趙巖江，劉力，魏新亭

（1.遂平仁安醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，河南 駐馬 463100；2.鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院神經(jīng)外科，河南 鄭州 450000）

膠質(zhì)瘤是臨床上常見(jiàn)的原發(fā)性腦腫瘤，患者具有預(yù)后效果差，生存期短，復(fù)發(fā)率高的特點(diǎn)[1]。膠質(zhì)瘤的發(fā)生也是一個(gè)多階段的多階段發(fā)展過(guò)程，基因水平?jīng)Q定了膠質(zhì)瘤的發(fā)生和發(fā)展[2]。探索膠質(zhì)瘤進(jìn)展相關(guān)基因及其發(fā)病機(jī)制和分子機(jī)制的深入研究將為發(fā)現(xiàn)新的分子療法和靶向療法提供基礎(chǔ)。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（TGF-β1）是一種具有調(diào)節(jié)機(jī)體細(xì)胞凋亡，增殖和分化的功能的細(xì)胞因子。TGFβ1超家族肽類的細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)控分子（Smad7）它是信號(hào)的負(fù)反饋調(diào)節(jié)器，與R-Smad蛋白通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性地抑制與TβRI結(jié)合，使R-Smad磷酸化過(guò)程受阻[3]。Smad7還通過(guò)遍在蛋白化抑制TGF-β1并促進(jìn)TGF-β1受體的降解，抑制其信號(hào)傳輸。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）是一種促血管生成因子，具有高度特異性的，刺激內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，增加血管通透性,在腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移過(guò)程中起重要作用[4]。本研究選擇2020年9月至2020年10月在我院就診的膠質(zhì)瘤患者,觀察患者TGF-β1，Smad7和VEGF水平，并分析其臨床意義。報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2020年9月-2020年10月在我院接受治療的腦膠質(zhì)瘤患者為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴年齡≥18周歲；⑵經(jīng)影像學(xué)和病理診斷為腦膠質(zhì)瘤；⑶無(wú)其他系統(tǒng)嚴(yán)重疾病者；排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴臨床資料不全者；⑵合并其他顱腦疾病者；⑶精神異常者。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)共納入100例，男58例，女42例，年齡38～70歲，平均57.38±4.12歲；共納入良性腦膠質(zhì)瘤患者100例，男55例，女45例，年齡36～72歲，平均57.40±4.54歲。兩組的一般資料比較無(wú)明顯差別，具有可比性。本項(xiàng)研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)評(píng)審?fù)ㄟ^(guò)，且患者均知情同意。

1.2 研究方法 兩組患者TGF-β1、Smad7、VEGF表達(dá)水平采用免疫組化法檢測(cè)：所有患者反應(yīng)均在濕盒中進(jìn)行，常規(guī)將石蠟切片脫水后，用pH6.0枸櫞酸鹽緩沖液煮沸修復(fù)抗原，使用0.3%H2O2消除內(nèi)源性過(guò)氧化氫酶，室溫下封閉10%BSA，滴加稀釋的一抗，在4℃的加濕箱中過(guò)夜，空白對(duì)照用等量的PBS替換第一抗體，第二天滴加生物素過(guò)氧化物酶復(fù)合物，并在室溫下溫育1h;用含有0.3%H2O2的DAB溶液顯色，約5min時(shí)終止反應(yīng)，并在室溫下通過(guò)光學(xué)顯微鏡下觀察。

1.3 評(píng)價(jià)指標(biāo) 觀察兩組患者TGF-β1、Smad7、VEGF水平，比較不同臨床病理特征腦膠質(zhì)瘤患者TGF-β1、Smad7、VEGF水平的差異，分析影響腦膠質(zhì) 瘤 患 者TGF-β1、Smad7、VEGF表 達(dá) 情 況 的 因素。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析 數(shù)據(jù)采用Excel錄入后，采用SPSS 11.5軟件分析。計(jì)數(shù)和計(jì)量資料分別采用例和均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。應(yīng)用t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者TGF-β1、Smad7、VEGF水平的比較 腦膠質(zhì)瘤患者的TGF-β1、Smad7、VEGF陽(yáng)性表達(dá)率均高于良性腫瘤組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2值=105.195、86.445、106.404，P<0.001）。見(jiàn)表1。

表1 兩組患者TGF-β1、Smad7、VEGF水平的比較

2.2 不同臨床病理特征患者TGF-β1、Smad7、VEGF水平的比較 有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度為中低分化、TNM分期為Ⅲ期+Ⅳ期的腦膠質(zhì)瘤患者的TGF-β1、Smad7、VEGF陽(yáng)性表達(dá)率較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），不同年齡、性別患者的TGFβ1、Smad7、VEGF陽(yáng)性表達(dá)率無(wú)差別，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表2。

表2 不同臨床病理特征患者TGF-β1、Smad7、VEGF水平的比較

2.3 影響腦膠質(zhì)瘤患者TGF-β1、Smad7、VEGF表達(dá)水平的因素 將單因素分析有意義的因素作為自變量，將TGF-β1、Smad7、VEGF陽(yáng)性率作為因變量進(jìn)行回歸分析，結(jié)果顯示，淋巴轉(zhuǎn)移和TNM分期是影響膠質(zhì)瘤患者TGF-β1、Smad7、VEGF陽(yáng)性表達(dá)的因素。見(jiàn)表3。

表3 影響腦膠質(zhì)瘤患者TGF-β1、Smad7、VEGF陽(yáng)性表達(dá)的因素

3 討論

腦膠質(zhì)瘤的特點(diǎn)是浸潤(rùn)生長(zhǎng),沒(méi)有明顯的邊界，難以完全切除并且術(shù)后復(fù)發(fā)率較高，患者中位生存期無(wú)明顯改善[4]。研究發(fā)現(xiàn)腦膠質(zhì)瘤的發(fā)展是一個(gè)涉及長(zhǎng)期多因素參與的復(fù)雜過(guò)程,涉及多因素和多步驟的協(xié)同積累,腫瘤的發(fā)展取決于細(xì)胞的增殖和新血管的形成過(guò)程[5]。通過(guò)該實(shí)驗(yàn)研究，與細(xì)胞增殖和新血管形成密切相關(guān)的因子TGF-β1，Smad7和VEGF出現(xiàn)異常表達(dá)，其表達(dá)情況和微血管密度與細(xì)胞瘤的病理分級(jí)呈正相關(guān)[6]，說(shuō)明三者和微血管密度增加與膠質(zhì)細(xì)胞瘤的發(fā)生發(fā)展有顯著的聯(lián)系。

TGF-β1是促進(jìn)腫瘤進(jìn)展和侵襲的重要因子，在各種腫瘤細(xì)胞和組織中呈現(xiàn)高表達(dá)，參與腫瘤血管生成，增殖和侵襲過(guò)程[7]。Zhang等[8]發(fā)現(xiàn)TGFβ1在高級(jí)別膠質(zhì)瘤中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于低級(jí)別膠質(zhì)瘤，與微血管密度呈正相關(guān)。與本研究的結(jié)果相同。體外研究也證實(shí)TGF-β1可以被用作腫瘤標(biāo)志物之一，并且與增殖，侵襲，轉(zhuǎn)移和預(yù)后密切相關(guān)，是腫瘤細(xì)胞遷移浸潤(rùn)的分子基礎(chǔ)[9]。Smads蛋白是TGF-β信號(hào)通路中的關(guān)鍵分子，具有核轉(zhuǎn)位和轉(zhuǎn)錄因子活性。Smads蛋白的異常功能干擾正常的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)并促進(jìn)腫瘤發(fā)生[10]。Smad7基因作為T(mén)GF-β信號(hào)傳導(dǎo)的抑制劑，與活化的TGF-β受體復(fù)合物特異性和穩(wěn)定結(jié)合，阻斷Smad蛋白的磷酸化，抑制細(xì)胞內(nèi)TGF-β信號(hào)傳導(dǎo)。Smad7表達(dá)異常會(huì)使細(xì)胞對(duì)TGF-β的應(yīng)答過(guò)程受到影響，加劇了膠質(zhì)細(xì)胞瘤的發(fā)展進(jìn)程[11]。

研究表明，腫瘤新生血管形成是由多種因素共同參與的復(fù)雜生物學(xué)過(guò)程，目前認(rèn)為VEGF是血管內(nèi)皮細(xì)胞中具有特異性的血管生成因子之一，并且與膠質(zhì)細(xì)胞瘤的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，可以促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，使血管通透性增加，增強(qiáng)血管支持物的功能和抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡等[12]。VEGF是腫瘤血管生成中重要的血管生成刺激因子。惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞主要作用機(jī)制是分泌大量VEGF，并與血管內(nèi)皮細(xì)胞膜上的受體結(jié)合，發(fā)揮絲裂原活性，使內(nèi)皮細(xì)胞增殖和遷移被激活，產(chǎn)生新的腫瘤血管,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和擴(kuò)散。VEGF可以增加血管通透性，促進(jìn)血液纖維蛋白原的外滲，形成腫瘤周圍水腫，為腫瘤血管生成和腫瘤細(xì)胞的侵襲和生長(zhǎng)提供了良好的生長(zhǎng)環(huán)境[13-15]。

本次研究結(jié)果顯示,兩組患者TGF-β1、Sm ad7、VEGF水平的比較結(jié)果顯示，腦膠質(zhì)瘤患者的TGF-β1、Smad7、VEGF陽(yáng)性表達(dá)率均顯著高于良性腫瘤組。并且有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度為中低分化、TNM分期為Ⅲ期+Ⅳ期的腦膠質(zhì)瘤患者的TGF-β1、Smad7、VEGF陽(yáng)性表達(dá)率較高,不同年齡、性別患者的TGF-β1、Smad7、VEGF陽(yáng)性表達(dá)率無(wú)差別。這些結(jié)果提示TGF-β1，Smad7和VEGF可參與膠質(zhì)瘤的發(fā)病機(jī)制和惡性過(guò)程,三個(gè)指標(biāo)的變化與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的存在與否,細(xì)胞分化與臨床分期有關(guān)，與年齡，性別等因素?zé)o關(guān)。單因素分析將有意義因素作為自變量，TGF-β1，Smad7，VEGF陽(yáng)性率作為因變量回歸分析,結(jié)果顯示淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分 期 是 影 響 膠 質(zhì) 瘤 患 者TGF-β1，Smad7，VEGF陽(yáng)性表達(dá)的因素。

綜上所述，腦膠質(zhì)瘤患者的TGF-β1、Smad7、VEGF陽(yáng)性表達(dá)率較高，且受患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和TNM分期的影響。