王梅瑛

（青海省海西州中心血站 質(zhì)管科，青海 海西 817099）

0 引言

為使血液傳播疾病的發(fā)生率有所降低，使窗口期病毒感染減少，縮短檢測(cè)時(shí)間十分必要，所以?xún)杀槊嘎?lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）在實(shí)際HCV、HBV 及HIV 檢驗(yàn)中較為普遍，為保證檢測(cè)準(zhǔn)確性，通常聯(lián)合應(yīng)用核酸檢測(cè)及ELISA 檢測(cè)[1-3]。ELISA指的是將具有可溶性的抗體或者抗原與聚苯乙烯等載體進(jìn)行結(jié)合，并借助抗體抗原的特異性結(jié)合開(kāi)展免疫反應(yīng)的定量與定性的檢測(cè)方法。核酸檢測(cè)主要針對(duì)的是病毒內(nèi)的核酸，此方法可用于查找患者糞便、血液、呼吸道標(biāo)本中是否有外部入侵的病毒核酸存在，可以確定患者是否發(fā)生病毒感染，當(dāng)檢測(cè)結(jié)果呈現(xiàn)陽(yáng)性時(shí)，就說(shuō)明患者身體中存在入侵病毒。因此本文對(duì)核酸檢測(cè)存在反應(yīng)性及血清學(xué)陰性的標(biāo)本進(jìn)行了對(duì)比分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機(jī)選取2017 年1 月至2019 年12 月間100份抗-HIV、抗-HCV 及HBsAg 灰區(qū)標(biāo)本和反應(yīng)性標(biāo)本以及3000 份抗-HIV、抗-HCV 及HBsAg 陰性標(biāo)本。

1.2 方法

試劑與儀器：核酸檢測(cè)試劑及ELISA 檢測(cè)試劑廠家不同，前者來(lái)自于上海浩源；后者包含抗-HIV、抗-HCV 及HBsAg 試劑，分別來(lái)自于北京萬(wàn)泰、廈門(mén)新創(chuàng)。另外還需來(lái)自上海浩源公司的全自動(dòng)核酸檢測(cè)反應(yīng)體系構(gòu)建系統(tǒng)Pre-NAT 及奧斯邦公司的全自動(dòng)酶免檢測(cè)系統(tǒng)，還有低溫離心機(jī)[4-5]。

檢測(cè)方法：實(shí)施血清學(xué)ELISA 檢驗(yàn)時(shí)，需將S/CO 灰區(qū)設(shè)置為0.8～1，結(jié)果存在反應(yīng)性的標(biāo)準(zhǔn)為數(shù)據(jù)大于等于1。若不合格，則反應(yīng)性結(jié)果存在于雙試劑中；若反應(yīng)性出現(xiàn)于單試劑，則還需通過(guò)雙孔復(fù)檢法應(yīng)用雙試劑檢測(cè)，不合格的結(jié)果為兩孔存在反應(yīng)性。核酸檢測(cè)：?jiǎn)稳朔輼?biāo)本進(jìn)行HBV/HCV/HIV 核酸分項(xiàng)檢測(cè)模式，若出現(xiàn)反應(yīng)性結(jié)果，則需予以復(fù)檢對(duì)比[6]。陰性結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)為首次檢測(cè)無(wú)反應(yīng)；若反應(yīng)性出現(xiàn)于首次檢測(cè)標(biāo)本中，則還需對(duì)其實(shí)施復(fù)檢。

隨訪：若陰性結(jié)果出現(xiàn)于ELISA 檢測(cè)中，但核酸檢測(cè)結(jié)果無(wú)反應(yīng)，則需跟蹤隨訪此類(lèi)獻(xiàn)血者并定期予以復(fù)檢。

2 結(jié)果

2.1 分析核酸檢測(cè)結(jié)果

對(duì)比核酸檢測(cè)結(jié)果，實(shí)施單陽(yáng)及雙陽(yáng)試劑ELISA 檢測(cè)的100 份標(biāo)本結(jié)果與其存在差異，僅HBsAg 檢測(cè)的灰區(qū)標(biāo)本有一定檢出率，其他檢測(cè)無(wú)反應(yīng)，見(jiàn)表1。

表1 100份ELlSA陽(yáng)性和灰區(qū)實(shí)施核酸檢測(cè)的結(jié)果

2.2 酶免S/CO值在核酸鑒別檢測(cè)中的分析

ELISA 陰性標(biāo)本3000 份檢出有反應(yīng)性的4 份，HBV DNA 存在反應(yīng)性的有1 份，陽(yáng)性率為0.033%，陰性為1 份，無(wú)反應(yīng)性存在于核酸檢測(cè)HCV RNA及HIV RNA 結(jié)果中。HBsAg 陰性及灰區(qū)分別為2份及1 份，見(jiàn)表2。

表2 酶免S/CO值在核酸鑒別檢測(cè)中的分析

3 討論

能夠由血液進(jìn)行傳播的疾病比較多，很多疾病都能夠形成菌血癥或者病毒血癥，并通過(guò)血液的途徑進(jìn)行傳播。血液傳播疾病可以通過(guò)骨髓或者器官移植、血制品、輸血等方式傳播，也可以通過(guò)能夠接觸血液的方式傳播，如吸毒、治療、注射、針灸、醫(yī)療檢查、手術(shù)器械等，而較為常見(jiàn)的血液傳播疾病如梅毒、病毒性肝炎（乙、丙、?。?、艾滋病等。由于血液傳播疾病的危害性較大，嚴(yán)重影響患者的健康，因此早期的篩查對(duì)于患者來(lái)說(shuō)非常重要，盡早確定病癥并開(kāi)展針對(duì)性救治，有效的改善患者的預(yù)后。

ELISA 原理如下：在固相載體的表面，結(jié)合抗體或抗原，并保證免疫活性；將某種酶和抗體或抗原連接，形成酶標(biāo)抗體或者抗原，此種抗體或抗原既有免疫活性，還存在酶活性。檢測(cè)時(shí)，可將受檢標(biāo)本與酶標(biāo)抗體或抗原按照相應(yīng)的步驟和固相載體上的抗體或抗原起反應(yīng)。經(jīng)過(guò)處理后，將酶反應(yīng)底物加入，而底物會(huì)經(jīng)過(guò)催化成為有色產(chǎn)物，由于標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量和產(chǎn)物量密切相關(guān)，因此能按照顏色的深淺有無(wú)定量或定性的分析。因酶催化效率極高，因此反應(yīng)效果較大，此方式敏感度很高。

任何生物都有核酸存在，核酸又包括了核糖核酸（RNA）與脫氧核糖核酸（DNA），病毒中一般只存在一種核酸，DNA 或者RNA，病毒屬于非細(xì)胞的生命形態(tài)，由蛋白質(zhì)外殼與核酸長(zhǎng)鏈組成，無(wú)代謝機(jī)構(gòu)與酶系統(tǒng)，無(wú)法獨(dú)立完成自我繁殖，所有生活活動(dòng)均須在宿主細(xì)胞中開(kāi)展。當(dāng)解析了病毒的基因組序列后，將其與其余物種基因組序列進(jìn)行對(duì)比，就可發(fā)現(xiàn)其特異的核酸序列，此時(shí)可應(yīng)用核酸檢測(cè)對(duì)患者進(jìn)行檢查，若發(fā)現(xiàn)此特異的核酸序列，可證明患者已被此病毒感染。

在血液篩查系統(tǒng)中應(yīng)用的全自動(dòng)檢測(cè)系統(tǒng)型號(hào)為Pre-NARrocleix，該設(shè)備在檢測(cè)中應(yīng)用的核酸試劑僅為單人份，使檢測(cè)準(zhǔn)確性、特異性及敏感性均得到了顯著的提高，有效預(yù)防了血液傳播疾病的發(fā)生[7]。

經(jīng)過(guò)本文研究可以看出，對(duì)抗-HIV、抗-HCV及HBsAg 實(shí)施檢測(cè)，灰區(qū)、單試劑及雙試劑的反應(yīng)結(jié)果存在差異，這與其他學(xué)者研究結(jié)果類(lèi)似[8]。同時(shí)，檢測(cè)中應(yīng)用雙試劑的不合格率低于單試劑，對(duì)單試劑灰區(qū)及陽(yáng)性的標(biāo)本予以ELISA 復(fù)檢，所得陰性結(jié)果概率較大，這可能與假反應(yīng)性結(jié)果存在于標(biāo)本中有關(guān)[9-10]。另外，因?yàn)楸敬螜z驗(yàn)中HBV DNA 陽(yáng)性檢出率的數(shù)據(jù)不高，所以無(wú)法判斷窗口感染期感染率是否會(huì)因灰區(qū)的設(shè)置而降低。對(duì)于ELISA 陰性且實(shí)施核酸檢測(cè)的標(biāo)本，只有4 份存在反應(yīng)，HBV DNA 陽(yáng)性結(jié)果為1 份，比HBsAg 單人檢測(cè)的陰性率低，其他檢測(cè)數(shù)據(jù)也與部分研究結(jié)果存在差異，可能與標(biāo)本數(shù)量小、標(biāo)本收集地經(jīng)濟(jì)情況以及標(biāo)本污染有關(guān)。除此之外，實(shí)驗(yàn)室常規(guī)HBV 灰區(qū)的值與ELISA 檢測(cè)的S/CO相比較高，所以必須核酸檢驗(yàn)ELISA 陰性標(biāo)本。

綜上所述，要鑒別區(qū)分HBsAg 灰區(qū)或陰性的患者是假陽(yáng)性、隱匿性感染還是窗口期，需通過(guò)跟蹤隨訪予以判斷。