顏赟坤，柳建軍，陳浩棟，何光陽,李健維

（1.廣東醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院泌尿外科，廣東 湛江 524000；2.雷州市人民醫(yī)院泌尿外科，廣東 湛江 524200）

前列腺癌是男性惡性腫瘤中發(fā)病率較高的腫瘤之一[1-3]。目前主要采用病理檢查確診前列腺癌，但部分惡性前列腺疾病之間的差異較小，單純依賴HE染色切片易造成臨床鑒別診斷困難。因此，探尋高特異性、高敏感性的分子對于早期診斷及治療具有重要意義，目前對前列腺癌早期篩查主要依靠血清前列腺特異性抗原（PSA）、前列腺特異性膜抗原（PSMA）以及前列腺干細(xì)胞抗原（PSCA）等，但由于這些血清學(xué)指標(biāo)存在一定的弊端，特異性和敏感性并不高[4-5]。采取細(xì)針穿刺活檢進(jìn)行病理診斷雖然對于診斷前列腺疾病至關(guān)重要，但由于活檢組織較小，對良惡性前列腺疾病的診斷價值較低。本研究旨在探討CK34βE12、CK5/6、P63及P504s這4項(xiàng)項(xiàng)指標(biāo)在前列腺良惡性病變中的表達(dá)及臨床意義，為臨床上提高診斷精確性提供參考依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2013年1月至2018年3月本院收治的60例前列腺手術(shù)切除及穿刺活檢的標(biāo)本，隨機(jī)分為前列腺惡性病變組（n=40）和前列腺良性病變組（n=20）。惡性前列腺病變組年齡52～88歲，平均（70.00±6.13）歲；良性前列腺病變組年齡59～87歲，平均（73.00±3.93）歲。兩組患者臨床資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，具有可比性。惡性前列腺病變組采用Gleason評分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)一步分為低危組（2～6分，n=15）、中危組（7分，n=15）和高危組（8～10分，n=10）。良性前列腺病變組根據(jù)腺體萎縮情況分為腺體完全性萎縮組（n=15）和腺體部分性萎縮組（n=5）。所有患者均對本研究知情同意，并自愿簽署知情同意書。本研究已通過醫(yī)院倫理委員會審核批準(zhǔn)。

1.2 方法 所有入選對象均進(jìn)行B 超檢測前列腺體積，注意采集前列腺組織標(biāo)本，保存待檢；患者術(shù)前檢測血清前列腺特異性抗原（PSA），采用HE 染色對前列腺癌組織進(jìn)行常規(guī)的病理檢查，并對前列腺癌標(biāo)本進(jìn)行Gleason評分，此外，采用免疫組織化學(xué)法檢測組織標(biāo)本的CK34βE12、CK5/6、P63 蛋白及P504s 的表達(dá)情況。本研究所用小鼠抗人CK34βE12單克隆抗體、小鼠抗人P504s單克隆抗體、小鼠抗人CK5/6單克隆抗體以及小鼠抗人P63單克隆抗體、免疫組化檢測試劑盒均等均購自北京中衫金橋生物技術(shù)有限公司，采用已知產(chǎn)生陽性的抗體組織標(biāo)本作為陽性對照，采用磷酸鹽緩沖液（PBS）作為陰性對照。

1.2.1 陽性與陰性的染色判定標(biāo)準(zhǔn) 使用顯微鏡觀察組織標(biāo)本切片，陽性染色為出現(xiàn)棕黃色顆粒，并觀察各抗體的表達(dá)部位，即P63在細(xì)胞核中表達(dá)并被著色，CK34βE12、CK5/6以及P504s在細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)并被染色，在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核等特定位置中觀察到棕黃色顆粒即為陽性染色。

1.2.2 陽性與陰性分級標(biāo)準(zhǔn) CK34βE12：陰性（-）表示基底細(xì)胞未觀察到染色的細(xì)胞；弱陽性（+）表示可以觀察到少數(shù)基底細(xì)胞著色但著色不連續(xù)、間斷分布；強(qiáng)陽性（++）表示基底細(xì)胞著色但著色不連續(xù)、間斷分布；極強(qiáng)陽性（+++）表示基底細(xì)胞著色并連續(xù)且明顯。將強(qiáng)陽性（++）和極強(qiáng)陽性（+++）為CK34βE12表達(dá)的陽性數(shù)值。

1.2.3 P63、CK5/6 及P504S 通過計算，顯微鏡下可清晰觀察到的棕黃色顆粒表達(dá)的細(xì)胞數(shù)/細(xì)胞總數(shù)×100%作為陰性與陽性的分級標(biāo)準(zhǔn)：陰性（-）表示未觀察到染色細(xì)胞；弱陽性（+）表示觀察到的陽性細(xì)胞數(shù)＜10%；強(qiáng)陽性（++）表示觀察到陽性細(xì)胞數(shù)＜50%且＞10%；極強(qiáng)陽性（+++）即表示觀察到的陽性細(xì)胞數(shù)＞50%。將強(qiáng)陽性（++）和極強(qiáng)陽性（+++）為P63、CK5/6及P504S表達(dá)的陽性數(shù)值。

HE切片和免疫組化切片制作完成后應(yīng)由3名本院病理醫(yī)師綜合做出決策，意見不一致時可繼續(xù)邀請1名病理醫(yī)師進(jìn)一步進(jìn)行評定，＞50%意見為最終參考意見。

1.3 觀察指標(biāo) 比較惡性前列腺病變組與良性前列腺病變組CK34βE12、CK5/6、P63以及P504s表達(dá)；分析惡性前列腺病變組分級與P504s 表達(dá)強(qiáng)度的關(guān)系；良性前列腺組與CK34βE12、CK5/6和P63表達(dá)強(qiáng)度的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 22.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料用例數(shù)（n）表示，比較采用Z檢驗(yàn)，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 惡性前列腺病變組與良性前列腺病變組CK34βE12、CK5/6、P63以及P504s表達(dá)比較 CK34βE12在惡性前列腺病變組中呈低表達(dá)，而在良性前列腺病變組中呈高表達(dá)；CK5/6在惡性前列腺病變組中呈低表達(dá)，而在良性前列腺病變組中呈高表達(dá)；P63在惡性前列腺病變組中呈低表達(dá)，而在良性前列腺病變組中呈高表達(dá)；P504s在惡性前列腺病變組中呈高表達(dá)，而在良性前列腺病變組中呈低表達(dá)；兩組CK34βE12、CK5/6、P63 以及P504s 表達(dá)情況比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 惡性前列腺病變組與良性前列腺病變組CK34βE12、CK5/6、P63以及P504s表達(dá)情況比較Table 1 Comparison of CK34βE12,CK5/6,P63 and p504S expression between the malignant prostate disease group and benign prostate disease group

2.2 惡性前列腺病變組分級與P504s 表達(dá)強(qiáng)度的關(guān)系 低危組、中危組、高危組P504s 表達(dá)強(qiáng)度比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；低危組表達(dá)強(qiáng)度明顯低于高危組和中危組（P＜0.05），但中危組和高危組P504s表達(dá)強(qiáng)度比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，見表2。

表2 惡性前列腺病變組分級與P504s表達(dá)強(qiáng)度的關(guān)系Table 2 Relationship between the grade of malignant prostate disease group and the expression intensity of P504s

2.3 良性前列腺組與CK34βE12、CK5/6 和P63 表達(dá)強(qiáng)度的關(guān)系 腺體部分性萎縮組和腺體完全性萎縮組CK34βE12、CK5/6以及P63表達(dá)強(qiáng)度比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。腺體部分性萎縮組中部分樣本不表達(dá)CK34βE12 和CK5/6；腺體完全性萎縮組中，部分樣本不表達(dá)CK5/6，見表3。

表3 良性前列腺組與CK34βE12、CK5/6和P63表達(dá)強(qiáng)度的關(guān)系Table 3 Relationship between benign prostate disease group and expression intensity of CK34βE12,CK5/6 and P63

3 討論

目前，臨床上對于前列腺的診斷，一般采取前列腺特異性抗原即PSA抗原濃度和前列腺體積結(jié)合患者的臨床癥狀及體格檢查綜合評定，但準(zhǔn)確性并不高，而提高診斷前列腺的準(zhǔn)確率可有效并及時改善患者的生存狀況及預(yù)后，因此，分子標(biāo)志物已成為腫瘤研究的熱點(diǎn)[6]。CK34βE12、P63、CK5/6 以及P504S 分子標(biāo)志物在正常和異常組織中存在表達(dá)差異，因此，檢測上述4 種蛋白對于前列腺癌的預(yù)防和治療均具有重要臨床意義。

CK34βE12與CK5/6同屬于角蛋白，可在腺體上表達(dá)，因此，臨床上多聯(lián)合CK5/6 用于基底細(xì)胞的臨床診斷，但單獨(dú)檢測CK34βE12特異性及敏感性不高。由于P504s在細(xì)胞質(zhì)中產(chǎn)生，本質(zhì)是一種蛋白質(zhì)，可在線粒體中被檢測到，其主要功能是維持脂肪酸的平衡，參與脂肪酸的氧化過程。有研究[7]指出，P504s參與前列腺癌的發(fā)生發(fā)展，如參與脂肪酸氧化過程，這與前列腺發(fā)展為前列腺癌密切相關(guān)。本研究結(jié)果表明，CK5/6 在惡性前列腺病變組中呈低表達(dá)，而在良性前列腺病變組中現(xiàn)高表達(dá)。患者P504s 表達(dá)與前列腺癌的發(fā)生呈正相關(guān)，但P504s在臨床中診斷價值較低，因此，需聯(lián)合其他指標(biāo)綜合診斷評定。Gleason 分級中低危組P504s 表達(dá)強(qiáng)度明顯低于高危組和中危組（P＜0.05），表明P504影響前列腺癌的進(jìn)展。細(xì)胞角蛋白CK5/6 是免疫組化染色檢測中較常用的一種基底細(xì)胞標(biāo)志性抗體[6]。這種角蛋白的特點(diǎn)是在癌組織中低表達(dá)甚至不表達(dá)，而在正常組織器官中呈高表達(dá)，CK5/6 在惡性前列腺病變組中呈低表達(dá)，而在良性前列腺病變組中呈高表達(dá)。P63在抑癌基因中研究廣泛，通?？稍谇傲邢倩准?xì)胞核中被檢測到，且P63 特異性較高，因此，在組織器官中穩(wěn)定表達(dá)，因此，研究P63對鑒別良惡性前列腺疾病中具有重要價值。本研究中P63 在惡性前列腺病變組中呈低表達(dá)，而在良性前列腺病變組中呈高表達(dá)。腺體部分性萎縮組中，部分樣本不表達(dá)CK34βE12和CK5/6；腺體完全性萎縮組中，部分樣本不表達(dá)CK5/6，增加了鑒別良惡性前列腺疾病難度[7-8]。目前，研究報道多建議采用多指標(biāo)綜合進(jìn)行前列腺癌的鑒別和診斷，P504s在前列腺癌組織中呈明顯高表達(dá)，而CK34βE12、P63、CK5/6 表達(dá)明顯較低，表明聯(lián)合檢測具有較高的臨床應(yīng)用價值[9-12]。

綜上所述，經(jīng)聯(lián)合檢測 CK34βE12、CK5/6、P63 以及P504s的表達(dá)水平進(jìn)一步鑒別前列腺良惡性疾病，并進(jìn)行早期診斷和治療，保證預(yù)后效果。