楊錦蓉，齊建敏，張麗榮，任麗穎，賈成國(guó)

(河北威遠(yuǎn)生物化工有限公司，石家莊 050011)

甲氨基阿維菌素B2a苯甲酸鹽為我公司近兩年來(lái)的創(chuàng)制產(chǎn)品，它是以阿維菌素B2a為原料合成得到的阿維菌素類似物。通過(guò)室內(nèi)生測(cè)與田間藥效試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)其對(duì)小菜蛾、葉螨(紅蜘蛛)、黏蟲(chóng)、水稻二化螟等害蟲(chóng)具有非常好的防治效果，且其活性顯著高于阿維菌素B2a，具有較大的農(nóng)藥開(kāi)發(fā)價(jià)值[1-4]。

隨著甲氨基阿維菌素B2a苯甲酸鹽在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中應(yīng)用越來(lái)越多，對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)以測(cè)定該農(nóng)藥原藥含量和控制其產(chǎn)品質(zhì)量顯得尤為必要。然而，目前有關(guān)甲氨基阿維菌素B2a苯甲酸鹽的檢測(cè)方法未見(jiàn)報(bào)道，只能查到其有關(guān)類似物甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽檢測(cè)方法[5-8]?；诖耍疚拈_(kāi)展了采用高效液相色譜法測(cè)定甲氨基阿維菌素B2a苯甲酸鹽原藥有效成分含量的研究，以期為該農(nóng)藥產(chǎn)品生產(chǎn)與應(yīng)用的質(zhì)量控制和分析方法提供技術(shù)參考。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Agilent 1260 型高效液相色譜儀配自動(dòng)進(jìn)樣器、DAD檢測(cè)器和色譜工作站(美國(guó)安捷倫公司)；BSA124S-CW電子天平[賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司]；KQ-250B超聲波儀(昆山市超聲儀器有限公司)；甲氨基阿維菌素B2a苯甲酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品[質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98.0%，國(guó)家農(nóng)藥質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心(沈陽(yáng))]，甲醇(色譜純，西隴科學(xué)股份有限公司)，乙腈(色譜純，西隴科學(xué)股份有限公司)，氨水(分析純，天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司)，純凈水(杭州娃哈哈公司)。

1.2 溶液制備

標(biāo)樣溶液的制備：稱取甲氨基阿維菌素B2a苯甲酸鹽標(biāo)樣約0.05 g (精確至0.000 2 g)于100 mL容量瓶中，加甲醇超聲溶解，冷卻至室溫后用甲醇稀釋至刻度，搖勻備用。

試樣溶液的制備：稱取甲氨基阿維菌素B2a苯甲酸鹽樣品0.05 g (精確至0.000 2 g)于100 mL容量瓶中，加甲醇超聲溶解，冷卻至室溫后用甲醇稀釋至刻度、搖勻，0.45 μm濾膜過(guò)濾后進(jìn)行分析測(cè)定。

1.3 色譜測(cè)定條件

DAD檢測(cè)器；C18色譜柱(250 mm× 4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相為甲醇+乙腈+0.33%氨水溶液=43+43+14(體積比)；流速為1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為245 nm；柱溫為30 ℃；進(jìn)樣量為5 μL。在該色譜條件下，甲氨基阿維菌素B2a苯甲酸鹽的保留時(shí)間為11.2 min。

1.4 測(cè)定

在上述色譜操作條件下，待儀器穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，直到相鄰2針甲氨基阿維菌素B2a苯甲酸鹽標(biāo)樣的峰面積相對(duì)變化小于1.5%后，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測(cè)定。

1.5 結(jié)果的計(jì)算

樣品中甲氨基阿維菌素B2a苯甲酸鹽的質(zhì)量分?jǐn)?shù)含量x(%)按下式計(jì)算：

式中：A1為標(biāo)樣溶液中甲氨基阿維菌素B2a苯甲酸鹽峰面積的平均值；A2為試樣溶液中甲氨基阿維菌素B2a苯甲酸鹽峰面積的平均值；m1為標(biāo)樣的質(zhì)量，g；m2為試樣的質(zhì)量，g；P為標(biāo)樣中甲氨基阿維菌素B2a苯甲酸鹽質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。

2 結(jié)果與分析

2.1 流動(dòng)相的選擇

選用不同比例的甲醇+0.33%氨水溶液、乙腈+0.33%氨水溶液、甲醇+乙腈+0.33%氨水溶液為流動(dòng)相，對(duì)甲氨基阿維菌素B2a進(jìn)行液相色譜測(cè)定。當(dāng)用甲醇+0.33%氨水溶液時(shí)，主峰峰型較差；選用乙腈+0.33%氨水溶液(75+25，體積比)時(shí)，原藥中有一雜質(zhì)峰與主峰無(wú)法完全分離，使得測(cè)定結(jié)果誤差較大；選用甲醇+乙腈+0.33%氨水溶液時(shí)，通過(guò)調(diào)節(jié)3者的比例，發(fā)現(xiàn)當(dāng)甲醇+乙腈+0.33%氨水溶液(體積比為43∶43∶14)時(shí)，雜質(zhì)能與主峰基本分離，峰形較好且出峰時(shí)間11.2 min。

2.2 波長(zhǎng)的選擇

取質(zhì)量濃度為0.5 mg/mL的甲氨基阿維菌素B2a苯甲酸鹽標(biāo)準(zhǔn)樣品，在190～400 nm的波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描(圖1)，發(fā)現(xiàn)在244 nm附近處有最大吸收，故確定244 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

圖1 甲氨基阿維菌素B2a光譜圖

2.3 專屬性試驗(yàn)

分別取甲醇作為空白溶液及甲氨基阿維菌素B2a苯甲酸鹽原藥樣品溶液在上述液相色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，得到的圖譜如圖2、3所示，且原藥主峰峰純度為99.992%，證明雜質(zhì)峰不干擾有效成分含量的測(cè)定，本方法專屬性好。

圖2 空白樣品譜圖

圖3 甲氨基阿維菌素B2a原藥樣品譜圖

2.4 線性關(guān)系

準(zhǔn)確配制甲氨基阿維菌素B2a苯甲酸鹽不同質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.11、0.23、0.45、0.68、0.9、1.1 mg/mL)按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定。以樣品濃度為橫坐標(biāo)，以相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)作圖(圖4)。由圖4可見(jiàn)，在質(zhì)量濃度為0.048 2～1.446 4 mg/mL時(shí)，甲氨基阿維菌素B2a苯甲酸鹽的質(zhì)量濃度與峰面積之間表現(xiàn)出良好的線性關(guān)系，其線性回歸方程為y=8 400.852 34x-173.019 25，相關(guān)系數(shù)r為0.999 5(n=6)。

圖4 方法的線性關(guān)系圖

2.5 方法的精密度

分別稱取同一個(gè)樣品約0.05 g (精確至0.000 2 g)于5個(gè)100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度、搖勻，進(jìn)行液相色譜測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1。可見(jiàn)，樣品中甲氨基阿維菌素B2a苯甲酸鹽的質(zhì)量分?jǐn)?shù)含量為90.34%，RSD為0.19%。

表1 方法精密度測(cè)定結(jié)果

2.6 方法的準(zhǔn)確度

在已知樣品中，加入不同體積的標(biāo)樣溶液，使達(dá)到正常測(cè)定濃度的80%、100%、120%，按照含量測(cè)定，計(jì)算加標(biāo)回收率，結(jié)果見(jiàn)表2。可見(jiàn)，甲氨基阿維菌素B2a苯甲酸鹽的回收率為99.0%～99.6%，平均回收率為99.3%。

表2 方法的準(zhǔn)確度測(cè)定結(jié)果

3 結(jié) 論

本文建立了一種高效液相色譜法測(cè)定甲氨基阿維菌素B2a苯甲酸鹽原藥含量的分析方法。該方法具有專屬性好、精密度和準(zhǔn)確度高等特點(diǎn)，符合產(chǎn)品定量測(cè)定要求，適合于甲氨基阿維菌素B2a苯甲酸鹽原藥的含量檢測(cè)。