王光權(quán)，李 洪，潘在軒

(1.瓊海市人民醫(yī)院重癥醫(yī)學(xué)科，海南 瓊海 571400；2.瓊海市人民醫(yī)院中心實驗室，海南 瓊海 571400；3.瓊海市人民醫(yī)院病理檢驗室，海南 瓊海 571400)

膿毒癥是由感染所引發(fā)的全身炎癥綜合征，發(fā)病率較高，是臨床常見的急危重癥之一[1]。膿毒癥患者常存在免疫系統(tǒng)紊亂，造成炎癥反應(yīng)失控，進(jìn)而導(dǎo)致多器官功能障礙，肺臟是最易受損的器官之一[2-3]。膿毒癥早期可導(dǎo)致急性肺損傷(acute lung injury，ALI)，膿毒癥并發(fā)ALI患者的病死率高達(dá)50%～70%[4]。因此，積極防治ALI可顯著降低膿毒癥患者的病死率。ALI的主要病理特征為肺血管損傷所致的肺水腫和肺組織炎癥細(xì)胞浸潤[5]。有研究表明，采用盲腸結(jié)扎穿刺法(cecal ligation and puncture，CLP)誘導(dǎo)的膿毒癥肺損傷大鼠肺組織中腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor alpha，TNF-α)、白細(xì)胞介素-6(interleukin-6，IL-6 )和丙二醛(malondialdehyde，MDA)水平升高，超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)水平降低[6]。因此，抑制炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激水平、保護(hù)肺功能是預(yù)防膿毒癥并發(fā)ALI的主要策略。微RNA(microRNA，miRNA)是特異性的基因調(diào)節(jié)因子，能夠調(diào)節(jié)靶蛋白并參與細(xì)胞分化、增殖、凋亡以及細(xì)胞信號傳導(dǎo)途徑等[7-8]。miR-204是miRNA家族成員之一，目前已經(jīng)證實miR-204在多種疾病中呈異常表達(dá)[9]。硫氧還蛋白相互作用蛋白(thioredoxin interacting protein，TXNIP)是氧化應(yīng)激與炎癥反應(yīng)的重要促進(jìn)基因。CHEN等[10]研究表明，白楊素可通過抑制TXNIP和含3個pyrin結(jié)構(gòu)域的nod樣受體(nod-like receptor with pyrin domain containing 3，NLRP3)的表達(dá)來減輕脂多糖誘導(dǎo)的ALI小鼠肺部炎癥及氧化應(yīng)激水平，改善肺水腫。硫氧還蛋白(thioredoxin，Trx)是一種內(nèi)源性抗氧化酶，通過清除活性氧保護(hù)發(fā)生氧化應(yīng)激的細(xì)胞。NAGANO等[11]研究報道，Trx可通過抑制促炎癥細(xì)胞因子而改善新生兒小鼠高氧性肺損傷。TXNIP是Trx的生理抑制劑，過表達(dá)TXNIP可抑制Trx的活性。目前，關(guān)于miR-204在膿毒癥并發(fā)ALI大鼠中的研究報道較少，因此本研究通過建立膿毒癥大鼠模型，觀察miR-204干預(yù)后大鼠肺組織中TXNIP mRNA、Trx mRNA及MDA、SOD、IL-6、TNF-α表達(dá)變化，探討miR-204靶向TXNIP對膿毒癥大鼠ALI的保護(hù)作用，為臨床治療膿毒癥并發(fā)ALI提供實驗基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物無特定病原體(specific pathogen free，SPF)級健康雄性成年Sprague Dawley (SD)大鼠48只購自北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司[動物生產(chǎn)許可證號：SCXK(京)2014-0001]，體質(zhì)量200～250 g，于溫度26～28 ℃、濕度50%～60%、光照時間10 h環(huán)境中，使用無菌水和飼料飼養(yǎng)。

1.2 細(xì)胞、試劑與儀器人胚腎細(xì)胞HEK-293T、達(dá)爾伯克改良伊格爾培養(yǎng)基(Dulbecco′s modified Eagle′s medium，DMEM)、胎牛血清(fetal bovine serum，F(xiàn)BS)、青鏈霉素購自武漢普諾賽生命科技有限公司，Affinity Script cDNA 合成試劑盒、miRNA 實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction，qRT-PCR)檢測試劑盒、qRT-PCR Brilliant Ⅱ SYBR ROX 反應(yīng)預(yù)混液購自安捷倫科技(中國)有限公司，大鼠MDA酶聯(lián)免疫吸附測定(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)試劑盒購自上海信裕生物科技有限公司，大鼠SOD ELISA試劑盒購自上海邦奕商貿(mào)有限公司，蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosin，HE)、雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒、放射免疫沉淀分析(radio immunoprecipitation assay，RIPA)裂解液、Lipofectamine 6000 轉(zhuǎn)染試劑購自上海碧云天生物技術(shù)有限公司，大鼠IL-6 ELISA試劑盒、大鼠TNF-α ELISA試劑盒、TXNIP抗體(兔單克隆抗體)、甘油醛-3-磷酸脫氫酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH)抗體(兔多克隆抗體)、Trx抗體(兔單克隆抗體)、山羊抗兔辣根過氧化物酶(horseradish pero-xidase，HRP)購自艾博抗(上海)貿(mào)易有限公司；Multiskan GO全波長酶標(biāo)儀購自美國Thermo Fisher Scientific公司，iQ5 qRT-PCR儀購自美國Bio-Rad公司，Eclipse-E100生物顯微鏡購自尼康儀器(上海)有限公司，TG16-WS臺式高速離心機(jī)購自長沙湘銳離心機(jī)有限公司；陰性對照試劑agomir NC、miR-204過表達(dá)試劑miR-204 agomir由上海吉瑪制藥公司設(shè)計并合成。

1.3 實驗方法

1.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)、轉(zhuǎn)染及雙熒光素酶實驗取HEK-293T細(xì)胞接種于含體積分?jǐn)?shù)10%FBS、體積分?jǐn)?shù)1%青鏈霉素的DMEM中，置于37 ℃、含有體積分?jǐn)?shù)5%二氧化碳(carbon dioxide，CO2)培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，傳代培養(yǎng)至第3代后收集細(xì)胞用于后續(xù)實驗。通過聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增含有miR-204結(jié)合位點的TXNIP 3′非編碼區(qū)(3′ untranslated coding regions，3′UTR)，克隆到載體中分別構(gòu)建野生型(wild type，WT)-TXNIP 3′UTR和突變型(mutant，MUT)-TXNIP 3′UTR熒光素酶報告基因表達(dá)載體TXNIP 3′UTR-WT和TXNIP 3′UTR-MUT。將HEK-293T細(xì)胞隨機(jī)分為陰性對照+TXNIP 3′UTR-WT組、miR-204 agomir+TXNIP 3′UTR-WT組、陰性對照+TXNIP 3′UTR-MUT組、miR-204 agomir+TXNIP 3′UTR-MUT組，陰性對照+TXNIP 3′UTR-WT組HEK-293T細(xì)胞共轉(zhuǎn)染陰性對照序列和TXNIP 3′UTR-WT，miR-204 agomir+TXNIP 3′UTR-WT組HEK-293T細(xì)胞共轉(zhuǎn)染miR-204 agomir和TXNIP 3′UTR-WT，陰性對照+TXNIP 3′UTR-MUT組HEK-293T細(xì)胞共轉(zhuǎn)染陰性對照序列和TXNIP 3′UTR-MUT，miR-204 agomir+TXNIP 3′UTR-MUT組HEK-293T細(xì)胞共轉(zhuǎn)染miR-204 agomir、TXNIP 3′UTR-MUT，轉(zhuǎn)染48 h后收集細(xì)胞，使用雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒檢測相對熒光素酶活性。

1.3.2 實驗分組及干預(yù)將48只SPF級雄性SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、陰性對照(NC)組、miR-204 agomir組，每組12只。模型組、NC組、miR-204 agomir組采用CLP法建立膿毒癥大鼠模型[12]，具體方法：20 g·L-1戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉大鼠，沿大鼠腹中線縱向切口2～3 cm，暴露盲腸后用4-0絲線進(jìn)行結(jié)扎，18號針頭貫通穿刺盲腸，擠出少許糞便后將盲腸推回腹腔，用3-0絲線縫合；假手術(shù)組大鼠僅開腹，不進(jìn)行盲腸結(jié)扎及穿孔操作。NC組、miR-204 agomir組大鼠模型建立后24 h分別由尾靜脈注射2 μL agomir NC(5 nmol)、2 μL miR-204 agomir(5 nmol)，模型組和假手術(shù)組大鼠注射等體積的生理鹽水。

1.3.3 肺組織取材及保存造模成功后，采用斷頸法處死各組大鼠，取肺組織，右肺組織使用40 g·L-1觀察多聚甲醛固定，用于肺組織病理組織檢查；其余肺組織置于-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.4 HE染色觀察大鼠肺組織病理形態(tài)學(xué)變化取40 g·L-1多聚甲醛固定的大鼠肺組織，常規(guī)乙醇梯度脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，切片(片厚5 μm)，將切片脫蠟至水，HE染色，脫水透明后中性樹膠封片，在光學(xué)顯微鏡下觀察大鼠肺組織的病理學(xué)改變。

1.3.5 qRT-PCR法檢測4組大鼠肺組織中TXNIP mRNA、Trx mRNA和miR-204表達(dá)取-80 ℃保存的大鼠肺組織，應(yīng)用TRIzol法提取總RNA，然后進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄合成，qRT-PCR法檢測Trx、TXNIP mRNA和miR-204的表達(dá)。TXNIP正向引物序列為5′-TAGTGTCCCTGGCTCCAAGAAA-3′，反向引物序列為5′-GGATGTTTAGGTCTATCCAGCTCAT-3′；Trx正向引物序列為5′-CCGCAACAGCCAAAATGGTGAAGC-3′，反向引物序列為5′-AGCATGATTAGCCAAACTCCGTAA-3′；GAPDH正向引物序列為5′-ACACCCACTCCTCCACCTTT-3′，反向引物序列為5′-TTACTCCTTGGAGGCCATGT-3′；miR-204正向引物序列為5′-CTGTCACTCGAGCTGCTGGAATG-3′，反向引物序列為5′-ACCGTGTCGTGGAGTCGGCAATT-3′；U6正向引物序列為5′-CTCGCTTCGGCAGCACATATACT-3′，反向引物序列為5′-ACGCTTCACGAATTTGCGTGTC-3′。反應(yīng)條件為 94 ℃預(yù)變性30 s，94 ℃變性5 s，60 ℃退火20 s，72 ℃延伸5 min，進(jìn)行40個循環(huán)擴(kuò)增反應(yīng)。U6為miR-204內(nèi)參，GAPDH為Trx、TXNIP內(nèi)參，采用2-△△Ct法計算Trx、TXNIP mRNA及miR-204相對表達(dá)量。實驗重復(fù)3次，取均值。

1.3.6 Western blot法檢測4組大鼠肺組織中TXNIP、Trx蛋白表達(dá)取-80 ℃保存的大鼠肺組織，液氮中研磨后置于離心管中，加入RIPA裂解液冰上裂解，二喹林甲酸法測定蛋白濃度，然后使用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(80 V 30 min，100 V 90 min)分離蛋白，將蛋白濕轉(zhuǎn)(100 V，100 min)至聚偏氟乙烯膜上，50 g·L-1脫脂牛奶室溫封閉1 h；加入兔抗鼠TXNIP一抗(11 000)、兔抗鼠Trx一抗(11 000)、兔抗鼠GAPDH一抗(15 000)，4 ℃過夜孵育，用1×磷酸鹽緩沖液清洗3次。加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔IgG二抗(110 000)，室溫孵育1 h；滴加增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光液，暗室中曝光、顯影，應(yīng)用化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)進(jìn)行圖像采集，Image J凝膠成像系統(tǒng)分析各條帶灰度值，以GAPDH為內(nèi)參，目的蛋白相對表達(dá)量以目的蛋白灰度值與內(nèi)參蛋白灰度值比值表示。實驗重復(fù)3次，取均值。

1.3.7 ELISA法檢測4組大鼠肺組織中MDA、SOD、IL-6、TNF-α表達(dá)水平取-80 ℃保存的大鼠肺組織，加入適量的生理鹽水并搗碎，1 000 r·min-1離心10 min，收集上清液；嚴(yán)格按照大鼠MDA、IL-6、TNF-α、SOD ELISA檢測試劑盒說明書進(jìn)行操作；使用酶標(biāo)儀檢測波長450 nm處的吸光度值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算大鼠肺組織中MDA、SOD、IL-6、TNF-α水平。

2 結(jié)果

2.1 雙熒光素酶實驗檢測結(jié)果通過靶基因預(yù)測軟件miRTarBase得到miR-204與TXNIP 3′UTR-WT存在結(jié)合位點(圖1)。陰性對照+TXNIP 3′UTR-WT組、miR-204 mimic+TXNIP 3′UTR-WT組、陰性對照+TXNIP 3′UTR-MUT組和miR-204 mimic+TXNIP 3′UTR-MUT組細(xì)胞熒光素酶活性分別為1.00±0.03、0.32±0.03、0.99±0.05、0.97±0.06；miR-204 mimic+TXNIP 3′UTR-WT組熒光素酶活性顯著低于陰性對照+TXNIP 3′UTR-WT組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=29.286，P<0.05)；miR-204 mimic+TXNIP 3′UTR-MUT組和陰性對照+TXNIP 3′UTR-MUT組熒光素酶活性比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=0.460，P>0.05)。

圖1 miRtarbase軟件預(yù)測TXNIP 3′UTR與miR-204靶向結(jié)合位點Fig.1 Binding-site between TXNIP 3′UTR and miR-204 predicted by miRtarbase software

2.2 4組大鼠肺組織病理變化結(jié)果見圖2。假手術(shù)組大鼠肺泡形態(tài)結(jié)構(gòu)正常；模型組和NC組大鼠肺泡壁增厚，出現(xiàn)大量炎癥細(xì)胞浸潤；與模型組和NC組比較，miR-204 agomir組大鼠肺組織炎癥細(xì)胞浸潤減少，肺泡損傷明顯改善。

A：假手術(shù)組；B：模型組；C：NC組；D：miR-204 agomir組；箭頭表示炎癥細(xì)胞。

2.3 4組大鼠肺組織中miR-204及TXNIP mRNA和蛋白相對表達(dá)量比較結(jié)果見圖3和表1。4組大鼠肺組織中miR-204相對表達(dá)量比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；模型組和NC組大鼠肺組織中miR-204相對表達(dá)量顯著低于假手術(shù)組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；模型組與NC組大鼠肺組織中miR-204相對表達(dá)量比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；miR-204 agomir組大鼠肺組織中miR-204相對表達(dá)量顯著高于假手術(shù)組、模型組和agomir NC組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。4組大鼠肺組織中TXNIP mRNA和蛋白相對表達(dá)量比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；模型組和NC組大鼠肺組織中TXNIP mRNA和蛋白相對表達(dá)量顯著高于假手術(shù)組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；模型組和NC組大鼠肺組織中TXNIP mRNA和蛋白相對表達(dá)量比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；miR-204 agomir組大鼠肺組織中TXNIP mRNA和蛋白相對表達(dá)量顯著低于假手術(shù)組、模型組和NC組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

1：假手術(shù)組；2：模型組；3：NC組；4：miR-204 agomir組。

表1 4組大鼠肺組織中miR-204、TXNIP mRNA和蛋白相對表達(dá)量比較Tab.1 Comparison of relative expression of miR-204,TXNIP mRNA and protein in lung tissues of rats among the four groups

2.4 4組大鼠肺組織中Trx mRNA和蛋白相對表達(dá)量比較結(jié)果見圖4和表2。4組大鼠肺組織Trx mRNA和蛋白相對表達(dá)量比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=2 445.904、112.836，P<0.05)；模型組、NC組和miR-204 agomir組大鼠肺組織中Trx mRNA和蛋白相對表達(dá)量顯著低于假手術(shù)組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；miR-204 agomir組大鼠肺組織中Trx mRNA和蛋白相對表達(dá)量顯著高于模型組和agomir NC組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；模型組與agomir NC組大鼠肺組織中Trx mRNA和蛋白相對表達(dá)量比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

1：假手術(shù)組；2：模型組；3：NC組；4：miR-204 agomir組。

表2 4組大鼠肺組織中Trx mRNA和蛋白相對表達(dá)量的比較Tab.2 Comparison of relative expression of Trx mRNA and protein in lung tissues of rats among the four groups

2.5 4組大鼠肺組織中TNF-α、IL-6、MDA、SOD水平比較結(jié)果見表3。4組大鼠肺組織中TNF-α、IL-6、MDA和SOD水平比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；模型組、NC組和miR-204 agomir組大鼠肺組織中TNF-α、IL-6和MDA水平顯著高于假手術(shù)組，SOD水平顯著低于假手術(shù)組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。miR-204 agomir組大鼠肺組織中TNF-α、IL-6和MDA水平顯著低于模型組和NC組(P<0.05)，SOD水平顯著高于模型組與 NC組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；模型組和NC組大鼠肺組織中TNF-α、IL-6、MDA及SOD水平比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

表3 4組大鼠肺組織中TNF-α、IL-6、MDA、SOD水平的比較Tab.3 Comparison of the levels of TNF-α,IL-6,MDA and SOD in the lung tissues of rats among the four groups

3 討論

膿毒癥的主要機(jī)制是炎癥反應(yīng)失調(diào)以及放大的機(jī)體炎癥級聯(lián)反應(yīng)，可引發(fā)包含肺組織在內(nèi)的多器官損傷[13]，其中ALI約占20%[14]。miRNA是單鏈非編碼RNA，其能夠靶向靶基因的3′-UTR，參與基因表達(dá)的調(diào)控，通過影響相關(guān)基因的表達(dá)水平參與疾病的發(fā)生和發(fā)展[15]。紀(jì)偉平等[16]研究表明，miR-29b可促進(jìn)脂多糖誘導(dǎo)的大鼠ALI炎癥反應(yīng)。SUO等[17]研究發(fā)現(xiàn)，miRNA-1246可通過降低核因子-κB水平(nuclear factor kappa-B，NF-κB)抑制ALI引起的炎癥反應(yīng)。QI等[18]研究發(fā)現(xiàn)，糖尿病性視網(wǎng)膜病變大鼠視網(wǎng)膜組織中miR-204表達(dá)下調(diào)，過表達(dá)miR-204可通過上調(diào)B淋巴細(xì)胞瘤-2和沉默調(diào)節(jié)蛋白1的表達(dá)抑制視網(wǎng)膜炎癥反應(yīng)和細(xì)胞凋亡。WANG等[19]研究表明，抑制miR-204表達(dá)可加劇脂多糖誘導(dǎo)的急性呼吸窘迫綜合征小鼠肺部炎癥細(xì)胞浸潤，加重肺泡炎癥和纖維化程度，過表達(dá)miR-204可減輕炎癥和肺泡損傷。本研究結(jié)果顯示，假手術(shù)組大鼠肺泡形態(tài)結(jié)構(gòu)正常；模型組和NC組大鼠肺泡壁增厚，出現(xiàn)大量炎癥細(xì)胞浸潤；與模型組和NC組比較，miR-204 agomir組大鼠肺組織炎性浸潤減少，肺泡損傷得到改善；模型組和NC組大鼠肺組織中miR-204相對表達(dá)量低于假手術(shù)組，miR-204 agomir組大鼠肺組織miR-204相對表達(dá)量高于假手術(shù)組、模型組和NC組。以上研究結(jié)果提示，miR-204在膿毒癥并發(fā)ALI大鼠肺組織中表達(dá)顯著降低，過表達(dá)miR-204可抑制肺組織炎癥細(xì)胞浸潤，改善肺組織損傷。

本研究通過靶基因預(yù)測軟件miRtarbase得到miR-204與TXNIP 3′UTR-WT存在結(jié)合位點。雙熒光素酶實驗結(jié)果顯示，miR-204 mimic+TXNIP 3′UTR-WT組熒光素酶活性顯著低于陰性對照+TXNIP 3′UTR-WT組，miR-204 mimic+TXNIP 3′UTR-MUT組與陰性對照+TXNIP 3′UTR-MUT組熒光素酶活性比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，提示miR-204可靶向TXNIP，TXNIP是氧化應(yīng)激與炎癥反應(yīng)的重要促進(jìn)基因。有研究報道，亞麻酸通過抑制TXNIP/NLRP3和NF-κB信號通路來抑制氧化應(yīng)激和炎癥，預(yù)防LPS引起的ALI[20]。Trx具有氧化還原活性，其通過二硫鍵和巰基互變實現(xiàn)氧化還原調(diào)節(jié)功能，是一種反映機(jī)體氧化應(yīng)激反應(yīng)水平的生物標(biāo)志物[21]。FENG等[22]研究表明，白藜蘆醇通過抑制炎癥反應(yīng)和TXNIP/Trx/NLRPS信號通路來保護(hù)小膠質(zhì)細(xì)胞免受β-淀粉樣蛋白刺激的炎癥損傷，減輕阿爾茲海默癥樣癥狀。本研究結(jié)果顯示，模型組和NC組大鼠肺組織中TXNIP mRNA和蛋白表達(dá)水平顯著高于假手術(shù)組，Trx mRNA和蛋白相對表達(dá)量顯著低于假手術(shù)組；miR-204 agomir組大鼠肺組織中TXNIP mRNA和蛋白表達(dá)水平顯著低于模型組，Trx mRNA和蛋白相對表達(dá)量顯著高于模型組；這一結(jié)果提示miR-204可通過靶向TXNIP減輕膿毒癥并發(fā)ALI大鼠肺組織損傷，其機(jī)制可能與上調(diào)Trx基因表達(dá)來抑制體內(nèi)氧化應(yīng)激水平相關(guān)。

TNF-α、IL-6是常見的炎癥因子，既參與組織損傷，又激發(fā)下游反應(yīng)，導(dǎo)致炎癥的級聯(lián)反應(yīng)[23]。氧化應(yīng)激也是ALI發(fā)病的重要機(jī)制之一，MDA和SOD是反映體內(nèi)氧化還原狀態(tài)的重要指標(biāo)[24]。肺組織發(fā)生氧化應(yīng)激損傷后可產(chǎn)生多種內(nèi)源性物質(zhì)對細(xì)胞進(jìn)行保護(hù)，MDA作為脂質(zhì)過氧化的標(biāo)志物反映了ALI后氧化應(yīng)激損傷程度[25]。SOD是體內(nèi)清除氧自由基的主要生物酶，其活力高低能夠間接反映機(jī)體消除氧自由基的能力[26]。本研究結(jié)果顯示，模型組、NC組和miR-204 agomir組大鼠肺組織TNF-α、IL-6和MDA水平顯著高于假手術(shù)組，SOD水平顯著低于假手術(shù)組；miR-204 agomir組大鼠肺組織TNF-α、IL-6和MDA水平顯著低于模型組和NC組，SOD水平顯著高于模型組和NC組；說明miR-204可通過降低肺組織中TNF-α、IL-6和MDA水平，升高SOD水平，減輕肺組織炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激，對膿毒癥并發(fā)ALI發(fā)揮保護(hù)作用。

綜上所述，miR-204可通過靶向TXNIP抑制膿毒癥并發(fā)ALI大鼠肺組織炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激，其機(jī)制可能與Trx表達(dá)升高有關(guān)，這為進(jìn)一步研究膿毒癥并發(fā)ALI的發(fā)病機(jī)制及臨床治療提供了新的思路。