陶文學(xué)，陳來秀，李正國，席彩霞，曾多，劉雪梅，李博，魏婷

（甘肅省武威腫瘤醫(yī)院呼吸內(nèi)科，甘肅 武威 733000）

呼吸道病原菌主要包括金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、肺炎克累伯菌等，目前，其導(dǎo)致的感染已成為全世界主要致死性因素之一。世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示，呼吸道病原菌感染（5.9%）在世界十大病死原因中位列第三，僅次于冠心病與腦卒中，增加家庭和社會的負(fù)擔(dān)[1-3]。呼吸道病原菌感染表現(xiàn)癥狀基本相似，單純依據(jù)癥狀難于有效準(zhǔn)確診斷。目前，臨床鑒定病原菌的方法主要依靠細(xì)菌培養(yǎng)法，但獲得結(jié)果需3～5 d，易錯過控制感染的最佳時期[4-5]。晶芯呼吸道病原菌酸檢測可一步完成對靶基因的擴增和檢測。基于此，本研究選取2019年4月至2020年1月本院收治的84例疑似下呼吸道感染患者作為研究對象，探討晶芯呼吸道病原菌核酸檢測在臨床中的應(yīng)用價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2019年4月至2020年1月本院收治的84 例疑似下呼吸道感染的患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：研究經(jīng)本院倫理委員會批準(zhǔn)；患者均對本研知情并自愿簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：咳出、吐出的痰液不合格者；依從性差者。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑 巧克力瓊漿平板、血瓊脂平板、革蘭染液（青島海博生物科技有限公司）、晶芯呼吸道病原菌核酸檢測試劑盒（上海紀(jì)寧實業(yè)有限公司）、全自動細(xì)菌鑒定儀（蘇州安創(chuàng)儀器有限公司，型號：Phoenix100）、恒溫擴增微流控芯片核酸分析儀（成都博奧晶芯生物科技有限公司，型號：Dhelix 1610）。

1.2.2 檢測方式 使用魚躍吸痰器（北京眾思康科技發(fā)展有限公司），由專業(yè)護士指導(dǎo)患者配合吸取呼吸道深部痰液，采集后送至檢驗科微生物室。晶芯呼吸道病原菌核酸檢測：利用熒光染料摻入法進行實時熒光檢測，在具有鏈置換功能的聚合酶（在65 ℃恒溫條件下可發(fā)生反應(yīng)）作用下，擴增靶核酸會呈S形曲線擴增，進而對靶基因進行檢測與擴增。常規(guī)痰培養(yǎng)檢：將痰液標(biāo)本接種于巧克力瓊漿平板或血瓊脂平板，于37 ℃環(huán)境下孵育24 h，選出優(yōu)勝菌群，革蘭染色鏡下形態(tài)鑒定，上機鑒定。

1.3 觀察指標(biāo) 比較兩種檢測方式的樣本檢出陽性率，并分析兩種檢測方式對8 種傳統(tǒng)可培養(yǎng)細(xì)菌的檢出一致性。根據(jù)陽性判斷值結(jié)合Tp值判讀結(jié)果，Tp值為晶芯呼吸道病原菌核酸檢測完成后軟件將輸出S 形擴增曲線快速增長的首個拐點時刻減去原點時刻。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料以“”表示，比較采用t檢驗，計數(shù)資料用[n（%）]表示，比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種檢測方法結(jié)果比較 兩種檢查方法陽性率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，以痰培養(yǎng)鑒定為金標(biāo)準(zhǔn)，晶芯呼吸道病原菌核酸檢測的靈敏度為96.01%（65/67），特異性為76.47%（13/17），見表1。

表1 兩種檢測方法結(jié)果比較Table 1 Comparison of results of the two detection methods

2.2 兩種檢測方法檢測結(jié)果一致性分析 8 種傳統(tǒng)可培養(yǎng)細(xì)菌在84例樣本檢測中有64（76.19%）例2種檢測方法結(jié)果一致，分別為肺球鏈球菌20例（23.81%），金黃色葡萄球菌19例（22.62%），大腸埃希菌8 例（9.52%），肺炎克雷伯菌7 例（8.33%），銅綠假單胞菌5 例（5.95%），鮑曼不動桿菌2 例（2.38%），嗜麥芽窄食單胞菌0 例（0.00%），流感嗜血桿菌3例（3.57%）。

3 討論

據(jù)統(tǒng)計，全球33%的病死是由感染性疾病引發(fā)，其中呼吸道感染居各種感染性疾病首位，是威脅人類生命安全的重要疾病之一[6-7]。呼吸道感染的主要病原體為細(xì)菌，其種類繁多，若僅采取經(jīng)驗性抗菌治療，極易造成耐藥菌群增加，而需及時確定感染細(xì)菌種類，并予針對性治療，因此，確定病原體對呼吸道感染臨床治療具有重要意義[8--13]。

常規(guī)痰培養(yǎng)檢查是臨床確診病原體常見操作，但傳統(tǒng)培養(yǎng)檢測周期較長，操作繁瑣，在培養(yǎng)中可能被污染，導(dǎo)致結(jié)果準(zhǔn)確性較低[14]。晶芯呼吸道病原菌核酸檢測技術(shù)是一種新的痰標(biāo)本病原體種類檢測技術(shù)，操作簡單、檢測成本低、敏感度高，在63 ℃恒溫裝置中，將試劑與待測標(biāo)本DNA 共同放置1 h左右便可判斷擴增情況，從痰液標(biāo)本處理到報告結(jié)果全過程僅需2 h，顯著縮短了檢驗周期[15-16]。本研究結(jié)果表明，晶芯呼吸道病原菌核酸檢測陽性率略高于痰培養(yǎng)鑒定，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義，表明兩者檢測結(jié)果差異不顯著，但傳統(tǒng)的痰培養(yǎng)則需將痰標(biāo)本在保溫箱中孵育＞24 h，因此，在相同檢出率的前提下應(yīng)選擇更簡單、快捷的晶芯呼吸道病原菌核酸檢測[17]。同時，以痰培養(yǎng)鑒定為金標(biāo)準(zhǔn)，晶芯呼吸道病原菌核酸檢測的靈敏度為96.01%，特異性為76.47%，表明晶芯呼吸道病原菌核酸檢測具有較高的靈敏度與特異性。本研究結(jié)果顯示，兩種檢測方法一致性較高，其中肺球鏈球菌與金黃色葡萄球菌的陽性率最高，均＞22%，Yousaf S等[18]研究顯示，恒溫擴增芯片法檢出病原體56株，培養(yǎng)法檢出僅11例，即恒溫擴增芯片法的靈敏度顯著更高，可有效反映呼吸道感染的真實情況，可能原因是痰培養(yǎng)技術(shù)中痰標(biāo)本的保存與擴增過程受各種條件的限制，從而導(dǎo)致未檢測到真正的病原體[19-20]。

綜上所述，晶芯呼吸道病原菌核酸檢測方法較常規(guī)痰培養(yǎng)檢測法，操作簡單，可快速一次性檢出全部下呼吸道病源菌，且具有較高的特異性、敏感度與檢出率。