葉吉明，楊景然，劉 宇，陳米林，冉忠梅*，周培德，柏永強(qiáng)

(1．云南省第一人民醫(yī)院 藥學(xué)部 ，云南 昆明650032；2．寧波工程學(xué)院 理學(xué)院，浙江 寧波315211；3．昆明賽諾制藥股份有限公司 質(zhì)量部，云南 昆明650051)

止癢搽劑是某醫(yī)院皮膚科的外用經(jīng)驗(yàn)方，臨床上已使用多年.其主要由薄荷腦、麝香草酚、甘油，溶于75%乙醇制成.該搽劑具有清涼止癢作用，主要用于治療蚊蟲(chóng)叮咬及瘙癢性皮膚病患者.作為醫(yī)院的傳統(tǒng)制劑，其具有療效確切、價(jià)廉物美的優(yōu)勢(shì).但對(duì)其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的鑒定仍停留在對(duì)薄荷腦、麝香草酚等使用化學(xué)顯色法所做的定性鑒別上，導(dǎo)致質(zhì)量控制環(huán)節(jié)相對(duì)單一，不能對(duì)制劑質(zhì)量進(jìn)行全面有效管理和控制.目前，對(duì)薄荷腦、麝香草酚和乙醇等的相關(guān)測(cè)定報(bào)道[1-6]很多，但作為復(fù)方制劑協(xié)同處方，應(yīng)該從止癢搽劑制劑自身入手，對(duì)制劑中的關(guān)鍵藥物成分進(jìn)行分析和評(píng)價(jià)，而非僅對(duì)單一成分進(jìn)行監(jiān)測(cè).為此，采用毛細(xì)管氣相色譜法對(duì)止癢搽劑進(jìn)行系統(tǒng)穩(wěn)定性考察，以期為止癢搽劑的質(zhì)量控制、安全性和有效性提供科學(xué)依據(jù).

1 儀器與方法

1.1 儀器與試劑

GC-2010氣相色譜儀、FID檢測(cè)器、氫氣發(fā)生器、AO-20i自動(dòng)進(jìn)樣器(均為日本島津有限公司)；CA-2空氣發(fā)生器(武漢科林普豐儀器有限公司)；CPA225D型電子天平(賽多利斯)；高純氮?dú)?昆明廣瑞達(dá)特種氣體有限責(zé)任公司，9.999%).

薄荷腦對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：100508-201603)；麝香草酚對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110728-201707)；止癢搽劑(云南省第一人民醫(yī)院制劑，批號(hào)：20181217；20181218；20181219.規(guī)格：100 mL/瓶，含麝香草酚、薄荷腦各 1 g).

萘、乙醇、無(wú)水乙醇(均為分析純，天津市風(fēng)船化學(xué)試劑有限公司)；正丙醇(分析純，汕頭市西隴化工廠有限公司，批號(hào)：0805312)；甘油(藥用輔料，江西益普生藥業(yè)有限公司，批號(hào)：20181201)；其他試劑為分析純；水為純化水.

1.2 方法

1.2.1 制劑樣品的色譜條件

色譜柱：6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷為固定液的毛細(xì)管柱，以聚乙二醇2000(或極性相近)為固定液.起始溫度為 130 ℃，維持 8 min，再以 50 ℃/min 的速率升溫至 200 ℃，維持 6 min.進(jìn)樣口溫度 250 ℃，檢測(cè)器溫度 250 ℃，不分流進(jìn)樣，載氣為氮?dú)猓魉?3.0 mL/min，進(jìn)樣體積 1 μL，按內(nèi)標(biāo)法以峰面積計(jì)算.

1.2.2 溶液的制備

1)內(nèi)標(biāo)溶液制備：取萘適量，精密稱(chēng)定，加無(wú)水乙醇溶解并定量稀釋制成每 1 mL 中含 0.4 mg 的溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液.

2)對(duì)照品溶液制備：精密稱(chēng)定薄荷腦對(duì)照品 20 mg ，置于 50 mL 容量瓶中，然后加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，制成每 1 mL 含 0.4 mg 的溶液；精密稱(chēng)定麝香草酚對(duì)照品 20 mg，置于 50 mL 容量瓶中，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，制成每 1 mL 含 0.4 mg 的溶液；取甘油 25 mg，精密量取，置 50 mL 量瓶中，然后用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，制成每 1 mL 中含甘油 0.5 mg 的溶液；精密吸取薄荷腦對(duì)照品溶液、麝香草酚對(duì)照品溶液、甘油溶液和內(nèi)標(biāo)溶液各 5 mL ，置于 25 mL 容量瓶中，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，作為混合對(duì)照品溶液.

3)供試品溶液制備：精密吸取止癢搽劑(規(guī)格：100 mL/瓶，批號(hào)：20181217；20181218；20181219)2 mL，置于 50 mL 容量瓶中，再用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻.精密量取上述溶液 5 mL，置于 25 mL 容量瓶中，再加入內(nèi)標(biāo)溶液 5 mL 后，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻作為供試品溶液.

4)陰性樣品溶液制備：麝香草酚陰性樣品溶液制備.取薄荷腦 1 g、甘油 6 g，加75%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成 100 mL 溶液.精密吸取上述溶液 2 mL 置 50 mL 容量瓶中，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，制成麝香草酚陰性樣品溶液.

薄荷腦陰性樣品溶液制備：取麝香草酚 1 g、甘油 6 g，加75%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成 100 mL 溶液.精密吸取上述溶液 2 mL 置 50 mL 容量瓶中，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，制成薄荷腦陰性樣品溶液.

甘油樣品溶液制備：取甘油 6 g ，加75%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成 100 mL 甘油樣品溶液.

1.2.3 測(cè)定乙醇的色譜條件

6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷為固定液的毛細(xì)管柱.起始溫度為40 ℃，維持 2 min，以 3 ℃/min 的速率升至 65 ℃，再以 25 ℃/min 的速率升溫至 200 ℃ ，維持 10 min；進(jìn)樣口溫度 200 ℃，分流比為1∶1；檢測(cè)器(FID)溫度 220 ℃；載氣為氮?dú)?，流?3.0 mL/min；頂空進(jìn)樣，進(jìn)樣體積 1 μL，平衡溫度 85 ℃，平衡時(shí)間 20 min.

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

按1.2.2項(xiàng)下方法配制各溶液，按1.2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄色譜圖，見(jiàn)圖1～圖9.結(jié)果表明，麝香草酚對(duì)照品溶液、薄荷腦對(duì)照品溶液、甘油樣品溶液、內(nèi)標(biāo)溶液、供試品溶液(無(wú)內(nèi)標(biāo))、供試品溶液(有內(nèi)標(biāo))、麝香草酚陰性樣品溶液和薄荷腦陰性樣品溶液各峰形良好，分離度大于1.5，理論塔板數(shù)按薄荷腦、麝香草酚峰計(jì)算不低于 1 500.

圖1 麝香草酚對(duì)照品溶液色譜圖

圖2 薄荷腦對(duì)照品溶液色譜圖

圖3 甘油樣品溶液色譜圖

圖4 內(nèi)標(biāo)溶液色譜圖

圖5 供試品溶液(無(wú)內(nèi)標(biāo))色譜圖

圖6 供試品溶液(有內(nèi)標(biāo))色譜圖

圖7 麝香草酚陰性樣品溶液色譜圖

圖8 薄荷腦陰性樣品溶液色譜圖

圖9 混合對(duì)照品溶液色譜圖

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制

分別精密吸取薄荷腦、麝香草酚對(duì)照品溶液(0.4 mg/mL)1，2，5，8，10 mL 置 25 mL 量瓶中，加內(nèi)標(biāo)溶液 5 mL，加無(wú)水乙醇定容至每 1 mL 含薄荷腦、麝香草酚0.016，0.032，0.080，0.129，0.162 mg 的溶液.精密吸取上述溶液各 1 μL，按1.2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度(X)為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線(xiàn)性回歸計(jì)算，得到薄荷腦和麝香草酚回歸方程分別為：Y=10.855X-0.021 4，R2=0.999 5；Y=12.304X-0.032 4，R2=0.999 4.

結(jié)果表明，薄荷腦、麝香草酚質(zhì)量濃度在0.016～0.161 mg/mL 內(nèi)與峰面積呈良好線(xiàn)性關(guān)系.

2.3 精密度試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液1 μL，在上述色譜條件下，重復(fù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積，計(jì)算得到麝香草酚、薄荷腦峰面積的RSD分別為0.33%和0.16%.

2.4 重復(fù)性考察

取批號(hào)為20181217制劑樣品，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，計(jì)算得到麝香草酚、薄荷腦峰面積的RSD分別為0.80%和0.21%.

2.5 穩(wěn)定性考察

取供試品溶液(批號(hào)：20181217)于室溫下存放，分別于0，2，4，6，24 h 進(jìn)行測(cè)定，得到麝香草酚、薄荷腦峰面積的RSD分別1.14%和0.40%.

2.6 加樣回收試驗(yàn)

2.6.1 麝香草酚加樣回收試驗(yàn)

精密吸取按1.2.2項(xiàng)下方法制備的麝香草酚陰性樣品溶液 5 mL，置 25 mL 量瓶中，共6份，分別精密加入4，5，6 mL 麝香草酚對(duì)照品溶液和 5 mL 內(nèi)標(biāo)溶液，用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻.精密吸取上述溶液各 1 μL，按1.2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，結(jié)果見(jiàn)表1.

2.6.2 薄荷腦加樣回收試驗(yàn)

精密吸取按1.2.2項(xiàng)下方法制備的薄荷腦陰性樣品溶液 5 mL，置 25 mL 量瓶中，共6份，分別精密加入4，5，6 mL 薄荷腦對(duì)照品溶液和 5 mL 內(nèi)標(biāo)溶液，用無(wú)水乙醇稀釋至刻度.精密吸取上述溶液各 1 μL，按1.2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，結(jié)果見(jiàn)表2.

表1 麝香草酚加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

表2 薄荷腦加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

2.7 樣品質(zhì)量分?jǐn)?shù)測(cè)定及限度確定

取止癢搽劑(規(guī)格：100 mL/瓶，批號(hào)：20181217；20181218；20181219)，按1.2.2項(xiàng)下方法配制溶液，按1.2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，其質(zhì)量分?jǐn)?shù)測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3、表4.

表3 3批止癢搽劑中薄荷腦的質(zhì)量分?jǐn)?shù)測(cè)定

2.8 校正因子測(cè)定

準(zhǔn)確量取恒溫至 20 ℃ 的無(wú)水乙醇 5 mL ，2份平行.置于 100 mL 量瓶中，準(zhǔn)確加入恒溫至 20 ℃ 的正丙醇(內(nèi)標(biāo)物質(zhì))5 mL，加水稀釋至刻度，搖勻，精密吸取該溶液 1 mL，并置于 100 mL 量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液.準(zhǔn)確吸取上述溶液 3 mL，置于 10 mL 頂空進(jìn)樣瓶中，密封，按1.2.3項(xiàng)下測(cè)定乙醇的色譜條件，進(jìn)樣分析，每份對(duì)照品溶液各進(jìn)樣3次，測(cè)定其峰面積，并計(jì)算平均校正因子.由計(jì)算結(jié)果可知，校正因子相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.3%.

2.9 乙醇體積分?jǐn)?shù)測(cè)定

精密吸取恒溫至 20 ℃ 的供試品適量(相當(dāng)于乙醇 5 mL)，置于 100 mL 量瓶中，準(zhǔn)確加入恒溫至 20 ℃ 的正丙醇 5 mL，加水稀釋至刻度，搖勻，準(zhǔn)確吸取該溶液 1 mL，置于 100 mL 量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液.精密吸取上述溶液 3 mL，置 10 mL 頂空進(jìn)樣瓶中，密封，按1.2.3項(xiàng)下測(cè)定乙醇的色譜條件，進(jìn)樣分析，測(cè)定峰面積，按內(nèi)標(biāo)法以峰面積計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)表5.

3 小結(jié)

本研究表明，采用毛細(xì)管氣相色譜法能夠同時(shí)測(cè)定薄荷腦、麝香草酚、甘油和乙醇的含量，且方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，精密度好、準(zhǔn)確度高，具有專(zhuān)屬性和耐用性.此外，無(wú)論是理論塔板數(shù)還是分離度對(duì)薄荷腦、麝香草酚的分離能力都較為適合，且分析時(shí)間短，能夠快速準(zhǔn)確地進(jìn)行定性和定量分析，有利于制劑質(zhì)量的控制.

醫(yī)院制劑有著強(qiáng)烈的“地方特色”，其作為醫(yī)院使用多年的協(xié)定處方，具有臨床療效確定、價(jià)格便宜等優(yōu)勢(shì).目前，由于醫(yī)院制劑大多為品種多、數(shù)量少、周期短，為避免在制劑制備過(guò)程中出現(xiàn)“短板”，應(yīng)該對(duì)制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、工藝、生產(chǎn)和使用等過(guò)程進(jìn)行嚴(yán)格管控，以保證其臨床療效和安全[7].而在現(xiàn)行制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，對(duì)質(zhì)量的控制方法簡(jiǎn)單、粗糙，長(zhǎng)久以往，將大大影響臨床療效和制劑的發(fā)展.因此，對(duì)制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行提升，進(jìn)一步保障患者安全用藥[8]是當(dāng)務(wù)之急和必然趨勢(shì).