陶桂云,李霞霞，包 穎，黃曉晶，陳金霞，查成喜

（1.白銀市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，甘肅 白銀 730050；2 靖遠(yuǎn)縣人民醫(yī)院，甘肅 白銀 730050；3.甘肅省中醫(yī)院，甘肅 蘭州 730000）

丙型肝炎是一種通過(guò)輸血、破損皮膚、血液透析、性接觸、母嬰垂直傳播等多種途徑傳播的，危害人類健康的重要傳染病之一，丙型肝炎病毒（HCV）是其致病病原體，屬于黃病毒科，核酸是單股、線性、正鏈RNA，在不同區(qū)域的感染者中可檢測(cè)出不同的基因型分布，且與疾病的嚴(yán)重程度之間有著一定的相關(guān)性，可以根據(jù)基因型實(shí)施不同的治療方案，所以研究丙肝的基因型不僅有助于掌握HCV的流行病學(xué)特點(diǎn)，也有助于了解丙肝的危險(xiǎn)因素及疾病的進(jìn)展情況[1-3]。本研究通過(guò)分析2013～2019 年白銀地區(qū)HCV 基因型分布情況與2011～2012 年數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，為該地區(qū)丙肝患者臨床治療提供可靠的流行病學(xué)資料，臨床可進(jìn)一步根據(jù)《丙型肝炎防治指南》（2015 年更新版）中不同亞型選擇抗病毒治療方案，以期提高丙肝的治療效果。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象

收集白銀地區(qū)2014～2019 年各醫(yī)院檢測(cè)的ELISA 檢測(cè)抗體陽(yáng)性217 例患者血清或血漿1ml，-80℃以下保存。其中13 例由于病毒載量低于檢測(cè)下限無(wú)法分型，204 例通過(guò)PCR 反向斑點(diǎn)法進(jìn)行基因分型，男性112 例，年齡10-79 歲，平均年齡46.7歲；女性92 例，年齡16-75 歲，平均年齡42 歲。

1.2 儀器與試劑

美國(guó)ABI7500 實(shí)時(shí)熒光PCR 分析儀；DA-8000核酸雜交分析儀；核酸提取純化試劑盒（達(dá)安基因）；HCV 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 試劑（達(dá)安基因）；基因分型檢測(cè)試劑盒（達(dá)安基因）。

1.3 方法

HCV-RNA 定量檢測(cè)嚴(yán)格按照中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司《丙型肝炎病毒核酸定量檢測(cè)試劑盒》操作說(shuō)明書(shū)和實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)程。HCV 基因型檢測(cè)：提取純化HCV-RNA 后，一步法反轉(zhuǎn)錄-PCR 擴(kuò)增HCV 基因，98℃變性10min，立即冷卻加入雜交模條，雜交，顯色，記錄結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS20.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料用例數(shù)或百分率表示，HCV 基因型的分布差異采用卡方檢驗(yàn)，以p＜0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HCV 基因型結(jié)果

204 例HCV-RNA 標(biāo)本中，共發(fā)現(xiàn)1 型、2 型、3型三種基因型，4 種基因亞型（1b、1a、2a、3a），1 型基因143 例（70.1%），其中1b 亞型122 例（66.7%），1a亞型2 例（3.4%）；2 型基因49 例（24.1%），全部為2a亞型；3 型基因12 例（5.8%），全部為3a。以1b 型為主，其次是2a 型，最后是3a 型（見(jiàn)表1，如圖1 所示）。

圖1 白銀地區(qū)HCV 基因型分布情況

表1 甘肅省白銀地區(qū)HCV 的不同基因型檢出率n%（例數(shù)）比較

2.2 HCV 基因型與性別、年齡相關(guān)性分析

在204 例HCV 基因分型標(biāo)本中，男女之間1b、1a、2a 和3a 基因型分布不存在性別差異，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=5.881，p=0.116）。1 型基因型年齡中位數(shù)為41 歲，2 型基因型年齡中位數(shù)為43 歲，3 型基因型患者年齡中位數(shù)為44 歲。各組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表2。

表2 HCV 基因型與性別相關(guān)性比較 例數(shù)(%)

2.3 2011-2019 年HCV 各基因型變化情況

研究者2011-2012 年數(shù)據(jù)[4]與2014-2019 年數(shù)據(jù)比較，各基因型分布情況見(jiàn)表3。

表3 2011-2019 年HCV 基因型分布情況 例(%)

通過(guò)分析發(fā)現(xiàn)，2013～2019 年丙肝分型趨勢(shì)與2011 年～2012 年分型情況無(wú)差異，白銀地區(qū)丙型肝炎病毒感染以1b 型為主，其次是2a 型，沒(méi)有檢出在我國(guó)常見(jiàn)的1b/2a 混合感染的患者。但在白銀地區(qū)發(fā)現(xiàn)了中國(guó)其它地區(qū)少有發(fā)現(xiàn)的2c、3a 型的感染，但病例數(shù)較少，還需進(jìn)一步觀察。

3 討論

丙型病毒性肝炎，簡(jiǎn)稱為丙型肝炎、丙肝，是一種由丙型肝炎病毒（HCV）感染引起的病毒性肝炎，主要經(jīng)輸血、針刺、吸毒等傳播，據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，全球HCV 的感染率約為3%，估計(jì)約1.8 億人感染了HCV，每年新發(fā)丙型肝炎病例約3.5 萬(wàn)例。丙型肝炎呈全球性流行，可導(dǎo)致肝臟慢性炎癥壞死和纖維化，部分患者可發(fā)展為肝硬化甚至肝細(xì)胞癌（HCC）。HCV 基因組高度異質(zhì)性，根據(jù)核苷酸序列的差異程度，可將HCV 分為6 個(gè)基因型及至少67種亞型[6]，同時(shí)，HCV 基因型分布存在地理性差異。1a 基因亞型多見(jiàn)于美國(guó)，1b 基因亞型分布于亞洲各國(guó)，2a 和2b 基因亞型占遍布?xì)W洲和日本，而2c 基因亞型最常見(jiàn)于意大利北部[5，6]。6 個(gè)HCV 基因型在我國(guó)大陸都有分布，但1b、2a 型最常見(jiàn)，如赤峰地區(qū)1b 型占71.11%，2a 型占16.33%[7]、北京地區(qū)1b 型占70%，2a 型占23.9%[8];山東地區(qū)1b 占64.28%，2a占30.57%)[9];在北方地區(qū)1b、2a 均高于全國(guó)平均水平，然而在南方地區(qū)并非如此，云南地區(qū)以6 型(43.48%)為主，其次為3b 型[10]，杭州地區(qū)以1b 為主（56.7%）接近于全國(guó)平均水平，其次是2a（10.2%），3b 型僅占8.42%[11]；廣州番禺地區(qū)2016 年1b 型為主要類型，占48.0%，低于全國(guó)平均水平[12]。本研究結(jié)論白銀地區(qū)丙肝患者主要以1b 型為主，其次是2a 型，符合北方HCV 基因分型的特點(diǎn)，另外甘肅省白銀地區(qū)發(fā)現(xiàn)在中國(guó)其它地區(qū)少有發(fā)現(xiàn)的2c、3a 型的感染，也未發(fā)現(xiàn)混合感染1b/2a 的情況。研究表明HCV 基因型與HCVRNA 含量有明顯的相關(guān)性，1、2型感染者血清HCV-RNA 顯著高于3 型感染者，病毒復(fù)制相對(duì)活躍，易轉(zhuǎn)為慢性[13]。因此，本研究結(jié)果以1b 型為主，2a 型次之，且樣本病毒含量都是大于103 以上的樣本，進(jìn)一步顯示1、2 型病毒含量高。不同HCV 的基因型對(duì)IFN-ɑ 治療反應(yīng)也有明顯差異，可能與的coreE2 和NS5a 以及病毒復(fù)制強(qiáng)弱有關(guān)[14]。因此，研究區(qū)域HCV 基因分型結(jié)果有助于制定個(gè)體化抗病毒治療方案，為本地區(qū)丙型肝炎的診斷、治療和預(yù)防以及患者的預(yù)后判斷提供強(qiáng)有力的依據(jù)。