陶桂云,李霞霞,包 穎,黃曉晶,陳金霞,查成喜
(1.白銀市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院,甘肅 白銀 730050;2 靖遠(yuǎn)縣人民醫(yī)院,甘肅 白銀 730050;3.甘肅省中醫(yī)院,甘肅 蘭州 730000)
丙型肝炎是一種通過(guò)輸血、破損皮膚、血液透析、性接觸、母嬰垂直傳播等多種途徑傳播的,危害人類健康的重要傳染病之一,丙型肝炎病毒(HCV)是其致病病原體,屬于黃病毒科,核酸是單股、線性、正鏈RNA,在不同區(qū)域的感染者中可檢測(cè)出不同的基因型分布,且與疾病的嚴(yán)重程度之間有著一定的相關(guān)性,可以根據(jù)基因型實(shí)施不同的治療方案,所以研究丙肝的基因型不僅有助于掌握HCV的流行病學(xué)特點(diǎn),也有助于了解丙肝的危險(xiǎn)因素及疾病的進(jìn)展情況[1-3]。本研究通過(guò)分析2013~2019 年白銀地區(qū)HCV 基因型分布情況與2011~2012 年數(shù)據(jù)進(jìn)行比較,為該地區(qū)丙肝患者臨床治療提供可靠的流行病學(xué)資料,臨床可進(jìn)一步根據(jù)《丙型肝炎防治指南》(2015 年更新版)中不同亞型選擇抗病毒治療方案,以期提高丙肝的治療效果。
收集白銀地區(qū)2014~2019 年各醫(yī)院檢測(cè)的ELISA 檢測(cè)抗體陽(yáng)性217 例患者血清或血漿1ml,-80℃以下保存。其中13 例由于病毒載量低于檢測(cè)下限無(wú)法分型,204 例通過(guò)PCR 反向斑點(diǎn)法進(jìn)行基因分型,男性112 例,年齡10-79 歲,平均年齡46.7歲;女性92 例,年齡16-75 歲,平均年齡42 歲。
美國(guó)ABI7500 實(shí)時(shí)熒光PCR 分析儀;DA-8000核酸雜交分析儀;核酸提取純化試劑盒(達(dá)安基因);HCV 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 試劑(達(dá)安基因);基因分型檢測(cè)試劑盒(達(dá)安基因)。
HCV-RNA 定量檢測(cè)嚴(yán)格按照中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司《丙型肝炎病毒核酸定量檢測(cè)試劑盒》操作說(shuō)明書(shū)和實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)程。HCV 基因型檢測(cè):提取純化HCV-RNA 后,一步法反轉(zhuǎn)錄-PCR 擴(kuò)增HCV 基因,98℃變性10min,立即冷卻加入雜交模條,雜交,顯色,記錄結(jié)果。
采用SPSS20.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,計(jì)數(shù)資料用例數(shù)或百分率表示,HCV 基因型的分布差異采用卡方檢驗(yàn),以p<0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
204 例HCV-RNA 標(biāo)本中,共發(fā)現(xiàn)1 型、2 型、3型三種基因型,4 種基因亞型(1b、1a、2a、3a),1 型基因143 例(70.1%),其中1b 亞型122 例(66.7%),1a亞型2 例(3.4%);2 型基因49 例(24.1%),全部為2a亞型;3 型基因12 例(5.8%),全部為3a。以1b 型為主,其次是2a 型,最后是3a 型(見(jiàn)表1,如圖1 所示)。
圖1 白銀地區(qū)HCV 基因型分布情況
表1 甘肅省白銀地區(qū)HCV 的不同基因型檢出率n%(例數(shù))比較
在204 例HCV 基因分型標(biāo)本中,男女之間1b、1a、2a 和3a 基因型分布不存在性別差異,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=5.881,p=0.116)。1 型基因型年齡中位數(shù)為41 歲,2 型基因型年齡中位數(shù)為43 歲,3 型基因型患者年齡中位數(shù)為44 歲。各組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。
表2 HCV 基因型與性別相關(guān)性比較 例數(shù)(%)
研究者2011-2012 年數(shù)據(jù)[4]與2014-2019 年數(shù)據(jù)比較,各基因型分布情況見(jiàn)表3。
表3 2011-2019 年HCV 基因型分布情況 例(%)
通過(guò)分析發(fā)現(xiàn),2013~2019 年丙肝分型趨勢(shì)與2011 年~2012 年分型情況無(wú)差異,白銀地區(qū)丙型肝炎病毒感染以1b 型為主,其次是2a 型,沒(méi)有檢出在我國(guó)常見(jiàn)的1b/2a 混合感染的患者。但在白銀地區(qū)發(fā)現(xiàn)了中國(guó)其它地區(qū)少有發(fā)現(xiàn)的2c、3a 型的感染,但病例數(shù)較少,還需進(jìn)一步觀察。
丙型病毒性肝炎,簡(jiǎn)稱為丙型肝炎、丙肝,是一種由丙型肝炎病毒(HCV)感染引起的病毒性肝炎,主要經(jīng)輸血、針刺、吸毒等傳播,據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì),全球HCV 的感染率約為3%,估計(jì)約1.8 億人感染了HCV,每年新發(fā)丙型肝炎病例約3.5 萬(wàn)例。丙型肝炎呈全球性流行,可導(dǎo)致肝臟慢性炎癥壞死和纖維化,部分患者可發(fā)展為肝硬化甚至肝細(xì)胞癌(HCC)。HCV 基因組高度異質(zhì)性,根據(jù)核苷酸序列的差異程度,可將HCV 分為6 個(gè)基因型及至少67種亞型[6],同時(shí),HCV 基因型分布存在地理性差異。1a 基因亞型多見(jiàn)于美國(guó),1b 基因亞型分布于亞洲各國(guó),2a 和2b 基因亞型占遍布?xì)W洲和日本,而2c 基因亞型最常見(jiàn)于意大利北部[5,6]。6 個(gè)HCV 基因型在我國(guó)大陸都有分布,但1b、2a 型最常見(jiàn),如赤峰地區(qū)1b 型占71.11%,2a 型占16.33%[7]、北京地區(qū)1b 型占70%,2a 型占23.9%[8];山東地區(qū)1b 占64.28%,2a占30.57%)[9];在北方地區(qū)1b、2a 均高于全國(guó)平均水平,然而在南方地區(qū)并非如此,云南地區(qū)以6 型(43.48%)為主,其次為3b 型[10],杭州地區(qū)以1b 為主(56.7%)接近于全國(guó)平均水平,其次是2a(10.2%),3b 型僅占8.42%[11];廣州番禺地區(qū)2016 年1b 型為主要類型,占48.0%,低于全國(guó)平均水平[12]。本研究結(jié)論白銀地區(qū)丙肝患者主要以1b 型為主,其次是2a 型,符合北方HCV 基因分型的特點(diǎn),另外甘肅省白銀地區(qū)發(fā)現(xiàn)在中國(guó)其它地區(qū)少有發(fā)現(xiàn)的2c、3a 型的感染,也未發(fā)現(xiàn)混合感染1b/2a 的情況。研究表明HCV 基因型與HCVRNA 含量有明顯的相關(guān)性,1、2型感染者血清HCV-RNA 顯著高于3 型感染者,病毒復(fù)制相對(duì)活躍,易轉(zhuǎn)為慢性[13]。因此,本研究結(jié)果以1b 型為主,2a 型次之,且樣本病毒含量都是大于103 以上的樣本,進(jìn)一步顯示1、2 型病毒含量高。不同HCV 的基因型對(duì)IFN-ɑ 治療反應(yīng)也有明顯差異,可能與的coreE2 和NS5a 以及病毒復(fù)制強(qiáng)弱有關(guān)[14]。因此,研究區(qū)域HCV 基因分型結(jié)果有助于制定個(gè)體化抗病毒治療方案,為本地區(qū)丙型肝炎的診斷、治療和預(yù)防以及患者的預(yù)后判斷提供強(qiáng)有力的依據(jù)。