徐鋒 呂慶華 肖強(qiáng)古 蔣貽乾 程德勇

風(fēng)濕性心臟?。≧HD）屬于心內(nèi)科常見的一種疾病，通常也被稱為風(fēng)心病，是因風(fēng)濕熱活動(dòng)累及心臟瓣膜引發(fā)的心臟瓣膜病變，起病之初患者無典型的癥狀表現(xiàn)，疾病進(jìn)展后可形成乏力、咳嗽、下肢水腫等諸多癥狀［1-2］。RHD也是一種自身免疫性疾病，相對(duì)于正常人其免疫能力出現(xiàn)明顯降低，其中調(diào)節(jié)性T細(xì)胞是調(diào)控免疫反應(yīng)的T細(xì)胞亞群，可維持機(jī)體免疫耐受與穩(wěn)態(tài)，還能參與炎癥反應(yīng)的過程中。既往研究證實(shí)Treg細(xì)胞的CD4+CD25細(xì)胞/淋巴細(xì)胞、CD4+CD25+Foxp3+/CD4+T細(xì)胞比值能夠?yàn)镽HD病情、預(yù)后評(píng)估提供幫助［3-4］。同時(shí)血清心型脂肪酸結(jié)合蛋白（H-FABP）也是評(píng)估心肌損傷情況的重要標(biāo)志物，在冠心病、心肌梗死等疾病的診療中受到眾多臨床醫(yī)師的關(guān)注［5-6］。本文探討血清H-FABP及CD4+CD25+細(xì)胞/淋巴細(xì)胞、CD4+CD25+Foxp3+/CD4+T細(xì)胞診斷RHD的價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2019年4月至2020年4月本院RHD患者51例為RHD組，另外選取本院同期體檢健康者51例為健康組。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）RHD組患者經(jīng)24 h心動(dòng)圖及超聲監(jiān)測(cè)確診［7-8］，健康組體檢各項(xiàng)指標(biāo)無異常且與RHD組無血緣關(guān)系；（2）年齡18~65歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）肝腎功能異常；（2）近3個(gè)月內(nèi)曾有免疫抑制藥物使用史；（3）合并內(nèi)分泌異常疾?。唬?）精神異常無法配合研究者。其中RHD組男27例，女24例；年齡41~61歲，平均年齡（51.56±4.46）歲。體質(zhì)量指數(shù)（BMI）19~23 kg/m2，平均（20.26±1.20）kg/m2。NYHA分級(jí)［6］：Ⅱ級(jí)30例，Ⅲ級(jí)21例。健康組男26例，女25例；年齡40~62歲，平均年齡（51.49±4.37）歲。BMI 19~23 kg/m2，平均（20.35±1.26）kg/m2；兩組基礎(chǔ)資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。本項(xiàng)目經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，受試者均并簽署知情同意書。

1.2 方法 （1）血清H-FABP檢測(cè)：患者及志愿者入院后抽取清晨空腹靜脈血5 mL，肝素抗凝后取上層血清，以酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)H-FABP，試劑盒由荷蘭Biotechnology公司生產(chǎn)。（2）外周血Treg細(xì)胞檢測(cè)：受試者入院后均抽取5 mL靜脈血，以淋巴細(xì)胞分離液對(duì)單個(gè)核細(xì)胞分離、計(jì)數(shù)后調(diào)整細(xì)胞濃度至1×106mL，隨后取100 μL細(xì)胞懸液，加入20μL CD4-FITC、CD25-PE抗體（美國BioLegend公司），溫室避光孵育20 min后離心去上清液，固定破膜液后溫室孵育20 min，再加入20 μL Foxp3-APC抗體（美國BioLegend公司），避光反應(yīng)30 min后染色，以緩沖液洗滌離心，以流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD4+CD25細(xì)胞/淋巴細(xì)胞、CD4+CD25+Foxp3+/CD4+T細(xì)胞比值。

1.3 觀察指標(biāo) （1）比較兩組血清H-FABP水平；（2）比較兩組外周血Treg細(xì)胞的CD4+CD25+細(xì)胞/淋巴細(xì)胞、CD4+CD25+Foxp3+/CD4+T細(xì)胞比值差異；（3）利用ROC分析血清H-FABP及Treg細(xì)胞診斷RHD的價(jià)值；（4）以臨床診斷結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，分析血清H-FABP聯(lián)合Treg細(xì)胞診斷RHD的價(jià)值，聯(lián)合診斷中任一項(xiàng)指標(biāo)為陽性即判定為RHD，即血清H-FABP≥33.715 ng/L、CD4+CD25細(xì)胞/淋巴細(xì)胞比值≤3.245%、CD4+CD25+Foxp3+/CD4+T細(xì)胞比值≤2.370%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件。計(jì)量資料以（±s）表示，組間比較用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以（%）表示，組間比較用χ2檢驗(yàn)；應(yīng)用ROC曲線分析血清H-FABP及Treg細(xì)胞診斷RHD的效應(yīng)；一致性分析用Kappa檢驗(yàn)；以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清H-FABP水平比較 RHD組血清H-FABP水平為（82.46±15.44）ng/L，健康組血清H-FABP水平為（0.29±0.12）ng/L，RHD組高于健康組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=38.005，P<0.001）。

2.2 兩組Treg細(xì)胞比較 RHD組CD4+CD25+細(xì)胞/淋巴細(xì)胞、CD4+CD25+Foxp3+/CD4+T細(xì)胞比值低于健康組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

表1 兩組Treg細(xì)胞比較［%，（±s）］

表1 兩組Treg細(xì)胞比較［%，（±s）］

組別 CD4+CD25+細(xì)胞/淋巴細(xì)胞 CD4+CD25+Foxp3+/CD4+T細(xì)胞RHD組（n=51） 2.58±0.66 1.35±0.59健康組（n=51） 4.95±0.59 3.04±0.24 t值 19.119 18.948 P值 <0.001 <0.001

2.3 血清H-FABP及Treg細(xì)胞診斷RHD的價(jià)值分析 血 清H-FABP、CD4+CD25+細(xì) 胞/淋 巴 細(xì)胞、CD4+CD25+Foxp3+/CD4+T細(xì)胞均可用于RHD的診斷，曲線下面積分別為0.740、0.914、0.905。見表2。血清H-FABP及CD4+CD25+細(xì)胞/淋巴細(xì)胞、CD4+CD25+Foxp3+/CD4+T細(xì)胞診斷RHD的ROC曲線見圖1~3。

表2 血清H-FABP及Treg細(xì)胞診斷RHD的價(jià)值分析

圖1 血清H-FABP診斷RHD的ROC曲線

圖2 CD4+ CD25+細(xì)胞/淋巴細(xì)胞診斷RHD的ROC曲線

圖3 CD4+CD25+Foxp3+/CD4+T細(xì)胞診斷RHD的ROC曲線

2.4 血清H-FABP聯(lián)合Treg細(xì)胞診斷RHD的一致性分析 血清H-FABP聯(lián)合Treg細(xì)胞診斷RHD的敏感度為0.941，特異度為0.902，準(zhǔn)確率為0.922，陽性預(yù)測(cè)值為0.906，陰性預(yù)測(cè)值為0.939，Kappa=0.843。見表3。

表3 血清H-FABP聯(lián)合Treg細(xì)胞診斷RHD的一致性分析

3 討論

RHD發(fā)病后會(huì)導(dǎo)致二尖瓣、三尖瓣、主動(dòng)脈瓣中的一個(gè)或多個(gè)瓣膜出現(xiàn)狹窄或關(guān)閉不全，可導(dǎo)致患者心臟血流動(dòng)力學(xué)異常，部分患者瓣膜狹窄或關(guān)閉不全會(huì)同時(shí)存在，但多以一種為主［9-10］。該疾病也可在任何年齡段發(fā)病，發(fā)病后具有較高死亡、致殘率，即使部分患者接受手術(shù)治療后6年病死率達(dá)10%，同時(shí)疾病發(fā)病初期癥狀輕微，導(dǎo)致確診時(shí)已存在心臟損害，因此及早診斷對(duì)患者的治療及預(yù)后改善具有重要意義［11-12］。

本次研究結(jié)果顯示，RHD組血清H-FABP水平高于健康組。H-FABP主要存在于心肌內(nèi)，能夠參與到線粒體的能量代謝中，在心肌損傷時(shí)H-FABP會(huì)快速進(jìn)入血液，而RHD發(fā)生后會(huì)導(dǎo)致患者出現(xiàn)心臟血流動(dòng)力學(xué)紊亂及心肌損傷，故RHD患者體內(nèi)血清H-FABP明顯增高。段長恩等［13］在RHD患者的心功能評(píng)估中發(fā)現(xiàn)RHD患者血清H-FABP水平相對(duì)于健康人會(huì)呈現(xiàn)出明顯增高，與本研究結(jié)果一致。在外周血Treg細(xì)胞的觀察中，RHD組CD4+CD25+細(xì)胞/淋巴細(xì)胞、CD4+CD25+Foxp3+/CD4+T細(xì)胞比值低于健康組，提示相對(duì)于健康人，RHD患者Treg細(xì)胞水平呈現(xiàn)明顯降低。與曾靜［14］等研究基本相符。Treg細(xì)胞能夠抑制自身免疫性疾病的發(fā)生，CD4+CD25+Foxp3+/CD4+T細(xì)胞減少則會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞免疫功能出現(xiàn)異常，此時(shí)液體免疫功能得到增強(qiáng)，B細(xì)胞活化，機(jī)體也會(huì)因大量抗體的產(chǎn)生而出現(xiàn)損傷，形成自身免疫性疾病，CD4+CD25+細(xì)胞/淋巴細(xì)胞、CD4+CD25+Foxp3+/CD4+T細(xì)胞比值受到白介素-10、轉(zhuǎn)化生長因子-β1的影響，但受到疾病的影響后者含量也會(huì)出現(xiàn)明顯降低，也導(dǎo)致Treg細(xì)胞分泌受到影響，故CD4+CD25+細(xì)胞/淋巴細(xì)胞、CD4+CD25+Foxp3+/CD4+T細(xì)胞比值明顯降低［15］。汪蓮開等［16］指出白介素-10具有炎癥抑制作用，轉(zhuǎn)化生長因子-β1能夠誘導(dǎo)Treg細(xì)胞的分泌，受到RHD的影響白介素-10、轉(zhuǎn)化生長因子-β1會(huì)明顯降低，其水平的降低可影響Treg細(xì)胞分泌。

通過ROC分析，H-FABP、CD4+CD25+細(xì)胞/淋巴細(xì)胞、CD4+CD25+Foxp3+/CD4+T細(xì)胞均可用于RHD的診斷，且敏感度較高，在一致性分析中證實(shí)三項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合診斷RHD能夠獲得更高的敏感度，即0.941>0.765、0.863、0.902，因此RHD早期診斷也可對(duì)上述三項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)疾病的治療及患者預(yù)后的改善具有重要意義。

綜上，RHD患者血清H-FABP水平明顯上升，Treg細(xì)胞的CD4+CD25+細(xì)胞/淋巴細(xì)胞、CD4+CD25+Foxp3+/CD4+T細(xì)胞比值明顯降低，當(dāng)H-FABP≥33.715ng/L、CD4+CD25+細(xì) 胞/淋 巴 細(xì) 胞 比 值≤3.245%、CD4+CD25+Foxp3+/CD4+T細(xì)胞比值≤2.370%時(shí)能夠用于RHD的診斷，且聯(lián)合診斷敏感度更高，或可作為RHD早期診斷的輔助檢查指標(biāo)。