令狐遠鳳 楊琦 張寶太 廖正波 段世宇 張家莉

（貴州大學動物科學學院 550025）

1 材料與方法

1.1 試驗材料

鴿巴氏桿菌，菊芋、苦參堿、銀杏葉黃酮粗提物、蘆薈大黃素、硫酸黃連素、鹽酸小檗堿、艾葉提取物、白頭翁提取物、黃芩苷，培養(yǎng)基等。

2 方法

2.1 中藥有效成分的抑菌試驗

提前制備好藥敏紙片，用微量移液器吸取鴿巴氏桿菌菌液37℃24h 的培養(yǎng)物50ul，用涂布器將培養(yǎng)物在加有血清的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上均勻分布，放置1h，貼好藥敏紙片，每個平板貼放4 種不同藥敏片，平板中間放置乙醇浸泡的藥敏片作為對照。最后將平板放在恒溫培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)18h，取出后用直尺測量抑菌圈的直徑。抑菌圈直徑≥20mm 為極敏，15～20mm為高敏，10～14mm 為中敏，≤10mm 為低敏。

采用試管兩倍稀釋法測定9 種中藥液對鴿巴氏桿菌的體外最小抑菌濃度。取8 支滅菌試管，分別加液體血清培養(yǎng)基2ml，第1 管加2ml 硫酸黃連素中藥液，吹吸3 次，讓試管內(nèi)液體均勻混合后再吸取2ml 加至第2 管，同樣步驟，直至第7 管，第7 管吸取2ml 棄去，使之依次倍比稀釋，然后在1～8 號試管用微量移液器取活菌數(shù)較高范圍內(nèi)計算好濃度好的鴿巴氏桿菌菌液50ul，第8 管不加中藥液，作為空白對照。將8 支試管置于37℃溫箱培養(yǎng)24h。取出試管仔細觀察細菌的生長情況，與8號不加中藥液的空白對照組的濁度相比較，判斷細菌是否在試管中生長，最低濃度的是以肉眼是否能觀察到細菌生長來被判定，沒有細菌生長則為中藥的最小抑菌濃度（MIC）。

3 結(jié)果

由表1 可知，硫酸黃連素、鹽酸小檗堿、艾葉提取物、苦參堿、黃芩苷對鴿巴氏桿菌有一定的抑菌作用，蘆薈大黃素、菊芋、白頭翁提取物、銀杏葉黃酮粗提物對鴿巴氏桿菌沒有抑菌效果。幾種有抑菌效果的中藥液從高到低依次為硫酸黃連素＞鹽酸小檗堿＞艾葉提取物＞黃芩苷＞苦參堿。

表1 9 種中藥液對鴿巴氏桿菌的抑菌作用（單位：mm）

由表2 可知，硫酸黃連素的1 號和2 號試管內(nèi)無細菌生長，3～8 號試管涂布的平板有菌落長出，該中藥的最小抑菌濃度為26.25mg/ml，最小殺菌濃度為52.5mg/ml。鹽酸小檗堿的1～5 號試管內(nèi)均無細菌生長，只有5 號試管涂布的平板有菌落長出，其最小抑菌濃度為0.16mg/ml。艾葉提取物1～5 號試管內(nèi)均無細菌生長，只有5 號試管涂布的平板有菌落長出，該中藥的最小抑菌濃度為0.47mg/ml。黃芩苷1～4 號試管內(nèi)均無細菌生長，只有4 號試管涂布的平板有菌落長出，該中藥的最小抑菌濃度為0.25mg/ml。苦參堿1～4 號試管均無細菌生長，有4號試管涂布的平板有菌落長出，該中藥的最小抑菌濃度為6.25mg/ml。白頭翁提取物、蘆薈大黃素、菊芋和銀杏葉黃酮粗提物涂布的平板均有菌落長出，對鴿巴氏桿菌沒有抑菌效果。

4 討論

目前，治療巴氏桿菌的方法主要采用抗生素和疫苗接種，但使用高濃度抗菌藥物預防、治療細菌性疾病時往往會導致養(yǎng)殖場產(chǎn)生嚴重的耐藥性和抗菌藥物殘留，給人類健康和養(yǎng)殖業(yè)帶來危害[1-2]。而且疫苗接種有效期時長較短[3]，隨著對大量抗菌藥物的應(yīng)用不合理，特別是抗菌生長促進劑被作為抗菌藥物添加到飼料中，使巴氏桿菌表現(xiàn)為耐藥率高、呈多重耐藥、耐藥范圍廣等特點[4]，其結(jié)果不僅給治療和控制該病帶來困難，還使抗生素在動物體內(nèi)的殘留更加嚴重，對動物食品安全造成危害[1,5,6]。本試驗篩選了5 種效果較好的抗巴氏桿菌中藥有效成分，其中鹽酸小檗堿和黃芩苷抑菌效果最好，為臨床防治鴿巴氏桿菌病提供了新的治療方法。