王玉霞， 梅 迪， 張克順， 張大偉， 王金龍， 高媛媛， 孫同毅*， 王文博*

（1.濰坊醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，山東濰坊261053；2.濰坊醫(yī)學(xué)院生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，山東濰坊261053；3.青島根源生物技術(shù)集團(tuán)有限公司，山東青島266000）

隨著國(guó)民生活水平的提高，消費(fèi)者對(duì)雞蛋質(zhì)量與安全的要求有所提高，因此飼料添加劑成為了養(yǎng)殖戶(hù)們關(guān)注的焦點(diǎn)。豆粕由于蛋白質(zhì)含量高而成為蛋雞養(yǎng)殖中經(jīng)常使用的蛋白類(lèi)飼料原料。但由于豆粕預(yù)處理、制備等相關(guān)工藝不成熟，往往會(huì)含有如胰蛋白酶、植酸類(lèi)、凝集素類(lèi)等抗?fàn)I養(yǎng)成分（ANF），從而導(dǎo)致在胃腸道內(nèi)無(wú)法消化和吸收，影響其使用效果（劉利曉等，2014；陳斌，2005）。濕料發(fā)酵豆粕中含有乳酸菌和酵母菌，在繁殖期會(huì)產(chǎn)生蛋白酶，從而提前將豆粕中的蛋白降解為多肽及氨基酸，降低了家禽胃腸道的負(fù)擔(dān)（宋立立等，2020）。濕料發(fā)酵豆粕作為營(yíng)養(yǎng)飼料可以添加至蛋雞的日糧中，為了探究其對(duì)蛋雞消化和雞蛋性質(zhì)的影響設(shè)計(jì)了本試驗(yàn)，以期能為濕料發(fā)酵豆粕在蛋雞飼養(yǎng)與雞蛋生產(chǎn)等方面的應(yīng)用提供科學(xué)而準(zhǔn)確的判斷。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 試驗(yàn)所用濕料發(fā)酵豆粕由青島根源生物技術(shù)集團(tuán)有限公司（GBW）提供，8000只試驗(yàn)蛋雞與飼料由青島平度市南村養(yǎng)殖廠(chǎng)提供。

1.2 動(dòng)物分組與飼料管理 將8000只蛋雞隨機(jī)分為對(duì)照組和試驗(yàn)組，每組為4000只。其中對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)組在基礎(chǔ)日糧中添加5%的濕料發(fā)酵豆粕，按養(yǎng)殖場(chǎng)的飼喂習(xí)慣統(tǒng)一連續(xù)分別飼喂10 d。

1.3 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.3.1 微生物含量測(cè)定 乳酸菌含量參照企標(biāo)Q/370783YSY 013-2014，采用MRS傾注法測(cè)定。酵母菌含量按照企標(biāo)Q/370783YSY 014-2014，使用YPD涂布法測(cè)定。芽孢菌含量按照國(guó)標(biāo)GBT 26428-2010，使用NA涂布法測(cè)定。按照國(guó)標(biāo)GB 4789.15-2010，使用孟加拉紅傾注法對(duì)霉菌含量進(jìn)行檢測(cè)。

1.3.2 糞便消化率測(cè)定 參考測(cè)定奶牛糞便消化率時(shí)使用的三層糞便分析篩，在收集蛋雞糞便后，使用相同糞便分析篩對(duì)不同層內(nèi)糞便比例進(jìn)行分析測(cè)定。

1.3.3雞蛋物理性質(zhì)測(cè)定 測(cè)量并記錄雞蛋蛋重、蛋黃高度、雞蛋大頭、雞蛋小頭和中間厚度等物理性質(zhì)。通過(guò)使用羅氏比色扇（何青芬等，2019）和強(qiáng)度測(cè)定儀（王加美等，2008）對(duì)蛋黃顏色和蛋殼強(qiáng)度進(jìn)行定值檢測(cè)。觀(guān)察雞蛋蛋清、雞蛋蛋黃的形態(tài)及強(qiáng)度變化，并拍照記錄。

1.3.4 蛋殼性質(zhì)測(cè)定蛋殼的粗灰分參照國(guó)標(biāo)GB/T 6438-2007測(cè)定。通過(guò)EDTA法測(cè)定鈣含量及磷含量（張麗英，2003）。對(duì)蛋殼樣品進(jìn)行噴金制樣，通過(guò)掃描式電子顯微鏡（SEM）分別對(duì)蛋殼的外表面、側(cè)截面和內(nèi)表面進(jìn)行微觀(guān)拍照，并進(jìn)行后續(xù)分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)與分析試驗(yàn)數(shù)據(jù)均使用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。通過(guò)SPSS 25.0軟件中單因素ANOVA分析和Duncan's多重比較法分析對(duì)照組和試驗(yàn)組的差異顯著性，P＜0.05視為兩組間存在顯著性差異。

2 結(jié)果

2.1 微生物含量由表1可知，濕料發(fā)酵豆粕中芽孢菌含量為2.48×108cfu/g，占所檢測(cè)微生物99%以上，為主要微生物。其次為乳酸菌（5.07×105cfu/g），酵母菌（1.2×105cfu/g）。而霉菌含量為10 cfu/g，含量極少。

表1 濕料發(fā)酵豆粕不同微生物含量cfu/g

2.2 蛋雞糞便消化率由表2可知，對(duì)照組糞便上層篩、中層篩和下層篩含量分別為6.8%、83.5%和9.7%，中層比例偏高，下層比例偏低。試驗(yàn)組取等量的糞便經(jīng)沖洗后發(fā)現(xiàn)，上層篩、中層篩和下層篩糞便比例分別為5.3%、71.5%和23.2%。與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組中層篩的糞便截留物明顯變少，下層篩中糞便增多。

表2 蛋雞糞便殘留比例%

2.3 雞蛋物理性質(zhì)由表3可知，試驗(yàn)組雞蛋的各物理性質(zhì)與對(duì)照組相比均沒(méi)有明顯差別（P＞0.05）。

表3 雞蛋物理性質(zhì)

通過(guò)對(duì)蛋清和蛋黃的形態(tài)進(jìn)行觀(guān)察發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組蛋清韌性不足，不能提起，蛋清變散。試驗(yàn)組蛋清韌性增加，提起后，蛋黃形態(tài)保持不變。

2.4 蛋殼性質(zhì)

2.4.1 蛋殼成分由表4可知，兩組蛋殼中的鈣含量和磷含量無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。但相較于對(duì)照組，試驗(yàn)組蛋雞產(chǎn)的雞蛋粗灰分（無(wú)機(jī)物）含量由（89.81±4.76）%增加到（93.55±1.15）%，平均提高了3.74個(gè)百分點(diǎn)（P＜0.05）。

表4 蛋殼成分及含量%

2.4.2 蛋殼性質(zhì)蛋殼外表面SEM結(jié)果如圖1所示。對(duì)照組蛋殼表面角質(zhì)層上的裂縫較寬，且分布較多呈網(wǎng)格狀，表明蛋殼脆弱易破；而試驗(yàn)組蛋殼外表面更加平整，僅觀(guān)察到幾處細(xì)小的龜裂，結(jié)構(gòu)致密且堅(jiān)韌，其蛋殼強(qiáng)度相較于對(duì)照組有所增強(qiáng)。

圖1 蛋殼外表面SEM圖

蛋殼側(cè)截面SEM結(jié)果如圖2所示。從對(duì)照組側(cè)面SEM結(jié)果驗(yàn)證了外表面SEM圖象，其中寬大的裂縫深入蛋殼，使蛋殼脆弱易破。而試驗(yàn)組蛋殼側(cè)截面僅觀(guān)察到少量細(xì)縫，其晶體層與柵欄層形成更為致密的結(jié)構(gòu)，蛋殼乳突層與內(nèi)表面纖維層連接緊密。通過(guò)SEM軟件進(jìn)行了蛋殼厚度測(cè)量，對(duì)照組蛋殼平均厚度為397.5 μm。試驗(yàn)組的蛋殼更薄，平均厚度為369.8 μm，比對(duì)照組厚度減少了7%。試驗(yàn)組蛋殼橫截面更為緊實(shí)、平滑，各層結(jié)構(gòu)更加致密使蛋殼更薄。

圖2 蛋殼側(cè)截面SEM圖

蛋殼內(nèi)側(cè)SEM結(jié)果如圖3所示。對(duì)照組和試驗(yàn)組蛋殼內(nèi)表面纖維較為密集，主次分支及層次分布均勻有序且清晰，網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)中多處可以看到微結(jié)節(jié)結(jié)構(gòu)。并沒(méi)有觀(guān)察到明顯不同。

圖3 蛋殼內(nèi)側(cè)SEM圖

3 討論

3.1 微生物含量 豆粕作為一種良好的植物性飼料原料，具有蛋白含量高、蛋白優(yōu)質(zhì)和有毒物質(zhì)含量極微等優(yōu)點(diǎn)。但豆粕中同時(shí)含有許多抗?fàn)I養(yǎng)因子，如蛋白酶抑制因子和皂角苷等，導(dǎo)致飼料在胃腸道內(nèi)的消化和吸收受到影響。朱長(zhǎng)生等（2014）認(rèn)為，微生物發(fā)酵法可以利用微生物生長(zhǎng)吸收降解豆粕中的抗?fàn)I養(yǎng)因子，并產(chǎn)生各種對(duì)畜禽有益的活性物質(zhì)。另外，其中保留的益生菌還可以促進(jìn)蛋雞的消化。

研究發(fā)現(xiàn)，使用不同種類(lèi)微生物發(fā)酵豆粕，會(huì)產(chǎn)生成分及作用不同的豆粕飼料。覃春富等（2013）發(fā)現(xiàn)，使用乳酸菌進(jìn)行發(fā)酵時(shí)，可以降解大部分抗?fàn)I養(yǎng)因子，并生成酸性物質(zhì)降低pH，進(jìn)而抑制有害細(xì)菌的生長(zhǎng)。劉興等（2020）認(rèn)為，芽孢桿菌可以將豆粕中的大分子蛋白降解為氨基酸和小肽等，芽孢桿菌的芽孢可以順利進(jìn)入腸道抑制有害菌生長(zhǎng)，維持腸道健康。謝鵬等（2019）研究表明，酵母菌發(fā)酵的豆粕蛋白含量高，其可以改善蛋白品質(zhì)，促進(jìn)動(dòng)物吸收和生長(zhǎng)。本試驗(yàn)中使用的5%濕料發(fā)酵豆粕主要含有芽孢菌2.48×108cfu/g，乳酸菌5.07×105cfu/g和酵母菌1.2×105cfu/g。因此本試驗(yàn)使用的豆粕具有降解抗?fàn)I養(yǎng)因子，抑制有害菌生長(zhǎng)，調(diào)控腸道微生態(tài)環(huán)境及正常功能的潛力。

3.2 蛋雞糞便消化率 糞便消化率可以反映雞腸道內(nèi)飼料的消化情況，本試驗(yàn)采用奶牛糞便分析篩對(duì)蛋雞的糞便進(jìn)行了分析。分析篩頂層截留完整的糧食顆粒，即大的長(zhǎng)粗顆粒；中層截留破碎的谷物顆粒，即短粗顆粒；底層為飼料小顆粒（李伍杰等，2019）。結(jié)果顯示，與飼喂基礎(chǔ)日糧對(duì)比，蛋雞在飼喂5%濕料發(fā)酵豆粕后，糞便在上層和中層的殘留比例明顯下降，底層殘留比例明顯增加，提高了13.5%。以上結(jié)果說(shuō)明蛋雞吸收和消化飼料的情況明顯增強(qiáng)，推測(cè)可能是由于濕料發(fā)酵豆粕中含有豐富的芽孢菌、乳酸菌及酵母菌等益生菌，其對(duì)抗?fàn)I養(yǎng)因子的降解作用增加了機(jī)體對(duì)豆粕的降解和消化，使糞便的顆粒大小有所下降。因此，使用濕料發(fā)酵豆粕飼養(yǎng)蛋雞，有益于蛋雞腸道健康，提高飼料的利用率，從而對(duì)雞蛋質(zhì)量有所影響。

3.3 雞蛋物理性質(zhì) 雞蛋物理性質(zhì)的評(píng)價(jià)指標(biāo)主要有蛋重、蛋黃高度、顏色、大頭厚度、小頭厚度和中間厚度等（劉燕榮等，2013）。本試驗(yàn)中，兩組雞蛋的物理性質(zhì)指標(biāo)均無(wú)顯著性差異（P＞0.05），添加濕料發(fā)酵豆粕并沒(méi)有改變蛋雞產(chǎn)蛋的物理性質(zhì)。

雞蛋蛋清是由蛋雞輸卵管的膨大部上皮分泌的一種含有蛋白質(zhì)的膠體，蛋清的品質(zhì)是檢驗(yàn)雞蛋新鮮度的一個(gè)重要指標(biāo)。哈氏單位是評(píng)價(jià)蛋清品質(zhì)的重要指標(biāo)（王曉翠等，2019），本試驗(yàn)中，對(duì)照組和試驗(yàn)組的哈氏單位分別為（68.61±10.08）和（69.56±12.09），在統(tǒng)計(jì)學(xué)上沒(méi)有顯著性差異（P＞0.05）。但蛋清韌性卻明顯增強(qiáng)，對(duì)照組的蛋清韌性不足，蛋清變散，無(wú)法提起蛋黃；而試驗(yàn)組蛋清韌性明顯增加，提起后，蛋黃形態(tài)可以保持不變。說(shuō)明飼喂5%濕料發(fā)酵豆粕可以明顯改善蛋清的韌性和黏稠度，并一定程度上保持雞蛋新鮮度。

3.4 蛋殼性質(zhì) 蛋殼的硬度主要跟無(wú)機(jī)物含量呈正相關(guān)，即蛋殼中無(wú)機(jī)物含量越高，有機(jī)物含量越低，則蛋殼硬度越高，蛋殼品質(zhì)越好。蛋殼中無(wú)機(jī)物的含量可以用粗灰分表示（章世元等，2008）。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，對(duì)照組蛋殼強(qiáng)度為（4.13±1.07）kg/cm2，試驗(yàn)組蛋殼強(qiáng)度為（4.82±0.85）kg/cm2，無(wú)明顯差異（P＞0.05）。對(duì)照組蛋殼粗灰分含量為（89.81±4.76）%，而 試 驗(yàn) 組 的 粗 灰 分 含 量 為（93.55±1.15）%，平均增加了4.16%。添加濕料發(fā)酵豆粕后，蛋殼灰分含量顯著提高（P＜0.05），說(shuō)明飼養(yǎng)后無(wú)機(jī)物含量明顯提高。但蛋殼中的鈣含量和磷含量變化并不顯著（P＞0.05）。鈣含量的高低可以反映出蛋殼對(duì)外力的抵抗能力，即蛋殼強(qiáng)度（周光玉等，2012）。兩組的蛋殼強(qiáng)度并未因添加濕料發(fā)酵豆粕而產(chǎn)生顯著性差異（P＞0.05），這與鈣含量并沒(méi)有發(fā)生改變的結(jié)果相互對(duì)應(yīng)。另外，磷含量也無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。蛋殼的品質(zhì)并不能通過(guò)蛋殼中鈣和磷等成份的含量高低來(lái)判斷，應(yīng)結(jié)合其他指標(biāo)和蛋殼內(nèi)外表面和斷裂面微觀(guān)結(jié)構(gòu)等屬性來(lái)進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。

蛋殼SEM結(jié)果表明，相比對(duì)照組，試驗(yàn)組蛋殼正面的表面角質(zhì)層上裂隙及皴裂紋有所減少，表面角質(zhì)層變得平整致密。俞路等（2007）和孫杰等（2011）的研究表明，高品質(zhì)的蛋殼具有致密的超微結(jié)構(gòu)，其中乳突層的有效厚度是評(píng)價(jià)蛋殼品質(zhì)的重要依據(jù)。蛋殼側(cè)面的掃描結(jié)果顯示，試驗(yàn)組蛋殼乳突層與內(nèi)表面纖維層的連接相較于對(duì)照組更加緊密，而且平均厚度減少了7%，蛋殼質(zhì)量更高。蛋殼膜緊靠在蛋殼內(nèi)側(cè)，微觀(guān)狀態(tài)下為纖維狀。兩組蛋殼內(nèi)部的表面纖維較為密集，主次分支及層次分布均勻有序且清晰，網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)中多處可以看到微結(jié)節(jié)結(jié)構(gòu)，這與王紹清等（2013）的研究結(jié)果一致。說(shuō)明添加濕料發(fā)酵豆粕并沒(méi)對(duì)蛋殼膜結(jié)構(gòu)產(chǎn)生顯著影響。

4 結(jié)論

在蛋雞飼料中添加5.0%濕料發(fā)酵豆粕，雞蛋蛋清的韌性增加，蛋殼灰分明顯增加，蛋殼結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，強(qiáng)度增強(qiáng)，品質(zhì)明顯提升。另外，飼料的消化率顯著提升，蛋雞腸炎狀況有所改善。