饒鐳，羅娟，李保同

(江西農(nóng)業(yè)大學(xué) 農(nóng)學(xué)院，江西 南昌 330045)

雙環(huán)磺草酮(BZB)屬三酮類除草劑[1]，已于2018年在中國(guó)正式登記[2]，被廣泛用于控制一年生雜草、莎草、禾本科雜草和闊葉雜草[3-8]，需在淹水的稻田中施用，并迅速水解形成具有除草活性的雙環(huán)磺草酮水解產(chǎn)物(BH)[9]。BH具有較高的水解穩(wěn)定性，且在水中的溶解度隨pH的升高而增大[9-10]。目前有關(guān)BZB原藥和制劑的分析方法已有研究報(bào)道[11-12]，而有關(guān)其水解產(chǎn)物的常量分析方法還未見報(bào)道。本文建立了一種測(cè)定BH中有效成分含量的分析方法，使用便捷，檢測(cè)效果好，可用于BH的定量分析。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 試劑與儀器

BH標(biāo)準(zhǔn)品(≥98%)、BH原藥(80.2%)均由江西農(nóng)業(yè)大學(xué)理學(xué)院提供；甲醇、磷酸均為色譜純；超純水。

Agilent 1260高效液相色譜儀；InfinityLab Poroshell 120 EC-C18色譜柱(4.6 mm×150 mm，4 μm)；Eppendorf紫外分光光度計(jì)；ATX224萬(wàn)分之一天平；FST-JY超純水機(jī)；KQ2200E超聲波清洗器；0.22 μm 有機(jī)濾膜。

1.2 溶液配制

1.2.1 BH標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 用天平準(zhǔn)確稱取BH 0.050 0 g(精確至0.000 1 g)標(biāo)準(zhǔn)品，加入 50 mL 的容量瓶中，用甲醇溶解，超聲水浴助溶，至BH完全溶解，在室溫下冷卻，用甲醇定容后搖勻，得到BH(1 000 mg/L)標(biāo)準(zhǔn)母液，冰箱冷藏備用。色譜測(cè)定前將BH母液稀釋成50 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

1.2.2 BH試樣溶液的配制 準(zhǔn)確稱取BH 0.062 0 g(精確至0.000 1 g)原藥樣品，溶液配制方法同BH標(biāo)準(zhǔn)母液的配制。

1.3 液相檢測(cè)條件

流動(dòng)相使用體積比為55∶45的甲醇-磷酸水(0.2%)體系，流動(dòng)速度0.83 mL/min，色譜柱溫度為40 ℃，每針進(jìn)樣體積為10 μL，檢測(cè)波長(zhǎng)286 nm，BH標(biāo)準(zhǔn)品的相對(duì)保留時(shí)間為5.423 min。

1.4 色譜測(cè)定

用2.5 mL一次性注射器將BH標(biāo)準(zhǔn)品和試樣溶液(均為50 mg/L)通過(guò)0.22 μm有機(jī)濾膜注入到進(jìn)樣瓶中，待G1311C四元泵的壓力穩(wěn)定和G1315D全波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器的基線平穩(wěn)后，在液相色譜檢測(cè)條件下，對(duì)同一BH標(biāo)準(zhǔn)品溶液連續(xù)多次進(jìn)樣，至相鄰兩次進(jìn)樣BH峰面積的變化值在1.5%內(nèi)時(shí)，采用外標(biāo)定量法，根據(jù)BH標(biāo)樣→BH試樣→BH標(biāo)樣→BH試樣的進(jìn)樣順序?qū)H進(jìn)行分離檢測(cè)，BH的色譜圖見圖1。

圖1 BH色譜圖Fig.1 BH chromatogram

使用HPLC對(duì)BH標(biāo)準(zhǔn)品和試樣溶液進(jìn)行多次檢測(cè)，峰面積取平均值，試樣溶液中BH的質(zhì)量分?jǐn)?shù)W2(%)按照如下公式計(jì)算：

式中A1和A2——分別為HPLC檢測(cè)的BH標(biāo)樣和試樣的均值峰面積；

M1和M2——分別為稱量的BH標(biāo)準(zhǔn)品和原藥的質(zhì)量，g；

W1——BH標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

將BH的標(biāo)準(zhǔn)母液使用甲醇稀釋成1 mg/L標(biāo)樣溶液，在紫外分光光度計(jì)上進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，得到BH的吸收光譜圖，見圖2。

圖2 BH紫外吸收譜圖Fig.2 BH UV absorption spectrum

由圖2可知，在286 nm處BH有最大吸收。在此波長(zhǎng)下對(duì)BH進(jìn)行色譜分析，發(fā)現(xiàn)標(biāo)樣和試樣中的雜質(zhì)不影響B(tài)H的測(cè)定。因此，選定286 nm作為檢測(cè)BH的波長(zhǎng)。

2.2 色譜條件的優(yōu)化

首先，對(duì)乙腈-水和甲醇-水體系作為流動(dòng)相進(jìn)行測(cè)試，發(fā)現(xiàn)使用乙腈-水體系為BH的流動(dòng)相時(shí)，存在溶劑效應(yīng)，BH色譜峰前沿嚴(yán)重；采用甲醇-水體系作流動(dòng)相時(shí)溶劑效應(yīng)較小，但色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間在2 min之內(nèi)，峰形不勻稱。因此，反復(fù)測(cè)試不同體積比的甲醇-甲酸水和甲醇-磷酸水作為流動(dòng)相以及調(diào)節(jié)流速對(duì)保留時(shí)間和色譜峰峰形的影響，發(fā)現(xiàn)當(dāng)流動(dòng)相使用體積比為55∶45的甲醇-磷酸水(0.2%)體系、流動(dòng)的速度為0.83 mL/min，色譜柱的檢出溫度為40 ℃時(shí)，BH的保留時(shí)間適中，峰形對(duì)稱，雜質(zhì)干擾較小。因此，確定此條件作為BH檢測(cè)的色譜條件。

2.3 線性相關(guān)性和檢出限的測(cè)定

BH標(biāo)準(zhǔn)溶液用甲醇進(jìn)行逐步稀釋，配制成0.01～50 mg/L的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，定量分析采用1.3節(jié)中的色譜條件，用Excel 2013對(duì)所測(cè)得數(shù)據(jù)進(jìn)行線性擬合，結(jié)果見圖3。得到BH的線性回歸方程為y=23.423x+0.785 9，R2=1，說(shuō)明BH在質(zhì)量范圍濃度在0.01～50 mg/L內(nèi)的線性相關(guān)性良好。

圖3 BH標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.3 BH standard curve

根據(jù)液相檢測(cè)器產(chǎn)生的響應(yīng)信號(hào)是噪聲值的3倍 值(即S/N=3)來(lái)估算BH的最小檢出限(LOQ)，得到BH的LOQ為4 μg/L。

2.4 方法精密度的測(cè)定

BH原藥樣品稱量5份，配制BH的試樣溶液，并將BH的質(zhì)量濃度稀釋至線性范圍內(nèi)，定量分析按照1.3節(jié)中的色譜條件進(jìn)行，結(jié)果見表1。

表1 BH精密度測(cè)定結(jié)果Table 1 BH precision measurement results

由表1可知，計(jì)算后得到BH的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為80.224%，標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.139，變異系數(shù)為0.173%，小于CIPAC中規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)。

2.5 方法準(zhǔn)確度的測(cè)定

方法準(zhǔn)確度采用加標(biāo)回收率進(jìn)行評(píng)價(jià)，分別稱取5份已知質(zhì)量的BH原藥樣品于50 mL容量瓶中，每個(gè)容量瓶中分別添加一定質(zhì)量的BH標(biāo)準(zhǔn)品，色譜純甲醇溶解、定容，并將BH的質(zhì)量濃度稀釋至線性范圍內(nèi)，定量分析按照1.3節(jié)中的色譜條件進(jìn)行，結(jié)果見表2。

表2 BH準(zhǔn)確度測(cè)定結(jié)果Table 2 BH accuracy measurement results

由表2可知，BH的加標(biāo)回收率為99.44%～101.20%。BH平均加標(biāo)回收率值為100.35%。

3 結(jié)論

建立了一種利用高效液相色譜檢測(cè)BH原藥的定量分析方法。色譜柱溫度為40 ℃，流動(dòng)相使用體積比為55∶45的甲醇-磷酸水(0.2%)體系，流動(dòng)的速度為0.83 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)286 nm。在此色譜條件下，建立的BH分析方法具有使用便捷、保留時(shí)間適中、峰形對(duì)稱，且方法的精密度及準(zhǔn)確度高，可用于BH原藥的質(zhì)量檢測(cè)。