沈善超，周彩琴，王淑慧，趙文超，袁桂云，范志強(qiáng)

(1.諸城市萬景源農(nóng)業(yè)科技有限公司，山東諸城 262200；2.山東省林業(yè)保護(hù)和發(fā)展服務(wù)中心，山東濟(jì)南 250014)

在果樹組培生產(chǎn)過程中，污染是威脅實(shí)驗(yàn)室安全生產(chǎn)的關(guān)鍵因素，包括細(xì)菌性污染和真菌性污染。細(xì)菌性污染是可控的，在生產(chǎn)中可以帶菌培養(yǎng)，在處理過程中有較長的緩沖時(shí)間。真菌性污染通常是致命的，沒有任何的緩沖時(shí)間來處理，發(fā)現(xiàn)后只能通過高溫高壓滅菌處理。

真菌性污染在生產(chǎn)中有不同的表現(xiàn)形式，每種表現(xiàn)形式有不同的原因，采取的預(yù)防措施也不同。筆者根據(jù)多年的組培生產(chǎn)管理經(jīng)驗(yàn)，提出了幾種常見的真菌污染表現(xiàn)形式，分析了每種表現(xiàn)形式產(chǎn)生的原因，并提出預(yù)防方法，供組培從業(yè)人員參考。

1 培養(yǎng)基表面的點(diǎn)狀真菌污染

1.1 表現(xiàn)形式

組培苗接種后，經(jīng)過一段時(shí)間的培養(yǎng)，在培養(yǎng)基表面產(chǎn)生一個(gè)或數(shù)個(gè)真菌菌斑，菌斑很大，非常明顯，主要集中在培養(yǎng)材料基部或周圍(圖1)，培養(yǎng)基其它地方也會有，但比例較少。這種污染是組培室生產(chǎn)過程中最為常見的污染。

1.2 原因和預(yù)防

這種少量點(diǎn)狀真菌污染主要是由于選擇母瓶不嚴(yán)格造成的，母瓶培養(yǎng)的材料本身已有真菌污染，在操作過程中發(fā)生交叉感染；二是操作不規(guī)范，工具消毒不徹底。

預(yù)防這種污染最重要的是安排專人嚴(yán)格挑選無真菌污染的培養(yǎng)材料。挑苗人員應(yīng)經(jīng)過嚴(yán)格的培訓(xùn)和長期的實(shí)踐，能將普通人員看不到的污染苗挑出來，從而避免交叉感染。規(guī)范操作程序可以防止因?yàn)槿藛T操作而造成的真菌污染。將已污染的材料挑出來，避免交叉污染。

圖1 培養(yǎng)基出現(xiàn)點(diǎn)狀菌斑

2 培養(yǎng)基表面的彌漫性真菌點(diǎn)狀污染

2.1 表現(xiàn)形式

不同于培養(yǎng)基點(diǎn)狀污染，彌漫性點(diǎn)狀污染是指培養(yǎng)基表面產(chǎn)生大量的真菌菌斑，菌斑不大，但數(shù)量較多，比較均勻散布在培養(yǎng)表面的各個(gè)部位(圖2)。這種污染一般出現(xiàn)在同一批次滅菌的培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)基儲存過程中就會出現(xiàn)污染。但也有批次培養(yǎng)基中個(gè)別培養(yǎng)基發(fā)現(xiàn)這種污染。

2.2 原因和預(yù)防

造成同一批次培養(yǎng)基彌漫性真菌點(diǎn)狀污染的主要原因是培養(yǎng)基消毒不徹底，滅菌鍋溫度壓力的傳感系統(tǒng)出現(xiàn)問題，造成溫度壓力顯示表的數(shù)值不正確。如果一個(gè)批次中個(gè)別培養(yǎng)基發(fā)生這種彌漫性污染，原因可能是瓶蓋未擰緊，滅菌過程中因瓶內(nèi)壓力大沖開瓶蓋，培養(yǎng)基冷卻過快造成瓶內(nèi)負(fù)壓，空氣被迅速壓入培養(yǎng)基中，造成培養(yǎng)基表面彌漫式污染。

避免彌漫性真菌點(diǎn)狀污染，在發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基產(chǎn)生這種彌漫性真菌污染后，要立即對滅菌鍋進(jìn)行檢修，確保滅菌鍋處于正常工作狀態(tài)。同批次培養(yǎng)基個(gè)別產(chǎn)生這種污染后，要注意培養(yǎng)瓶蓋要擰緊，同時(shí)滅菌后不要急于從滅菌鍋中拿出培養(yǎng)基，待培養(yǎng)基冷卻后再取出來。

圖2 彌散性點(diǎn)狀菌斑

3 培養(yǎng)瓶瓶壁瓶蓋散布式少量點(diǎn)狀真菌污染

3.1 表現(xiàn)形式

瓶壁和瓶蓋處有少量的真菌菌斑，特別是近瓶口下面內(nèi)凹處、瓶口和瓶蓋螺旋口處及瓶蓋內(nèi)面通氣口附近，特征是菌斑比較小，數(shù)量比較少，在瓶壁和瓶蓋處分布不均勻(圖3)。

3.2 原因和預(yù)防

造成這種污染的主要原因是培養(yǎng)瓶沒有及時(shí)洗刷和充分浸泡，造成干涸的微小培養(yǎng)基顆粒存在于培養(yǎng)瓶的死角處。這種干涸的微小培養(yǎng)基顆粒內(nèi)部可能包含真菌孢子，在正常的滅菌程序中滅菌不徹底，條件適宜時(shí)孢子萌發(fā)造成真菌污染。

避免此種污染，要確保培養(yǎng)瓶洗刷前充分浸泡，在洗刷過程中特別注意近瓶口下面內(nèi)凹處、瓶口和瓶蓋螺旋口處及瓶蓋內(nèi)面通氣口附近等死角處，保證培養(yǎng)瓶洗刷干凈。

圖3 瓶壁瓶蓋螺紋處點(diǎn)狀真菌

4 培養(yǎng)瓶瓶壁網(wǎng)狀菌絲真菌污染

4.1 表現(xiàn)形式

主要表現(xiàn)在瓶壁上附著有白色網(wǎng)狀菌絲，菌絲面積大小不一，數(shù)量不一，分布比較均勻，薄薄的一層，顏色很淺，不易被發(fā)現(xiàn)(圖4)。

圖4 瓶壁網(wǎng)狀菌絲真菌

4.2 原因和預(yù)防

造成這種方式污染的主要原因是瓶壁上有殘留培養(yǎng)基。當(dāng)培養(yǎng)瓶使用年限過長，瓶蓋螺旋口可能會出現(xiàn)磨損，瓶蓋上的透氣膜也會發(fā)生破裂，造成培養(yǎng)瓶封閉性變差而造成的。這種污染在生產(chǎn)中的危害程度最大，一般不易觀察到，經(jīng)接種后造成交叉污染。定期更換培養(yǎng)瓶，特別是更換培養(yǎng)瓶蓋可有效解決。