藥。食用方法為每日2次，2片/次）；甲醇（色譜純，賽默飛世爾科技有限公司）；磷酸（色譜純，天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所）；水為試驗(yàn)室雙蒸水；其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜填充柱：（WondaSil C18 Superb柱，4.6 mm 250 mm，5m）；流動(dòng)相：甲醇-0.1%磷酸水溶液（37:63）；檢測(cè)波長：355 nm；流速：1 mL/min；柱溫：25℃；進(jìn)樣量：20L。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 取蘆薈苷對(duì)照品適量，精密稱定，加冰醋酸-甲醇（1:100）制成每1 mL含0.2 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取郁李明薈片適量，研成粉末，過五號(hào)篩，精密稱定0.2 g，置25 mL的量瓶中，加冰醋酸-甲醇（1:100）適量，超聲處理（200 w，40 kHz）40 min，取出后過濾，放置至室溫，加冰醋酸-甲醇（1:100）溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過即得供試品溶液。

2.2.3 不含蘆薈的陰性對(duì)照溶液的制備 取除蘆薈以外的兩種藥材進(jìn)行提取干燥，相同方法制粒。將所得顆粒按“2.2.2”所述方法進(jìn)行處理，得到不含蘆薈陰性對(duì)照溶液。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 專屬性試驗(yàn) 分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液、不含蘆薈陰性對(duì)照溶液注入色譜儀，記錄色譜圖。在蘆薈苷對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，樣品呈現(xiàn)保留時(shí)間一致的色譜峰，樣品中蘆薈苷的色譜峰與其他色譜峰分離度良好，且陰性樣品溶液在對(duì)照品峰位置無干擾峰，說明該方法專屬性良好，見圖1。

圖1 HPLC圖譜Fig.1 HPLC chromatograms

2.3.2 線性關(guān)系考察 將“2.2.1”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液用冰醋酸-甲醇（1:100）逐步稀釋，得到濃度分別為0.054 4 mg/mL、0.108 8 mg/mL、0.163 2 mg/mL、0.2176 mg/mL、0.272 0 mg/mL和0.326 4 mg/mL的蘆薈苷對(duì)照品溶液，依次吸取各溶液20L，按照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件注入色譜儀，記錄峰面積，以蘆薈苷對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖2。得到回歸直線方程為y=27545x+292.57，R2=0.9995表明蘆薈苷在0.054 4~0.326 4 mg/mL范圍內(nèi)線性良好。

圖2 蘆薈苷標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.2 The standard curve of aloin

2.3.3 精密度試驗(yàn) 將“2.2.1”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液，按照時(shí)間順序連續(xù)進(jìn)樣6次，每次吸取20L，記錄峰面積。求得峰面積的RSD值為0.68%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.3.4 重現(xiàn)性試驗(yàn) 按照“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液制備的方法對(duì)6份郁李明薈片的樣品進(jìn)行處理，取各溶液20L，注入HPLC儀器中進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算含量。結(jié)果表明，6份郁李明薈片的平行樣中所含的蘆薈苷含量平均值為21.33 mg/g，RSD為0.63%（n=6），說明該方法的重現(xiàn)性良好。

2.3.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一份供試品溶液，按照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件在0、2、4、8、12、24 h時(shí)進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，得到RSD為0.40%（n=6），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.6 加樣回收試驗(yàn) 精密稱取6份郁李明薈片的藥粉，計(jì)算其中蘆薈苷含量，再各自加入等量的蘆薈苷對(duì)照品，按照“2.2.2”項(xiàng)下的供試品溶液制備的方法進(jìn)行處理，吸取20L進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算各樣品中蘆薈苷的實(shí)測(cè)值，計(jì)算平均回收率為97.16%，RSD為1.87%（n=6）（表1），表明該測(cè)定方法回收率良好。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果Table 1 The result of the recovery test

2.4 樣品含量測(cè)定

從3批郁李明薈片中各取3個(gè)平行樣，按照“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液制備的方法進(jìn)行處理，分別吸取20L，注入HPLC儀器中進(jìn)行測(cè)定，3個(gè)批次平行樣平均值分別為21.05 mg/g、21.00 mg/g和21.36 mg/g。3批含量RSD值為0.92%。表明該品蘆薈苷含量穩(wěn)定，均一性良好。

3 討論

在供試品處理方法的選擇上，本試驗(yàn)同時(shí)用甲醇超聲和冰醋酸-甲醇（1:100）超聲處理供試品，在同一色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣對(duì)比發(fā)現(xiàn)，冰醋酸-甲醇（1:100）超聲處理方法的供試品穩(wěn)定性較好，這可能與蘆薈苷在酸性條件下更穩(wěn)定有關(guān)。另外，供試品超聲后對(duì)比了文獻(xiàn)中過濾和離心（3 000 r,5 min）兩種處理方法[8]，進(jìn)液相后發(fā)現(xiàn)并無明顯差別，故選用相對(duì)簡(jiǎn)便的過濾處理方法。在流動(dòng)相的選擇上，以藥典方法乙腈-水（25:75）作為流動(dòng)相時(shí)，供試品和對(duì)照品都有拖尾現(xiàn)象且分離度不好。查閱文獻(xiàn)，重新選取甲醇-0.1%磷酸水作為流動(dòng)相[9]，經(jīng)過不斷調(diào)整，最終確定甲醇-0.1%磷酸水（37:63）為流動(dòng)相，提高了蘆薈苷的分離度，峰形良好。

蘆薈中含有多種蒽醌類成分，其中蘆薈苷含量較多，是蘆薈的代表性成分也是瀉下通便的主要功效性成分[10]。本試驗(yàn)采用HPLC法對(duì)郁李明薈片中的蘆薈苷進(jìn)行含量測(cè)定和方法學(xué)研究，建立了蘆薈苷含量測(cè)定的新方法，結(jié)果顯示蘆薈苷在0.054 4~0.326 4 mg/mL范圍內(nèi)線性良好，回歸直線方程為y=27545x+292.57，R2=0.9995；重現(xiàn)性RSD值為0.63%（n=6），重現(xiàn)性良好；平均回收率為97.16%，RSD為1.87%（n=6），表明該方法回收率良好。綜上可知該方法穩(wěn)定可靠，可用于蘆薈苷的含量測(cè)定和質(zhì)量控制。