丁羽萱，王 堯，姚羿安，李皖梅，王 冕，王 沛，顧振新，楊潤強

（南京農(nóng)業(yè)大學食品科學技術學院，江蘇 南京 210095）

種子萌發(fā)涉及一系列形態(tài)和生理生化的變化。研究表明，大豆萌發(fā)能夠富集γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid，GABA）[1]、總酚[2]、總黃酮[3]、異黃酮[4]等成熟大豆籽粒中含量低或不含有的功能成分。其中GABA是一種廣泛存在于生物體內(nèi)的非蛋白質(zhì)氨基酸，最初發(fā)現(xiàn)GABA對哺乳動物中樞神經(jīng)具有普遍抑制作用[1]。同時，GABA對植物的生長發(fā)育具有重要影響[5]，植物在受到冷刺激、缺氧和機械刺激時會大量積累GABA以響應生物或非生物的脅迫。

酚類物質(zhì)是植物體內(nèi)廣泛存在的一類次級代謝產(chǎn)物，是植物抗氧化系統(tǒng)的重要組成成分[6]，在逆境脅迫下，植物受到氧化損傷導致酚類物質(zhì)的積累。研究證明，GABA與植物的抗氧化系統(tǒng)之間存在一定關系。外源GABA處理能顯著提高NaCl脅迫番茄幼苗葉片超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、過氧化物酶（peroxidase，POD）和過氧化氫酶（catalase，CAT）活力，最高可分別比NaCl處理組提高6.1%、41.3%和72.9%，且外源GABA處理顯著降低了NaCl處理造成的葉片和根系內(nèi)超氧陰離子自由基產(chǎn)生速率和丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量，表明外源GABA能夠減輕鹽脅迫導致的膜脂過氧化傷害[7]。李敬蕊等[8]研究表明，外源施加GABA能提高低氧脅迫下CmSOD、CmPOD1、CmPOD2、CmCAT和CmAPX基因的表達量，而這些基因與抗氧化酶活性密切相關。外源GABA能促進蕓苔屬植物根系吸收和利用土壤硝酸鹽，說明GABA可能作為上游信號分子在植物體內(nèi)起關鍵作用[9]。Shi Shengqing等[10]在鹽脅迫下用GABA處理錦雞兒根部，發(fā)現(xiàn)外源GABA能激活體內(nèi)信號傳遞、蛋白質(zhì)降解調(diào)控、激素合成、活性氧的形成和多胺代謝等多重生理生化反應，進一步證明GABA能作為一種上游生物信號分子，參與植物體內(nèi)與鹽脅迫相關的基因表達調(diào)控。

可見，GABA對植物生長和抗逆能力有重要作用。作為植物抗氧化系統(tǒng)的重要組成部分，酚類物質(zhì)在植物體內(nèi)的大量累積可能受到GABA的調(diào)節(jié)。因此，本實驗擬通過研究外源添加GABA對發(fā)芽大豆酚類物質(zhì)富集的影響，以明確GABA在酚類富集中的作用。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

大豆（品種為‘云鶴’）籽粒購于江蘇省農(nóng)業(yè)科學院，置于－20 ℃冰柜保藏待用。千粒質(zhì)量為（161.6±0.8）g。

GABA購于美國Sigma公司；福林-酚試劑購于國藥集團化學試劑有限公司。其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.2 儀器與設備

BX801發(fā)芽機 永康市貝欣五金電器廠；755B型分光光度計 上海精密科學儀器有限公司；PYX-DHS-BS型隔水電熱恒溫培養(yǎng)箱 上海躍進醫(yī)療器械廠；冷凍離心機 上海市安亭科學儀器廠；LC-20A高效液相色譜儀日本島津公司；DZF-6020型真空干燥器 上海一恒科技有限公司；818型pH測量儀 美國Orion Research公司；HH-6型數(shù)顯恒溫水浴鍋 常州國華電器有限公司；WH-3微型旋渦混合儀 上海滬析分析儀器廠。

1.3 方法

1.3.1 大豆籽粒預處理

稱取適量顆粒飽滿、大小均勻的大豆籽粒，經(jīng)去離子水沖洗后，置于體積分數(shù)0.5%次氯酸鈉溶液中浸泡消毒15 min，然后用蒸餾水沖洗至pH 7.0左右，置于30 ℃水浴鍋中用去離子水以液料比5∶1浸泡6 h。浸泡后的大豆均勻攤于發(fā)芽機的苗盤上，置于30 ℃培養(yǎng)箱中黑暗發(fā)芽。分別配制2.5、5、10、20 mmol/L GABA溶液作為培養(yǎng)液，以去離子水為對照進行實驗。處理過程中，每24 h更換培養(yǎng)液，發(fā)芽時長4 d，測定發(fā)芽大豆生長指標（芽長、鮮質(zhì)量、干質(zhì)量）、總酚含量、酚酸含量及抗氧化指標。

1.3.2 生長指標的測定

大豆芽長的測定：隨機選取30 株發(fā)芽大豆，用游標卡尺測定其芽長，以所測30 株發(fā)芽大豆芽長平均值表示。大豆鮮質(zhì)量的測定：隨機選取10 株發(fā)芽大豆，用吸水紙吸干表面水分，稱量并記錄每10 株發(fā)芽大豆的鮮質(zhì)量，精確到0.001 g。干質(zhì)量的測定：隨機選取10 株發(fā)芽大豆，用吸水紙吸干表面水分，冷凍干燥，稱量并記錄每10 株發(fā)芽大豆的干質(zhì)量，精確到0.001 g。

1.3.3 游離酚提取

參考Chen Zhijie等[11]的方法。發(fā)芽大豆冷凍干燥后研磨粉碎，過40 目篩。取2 g發(fā)芽大豆粉用體積分數(shù)80%甲醇溶液提取3 次（每次20 mL），在振蕩器上200 r/min振蕩1 h，25 ℃下充氮氣避光提取，然后在以10 000 r/min、4 ℃離心15 min，離心后提取液合并過濾，在40 ℃條件下旋轉(zhuǎn)蒸干，用體積分數(shù)50%甲醇溶液溶解并定容至10 mL，作為游離酚提取液，充氮氣后置于－20 ℃，供分析用。

1.3.4 結合酚提取

參考Chen Zhijie等[11]的方法。提取游離酚后的殘余物用40 mL 2 mol/L NaOH溶液水解，混合物200 r/min條件下振蕩水解4 h，25 ℃下充氮氣避光提取，水解液用6 mmol/L HCl溶液調(diào)整pH值至1.5～2.0之間，取50 mL乙酸乙酯與水解液充分混合15 min后，靜置5 min，然后混合液在10 000 r/min、4 ℃下離心5 min，取上層乙酸乙酯層，重復上述操作3 次，合并乙酸乙酯層，于40 ℃條件下旋轉(zhuǎn)蒸干，用體積分數(shù)50%甲醇溶液溶解并定容至10 mL，作為結合酚提取液，充氮氣后置于－20 ℃，供分析用。

1.3.5 總酚含量測定

采用福林-酚比色法[12]測定總酚含量。分別取上述游離酚和結合酚提取液200 μL（根據(jù)濃度適當稀釋），加入1.5 mL 10 倍體積稀釋的福林-酚試劑，漩渦振蕩后靜置5 min，然后加入1.5 mL 75 g/L Na2CO3溶液混勻，置于室溫下暗處反應2 h，在765 nm波長處測定吸光度。以體積分數(shù)50%甲醇溶液代替提取液作為空白對照。以沒食子酸標準品配制標準曲線，游離酚和結合酚含量以每克干質(zhì)量樣品中沒食子酸的質(zhì)量計，單位為mg/g。游離酚或結合酚含量按公式（1）進行計算。

式中：ω為游離酚或結合酚含量/（mg/g）；ρ為沒食子酸質(zhì)量濃度/（μg/mL）；V為提取液體積/mL；N為稀釋倍數(shù)；m為取樣量/g。

大豆芽菜的總酚含量為各處理條件下所測得游離酚和結合酚含量之和，單位為mg/g。

1.3.6 酚酸含量測定

采用高效液相色譜法[12]測定酚酸含量。分別取20 μL 1.3.3節(jié)和1.3.4節(jié)提取液，經(jīng)0.45 μm的有機濾膜過濾后采用高效液相色譜（以外標法定量）進行分析。采用LC-20A高效液相色譜，配備C18110A（4.6 mm×150 mm，5 μm）色譜柱，高效液相色譜條件：流速為0.9 mL/min，流動相A溶液為0.1%的醋酸溶液，流動相B為0.1%的醋酸-甲醇溶液，分離時間55 min，柱溫35 ℃，測定波長280 nm。流動相梯度洗脫程序見表1。

表1 高效液相色譜流動相梯度洗脫程序Table 1 Mobile phase gradient elution procedure of high performance liquid chromatography

1.3.7 抗氧化能力測定

1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）自由基清除能力參照Chen Zhijie等[13]的方法。分別取上述游離酚和結合酚提取液200 μL（以體積分數(shù)50%甲醇溶液適當稀釋），加入3.8 mL DPPH溶液，漩渦后置于室溫下暗處反應1 h，在515 nm波長處測定吸光度A。以體積分數(shù)50%甲醇溶液代替各提取液作為空白組測定吸光度Acontrol。DPPH自由基清除率按公式（2）計算。以不同濃度Trolox繪制標準曲線（配制不同濃度的Trolox標準溶液，測定其在515 nm波長處吸光度，以Trolox標準溶液濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標作標準曲線，R2≥0.99），DPPH自由基清除能力以每克干質(zhì)量樣品反應生成Trolox的物質(zhì)的量計，單位為μmol/g。

式中：A為樣品組的吸光度；Acontrol為空白組的吸光度。

2,2’-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)（2-2’-azinobis-(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)，ABTS）陽離子自由基清除能力：參照Chen Zhijie等[13]的方法。取上述游離酚和結合酚提取液100 μL（以體積分數(shù)50%甲醇溶液適當稀釋），加入3.0 mL ABTS溶液，漩渦后置于室溫下暗處反應30 min，在734 nm波長處測定吸光度A。以體積分數(shù)50%甲醇溶液代替提取液作為空白對照Acontrol。ABTS陽離子自由基清除率按公式（2）計算。以不同濃度Trolox繪制標準曲線（配制不同濃度的Trolox標準溶液，測定其在734 nm波長處吸光度，以Trolox標準溶液濃度為橫坐標，其對應吸光度為縱坐標制作標準曲線，R2≥0.99），ABTS陽離子自由基清除能力以每克干質(zhì)量樣品反應生成Trolox的物質(zhì)的量計，單位為μmol/g。

1.3.8 苯丙氨酸解氨酶活力測定

苯丙氨酸解氨酶（phenylalanine ammonia lyase，PAL）活力參照Ma Yan等[12]的方法。稱取2 g發(fā)芽大豆鮮樣置于預冷研缽中，加入事先預冷的4 mL 0.2 mol/L pH 8.8硼酸鈉緩沖液，冰浴研磨。研磨后倒入10 mL離心管內(nèi)，在4 ℃條件下，8 000 r/min離心20 min，取上清液作為PAL提取液。PAL活力測定反應體系：2.2 mL 0.05 mol/LL-苯丙氨酸、0.8 mL酶提取液。加入酶提取液后，迅速搖勻，以上述硼酸鈉緩沖液代替PAL提取液作為空白對照，立即使用紫外-可見光分光光度計測定在290 nm波長處的吸光度（A1）。然后在37 ℃恒溫水浴鍋中水浴90 min，水浴之后滴加0.2 mL 6 mol/L HCl溶液終止反應，再次使用紫外-可見光分光光度計測定在290 nm波長處的吸光度（A2）。以每克鮮樣每小時在290 nm波長處吸光度變化0.01為一個酶活力單位（U），PAL活力計算如式（3）所示。

1.3.9 抗氧化酶活力測定

過氧化物酶（peroxidase，POD）活力的測定參照Chen Zhijie等[14]的方法并作適當修改。稱取5 g發(fā)芽大豆鮮樣，置于研缽中，加入15 mL 0.1 mol/L乙酸-乙酸鈉緩沖液（pH 5.5，內(nèi)含1 mmol/L聚乙二醇6000、質(zhì)量分數(shù)4%聚乙烯吡咯烷酮（polyvinyl pyrrolidone，PVP）和體積分數(shù)1% Triton X-100），在冰浴條件下研磨成勻漿。將勻漿液全部轉(zhuǎn)入至離心管中，在4 ℃條件下10 000 r/min離心20 min，上清液即為酶提取液。取3 mL 25 mmol/L愈創(chuàng)木酚溶液和20 μL酶提取液，在37 ℃預保溫平衡5 min，在上述溶液中加入100 μL 0.5 mol/L H2O2啟動反應，以蒸餾水作為參比空白調(diào)零，測定反應體系在470 nm波長處吸光度。POD活力以每克鮮樣每分鐘在470 nm波長處吸光度變化0.1為一個酶活力單位，結果表示為U/g。

過氧化氫酶（catalase，CAT）活力的測定參照Chen Zhijie等[14]的方法并作適當修改。稱取5 g發(fā)芽大豆鮮樣，置于研缽中，加入15 mL 0.1 mol/L磷酸鈉緩沖液（pH 7.5，內(nèi)含5 mmol/L二硫蘇糖醇（dithiothreitol，DTT）和質(zhì)量分數(shù)5% PVP），在冰浴條件下研磨成勻漿。將勻漿液全部轉(zhuǎn)入至離心管中，在4 ℃條件下10 000 r/min離心20 min，上清液即為酶提取液。取2.9 mL 20 mmol/L H2O2溶液，在25 ℃預保溫平衡5 min，在上述溶液中加入100 μL酶提取液啟動反應，以蒸餾水作為參比空白調(diào)零，測定反應體系在240 nm波長處吸光度。CAT活力以每克鮮樣每分鐘在240 nm波長處吸光度變化0.01為一個酶活力單位，結果表示為U/g。

抗壞血酸過氧化物酶（ascorbic acid peroxidase，APX）活力的測定參照Zhang Zi[15]和曹建康[16]等的方法并作適當修改。稱取5 g發(fā)芽大豆鮮樣，置于研缽中，加入15 mL 0.1 mol/L磷酸鈉緩沖液（pH 7.5，內(nèi)含0.1 mmol/L乙二胺四乙酸二鈉和1 mmol/L抗壞血酸和質(zhì)量分數(shù)2%PVP），在冰浴條件下研磨成勻漿。將勻漿液全部轉(zhuǎn)入至離心管中，在4 ℃條件下10 000 r/min離心20 min，上清液即為酶提取液。取2.6 mL 50 mmol/L磷酸鈉緩沖溶液（pH 7.5，內(nèi)含0.1 mmol/L乙二胺四乙酸二鈉和0.5 mmol/L抗壞血酸）和0.1 mL酶提取液，在25 ℃預保溫平衡5 min，在上述溶液中加入0.3 mL 2 mmol/L H2O2啟動反應，以蒸餾水作為參比空白調(diào)零，測定反應體系在290 nm波長處吸光度。APX活力以每克鮮樣每分鐘在290 nm波長處吸光度變化0.01為一個酶活力單位，結果表示為U/g。

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

實驗設計3 次生物學重復，數(shù)據(jù)結果以平均值±標準差表示，用SAS 8.1軟件中Duncan’s多重比較法進行方差分析，顯著水平為P＜0.05。采用Origin 8.5軟件作圖。

2 結果與分析

2.1 外源GABA對發(fā)芽大豆生長指標的影響

從圖1A可以看出，外源GABA能顯著促進發(fā)芽大豆的生長（P＜0.05），且隨著GABA濃度的增加促進作用越顯著，圖1B表明2.5、5 mmol/L外源GABA能顯著增加發(fā)芽大豆的鮮質(zhì)量（P＜0.05），5 mmol/L的GABA促進作用最強，比對照提高了8.33%。相應地，隨著外源GABA濃度的增加，發(fā)芽大豆的干質(zhì)量則顯著降低（圖1C）。上述結果表明GABA可以調(diào)控植物的生長。

圖1 GABA對發(fā)芽大豆芽長（A）、鮮質(zhì)量（B）和干質(zhì)量（C）的影響Fig. 1 Effect of GABA on sprout length (A), fresh mass (B) and dry mass (C) of germinated soybean

2.2 外源GABA對發(fā)芽大豆總酚含量的影響

在籽粒發(fā)芽過程中，植物細胞壁周圍的很多成分降解，使游離態(tài)和結合態(tài)的酚類化合物得以釋放，進而使總酚含量明顯增加，且芽苗生長過程中結合態(tài)酚類物質(zhì)會逐漸轉(zhuǎn)化為游離態(tài)。從圖2可看出，外源GABA能顯著提高總酚含量（P＜0.05），且隨著GABA濃度的增加總酚含量顯著增加，20 mmol/L GABA濃度下游離酚及結合酚含量分別較對照提高32.07%和26.73%，總酚含量為對照組的1.39 倍。這與GABA處理促進芽苗生長呈正相關關系。

圖2 GABA對發(fā)芽大豆總酚含量的影響Fig. 2 Effect of GABA on the content of total phenolics in germinated soybean

2.3 外源GABA對發(fā)芽大豆酚酸含量的影響

由圖3可看出，發(fā)芽大豆中游離酚酸主要是對香豆酸和香草酸，結合酚酸含量較多的是對香豆酸和丁香酸，其次是阿魏酸、香草酸和芥子酸。外源GABA能顯著提高游離酚酸及結合酚酸含量（P＜0.05）。由圖3A可知，GABA濃度越高，游離酚酸含量越高，20 mmol/L濃度下對香豆酸由2.86 μg/g增加到13.94 μg/g，香草酸則從無到8.85 μg/g。由圖3B可看出，GABA濃度為2.5 mmol/L時結合酚酸含量最高，其中對香豆酸和阿魏酸分別比對照增加了96.3%和114.9%。

圖3 GABA對發(fā)芽大豆酚酸含量的影響Fig. 3 Effect of GABA on the content of phenolic acid in germinated soybean

2.4 外源GABA對發(fā)芽大豆PAL活力的影響

圖4顯示了不同濃度GABA培養(yǎng)下發(fā)芽大豆PAL活力的變化。隨著GABA濃度的升高，發(fā)芽大豆中PAL活力呈先升高后下降趨勢。當GABA培養(yǎng)液濃度為10 mmol/L時，PAL活力達到最大值。PAL是植物體苯丙烷類物質(zhì)代謝和木質(zhì)素合成的關鍵酶，在一定程度下能夠降低苯丙烷物質(zhì)代謝的速率。

圖4 GABA對發(fā)芽大豆PAL活力的影響Fig. 4 Effect of GABA on PAL activity of germinated soybean

2.5 外源GABA對發(fā)芽大豆抗氧化能力的影響

由圖5可看出，外源GABA對發(fā)芽大豆的抗氧化能力影響顯著。隨著GABA濃度的增加，無論游離酚酸還是結合酚的DPPH自由基清除能力和ABTS陽離子自由基清除能力均顯著提高，通過與總酚含量變化結果進行對照分析，游離酚和結合酚的DPPH自由基清除能力和ABTS陽離子自由基清除能力均與總酚含量呈正相關。說明外源GABA可以通過調(diào)節(jié)總酚來影響芽苗的抗氧化能力。

圖5 GABA對發(fā)芽大豆抗氧化能力的影響Fig. 5 Effect of GABA on antioxidant capacity of germinated soybean

2.6 外源GABA對發(fā)芽大豆抗氧化酶活性的影響

圖6顯示不同濃度的GABA對發(fā)芽大豆中POD、CAT和APX活力的影響顯著。隨著GABA濃度的升高，3 種抗氧化酶活力均呈先升高后下降的趨勢。當GABA培養(yǎng)液濃度為10 mmol/L時，POD、CAT、APX活力達到最大值。表明當GABA濃度過高時，不利于抗氧化酶活力的持續(xù)增加。

圖6 GABA對發(fā)芽大豆抗氧化酶活力的影響Fig. 6 Effect of GABA on antioxidant enzyme activity of germinated soybean

3 討 論

GABA在植物體內(nèi)具有多重生理作用，如抵御逆境、臨時供氮、刺激激素生成、調(diào)節(jié)植物生長發(fā)育、傳遞信號等[17]。近年來，GABA在植物體中的生理作用已成研究熱點，尤其在GABA調(diào)節(jié)植物生長發(fā)育、參與抵御逆境反應方面的研究較多[18]。正常條件下，植物體中GABA含量低（約為0.03～2.00 μmol/gmf），但在逆境條件（如缺氧、冷害、酸化、干旱、機械刺激）等多種因素脅迫下GABA含量迅速升高[19]。眾多研究表明，GABA能緩解逆境脅迫對植物的傷害，外源GABA能夠提高鹽脅迫下番茄種子的發(fā)芽率[7]，能夠緩解鹽脅迫對玉米種子胚芽鞘伸長的抑制作用[20]及低氧脅迫對甜瓜根系伸長的抑制作用[21]，增強植物的抗氧化系統(tǒng)。在本研究中，隨著外源GABA濃度的增加，發(fā)芽大豆的芽長呈增加趨勢，但是鮮質(zhì)量先升高后降低，干質(zhì)量則呈下降趨勢（圖1）。說明外源GABA處理顯著促進了發(fā)芽大豆生長，增加了干物質(zhì)消耗，其中，5 mmol/L的GABA處理時發(fā)芽大豆吸水率高，發(fā)芽大豆鮮質(zhì)量最高。

目前，研究人員對GABA在植物生長發(fā)育中的作用機理了解甚少，原因在于尚未克隆出植物中的GABA受體基因。已有研究發(fā)現(xiàn)，GABA可能是通過與植物體中已知的谷氨酸受體結合發(fā)揮作用，而這個谷氨酸受體的調(diào)節(jié)區(qū)域與動物體中的GABAB受體結構相似[22]，因而GABA可能作為一種信號分子在細胞內(nèi)或細胞間發(fā)揮作用。Shi Shengqing等[10]研究發(fā)現(xiàn)，在鹽脅迫下添加外源GABA處理錦雞兒根部能夠激活其體內(nèi)多重應答機制，主要包括信號傳遞、蛋白質(zhì)降解調(diào)控、激素合成、活性氧的形成等其他代謝機制。Palanivelu等[23]研究發(fā)現(xiàn)，不同濃度梯度的GABA可能作為信號分子引導花粉管的伸長。GABA與植物的內(nèi)源激素存在互作，可通過調(diào)節(jié)內(nèi)源激素水平來調(diào)節(jié)植物生長。亦有研究表明，逆境脅迫誘導GABA合成，同時也促使乙烯的產(chǎn)生，并且GABA的產(chǎn)生要先于乙烯。用外源GABA處理離體向日葵12 h即誘導乙烯含量增加14 倍，同時促進了乙烯合成的關鍵酶1-氨基環(huán)丙烷-1-羧酸合成酶和1-氨基環(huán)丙烷-1-羧酸氧化酶的基因表達水平明顯增加，但可以確定GABA不是乙烯合成的前體，推測GABA是作為一種信號分子影響相關酶的基因表達[24]。Kramer等[25]通過咖啡豆干燥工藝研究發(fā)現(xiàn)，GABA積累與干旱脅迫相關脫水素的編碼基因表達有關。馬兆武[26]用GABA和CoCl2、AgNO3（乙烯合成途徑和信號途徑的抑制劑）處理煙草幼苗，發(fā)現(xiàn)GABA分別參與了CoCl2和AgNO3對煙草ACO1基因和EIL3/4基因的表達，在6 h時能夠緩解其抑制作用，并能增強EIL3/4基因的表達，其分子機制尚不清楚，GABA可能作為某些途徑的信號分子參與煙草乙烯信號反應途徑?？梢?，GABA促進植物生長和增強抵抗逆境的能力與其作為信號分子調(diào)控活性氧代謝、調(diào)節(jié)激素合成有關。

隨著外源GABA濃度的提高，總酚含量持續(xù)增加（圖2），游離酚酸含量的變化趨勢與總酚含量變化趨勢一致，結合酚酸含量先升高后下降，但均高于對照（圖3）。說明GABA促進了總酚含量的提高，同時誘導結合酚酸向游離酚酸的轉(zhuǎn)化。當2.5 mmol/L的GABA處理時效果最佳。作為酚類物質(zhì)合成關鍵酶，大豆經(jīng)GABA處理后PAL活力升高，這是酚類物質(zhì)含量升高的重要因素，但是其變化趨勢與總酚含量不一致，說明GABA對PAL的作用具有時空性[12]。此外，GABA處理還促進了抗氧化酶活性的升高，從而增強了抗氧化系統(tǒng)（圖5、6）。推測其機理也與GABA調(diào)節(jié)植物生長發(fā)育、傳遞信號有關，也可能與GABA刺激乙烯產(chǎn)生有關[24]，而乙烯可誘導植物PAL基因的表達[27]，進而引起酚類物質(zhì)的富集。因此，GABA促進發(fā)芽大豆生長代謝的同時，增強了苯丙烷代謝途徑，促進了酚類物質(zhì)的合成和結合酚酸的釋放及其向游離酚酸的轉(zhuǎn)化，并提高了抗氧化酶活力以增強其活性氧清除能力。

外源GABA能顯著提高發(fā)芽大豆的芽長、鮮質(zhì)量，促進發(fā)芽大豆的生長。隨著GABA濃度升高，發(fā)芽大豆的總酚和游離酚酸含量逐漸增加。隨著GABA濃度的升高，結合酚酸逐漸釋放，并向游離形態(tài)轉(zhuǎn)化。GABA處理提高了DPPH自由基、ABTS陽離子自由基清除能力和POD、CAT、APX等抗氧化酶活力?？梢姡庠碐ABA顯著促進苯丙烷代謝途徑誘導酚類物質(zhì)累積，且增強抗氧化能力與其促進發(fā)芽大豆生長有關。