梁文

(西安市北車醫(yī)院婦產(chǎn)科，陜西 西安 710086)

出生缺陷通常是指胎兒在子宮內(nèi)部出現(xiàn)結(jié)構(gòu)或者染色體異?，F(xiàn)象，其發(fā)生率約占活產(chǎn)兒的3%左右，不僅影響胎兒的正常生長(zhǎng)發(fā)育，同時(shí)降低我國(guó)人口的出生質(zhì)量。而同型半胱氨酸(HCY)屬于蛋氨酸與半胱氨酸代謝期間的中間產(chǎn)物，其水平在妊娠結(jié)局、血管內(nèi)皮損傷、胎兒出生缺陷上具有重要意義[1]。而葉酸能夠?yàn)镠CY的代謝提供甲基，并成為治療同型半胱氨酸血癥的重要藥物。目前臨床已有文獻(xiàn)[2]證實(shí)，血清HCY水平與葉酸代謝相關(guān)基因多態(tài)性息息相關(guān)，且不同基因型患者的HCY水平存在較大差異。另有報(bào)道[3]指出，妊娠前3個(gè)月，積極補(bǔ)充葉酸可有效改善孕婦機(jī)體HCY水平，從而防止胎兒出生缺陷的出現(xiàn)。但臨床缺少關(guān)于HCY水平與葉酸服用的相關(guān)性報(bào)道，由此本文展開實(shí)驗(yàn)，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2017年1月至2020年1月我院納入的92例孕婦，年齡23～36歲，平均(30.59±1.41)歲；體質(zhì)量20～27 kg/m2，平均(24.23±1.05)kg/m2。納入標(biāo)準(zhǔn)[4]：均屬于健康孕婦，并在我院進(jìn)行常規(guī)產(chǎn)檢；無產(chǎn)科并發(fā)癥或者不良孕產(chǎn)史；基礎(chǔ)信息完整，中途未退出；孕婦與家屬知曉同意。剔除標(biāo)準(zhǔn)：實(shí)驗(yàn)前使用影響維生素B12或者葉酸吸收的藥物；具備惡性腫瘤、肝腎疾病、自身免疫性疾病、嚴(yán)重并發(fā)癥者；存在妊娠神經(jīng)管缺陷。

1.2方法 收集所有孕婦的外周血標(biāo)本，通過離心抽取中間單個(gè)核細(xì)胞層，轉(zhuǎn)移至存放紅細(xì)胞裂解液的試管內(nèi)，依據(jù)說明書要求檢測(cè)MTHFRA1298C、MTHFRC677T、MTRRA66G基因多態(tài)性，并依照每個(gè)基因位點(diǎn)的具體狀況，判斷葉酸的服用能力，結(jié)果0級(jí)無風(fēng)險(xiǎn)，葉酸使用能力正常；1～2級(jí)低風(fēng)險(xiǎn)；3～5級(jí)中等風(fēng)險(xiǎn)；6～8級(jí)高風(fēng)險(xiǎn)。將其中0～2級(jí)孕婦納入甲組，提供400 μg/d的葉酸；而3～8級(jí)納入乙組，提供800 μg/d的葉酸，期間可依照HCY水平來調(diào)整劑量，給藥至孕3個(gè)月。抽取所有孕婦的血液樣品，12 000 r/min離心15 min，并保存上層清液至EP管，加入等體積的異丙醇，搖晃均勻后冷凍保存10 min；將樣品以12 000 r/min離心15 min，去除上層清液，管內(nèi)白色沉淀物即為DNA，選擇75%酒精對(duì)沉淀物進(jìn)行洗滌；將樣品以12 000 r/min離心10 min，去除上層清液，管內(nèi)白色沉淀物即為RNA，室溫放置5 min；選擇30 μL的DEPC水溶解沉淀物，并選擇超微量分光光度技術(shù)對(duì)DNA含量進(jìn)行檢測(cè)，選擇2 μL緩沖液與DNA混合物，放入1.5%瓊脂糖凝膠，調(diào)整電壓120 V，執(zhí)行電泳操作，時(shí)間150 min，使凝膠在紫外凝膠分析儀中曝光，檢查RNA條帶，評(píng)價(jià)RNA降解情況，選擇熒光實(shí)時(shí)定量PCR儀器，對(duì)MTHFRA1298C、MTHFRC677T、MTRRA66G的DNA水平進(jìn)行檢測(cè)，遵照連接酶檢測(cè)反應(yīng)實(shí)施分型，并選擇相應(yīng)軟件實(shí)施基因分型。葉酸服用前、孕早期、孕中期，均收集孕婦的靜脈血，3 000 r/min離心10 min，保留上層清液，置于-80℃條件下待檢，最后按照酶聯(lián)免疫法及試劑盒說明書要求檢測(cè)血清HCY。

1.3觀察指標(biāo) 分析所有孕婦的基因分型結(jié)果，并對(duì)比不同基因型孕婦的HCY水平，記錄葉酸服用前、孕早期、中期的HCY水平，并記錄兩組胎兒出生缺陷的發(fā)生率。

2 結(jié) 果

2.1所有孕婦的不同基因的分型 經(jīng)檢查發(fā)現(xiàn)，MTHFRA1298C基因型是AA 47例(51.09%)、CC 12例(13.04%)、AC 33例(35.87%)，MTHFRC677T是CC 7例(7.61%)、TT 51例(55.43%)、CT 34例(36.96%)，MTRRA66G是AA 52例(56.52%)、GG 35例(38.04%)、AG 5例(5.43%)。

2.2不同基因分型的HCY水平比較 不同基因分型上的HCY水平差異顯著(P<0.05)。見表1。

表1 不同基因分型的HCY水平比較

2.3兩組孕婦不同時(shí)間點(diǎn)的HCY水平比較 甲組在葉酸服用前的HCY上與乙組對(duì)比差異顯著(t=10.875，P<0.05)，但兩組孕早期、中期的HCY水平相比無差異(t=0.503、0.441，P>0.05)。見表2。

表2 兩組不同時(shí)間點(diǎn)的HCY水平比較

2.4兩組胎兒出生缺陷的發(fā)生率比較 甲組無先天性心臟病、神經(jīng)管畸形、唐氏綜合征、四肢畸形、唇腭裂等缺陷發(fā)生，乙組先天性心臟病、神經(jīng)管畸形、唐氏綜合征、四肢畸形、唇腭裂各有1例，兩組胎兒出生缺陷的發(fā)生率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=3.033，P>0.05)。

3 討 論

臨床研究[5]指出，隨著HCY水平的不斷增加，胎兒出生缺陷的風(fēng)險(xiǎn)隨之升高，其中HCY存在一定毒性能力，當(dāng)機(jī)體中HCY水平升高后，可直接牽連血管內(nèi)皮細(xì)胞受損，并對(duì)血小板進(jìn)行刺激，使其出現(xiàn)增殖現(xiàn)象，并形成血栓，可造成胎盤栓塞，并切斷機(jī)體吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，同時(shí)還可阻礙代謝物質(zhì)排出，對(duì)胎兒新陳代謝造成極大影響。另外，HCY水平升高后，可妨礙S腺苷蛋氨酸產(chǎn)生，造成DNA甲基化，使染色體分裂，進(jìn)一步增加胎兒出生缺陷的發(fā)生率，受到臨床重點(diǎn)關(guān)注[6]。臨床經(jīng)研究[7]發(fā)現(xiàn)孕婦機(jī)體中HCY水平容易受到葉酸服用度的影響，而葉酸服用度與葉酸代謝相關(guān)基因關(guān)鍵酶調(diào)控存在關(guān)聯(lián)，其中葉酸代謝相關(guān)基因關(guān)鍵酶以MTHFRA1298C、MTHFRC677T、MTRRA66G較為常見，一旦上述三類出現(xiàn)基因多態(tài)性后，極易減低孕婦機(jī)體中酶的活性能力，從而使大量HCY堆積在血液，進(jìn)而提升同型半胱氨酸血癥發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)。雖然臨床已有文獻(xiàn)[8]證明，妊娠前、孕后3個(gè)月服用葉酸至關(guān)重要，能夠減低胎兒出生缺陷的發(fā)生率，但不同地區(qū)孕婦在服用葉酸預(yù)防胎兒出生缺陷上存在一定差異。

本文結(jié)果顯示，MTHFRA1298C基因型是AA、CC、AC，MTHFRC677T是CC、TT、CT，MTRRA66G是AA、GG、AG。甲組在葉酸服用前的HCY上與乙組對(duì)比差異顯著(P<0.05)，但兩組孕早期、中期的HCY水平相比無差異(P>0.05)。兩組在各類胎兒出生缺陷的發(fā)生率上相比無差異(P>0.05)，證實(shí)葉酸代謝關(guān)鍵酶的基因型可直接影響HCY水平，同時(shí)在胎兒出生缺陷上具有重要意義。曾有報(bào)道[9]顯示，同型半胱氨酸血癥經(jīng)過葉酸治療后，雖然能夠改善其HCY水平，但可能提升排卵次數(shù)，增加多胎妊娠的幾率，加上大量服用葉酸后，可造成孕婦脂類代謝異常，并造成血糖水平波動(dòng)，導(dǎo)致心血管疾病產(chǎn)生。本文經(jīng)過研究，使孕婦經(jīng)過個(gè)體化用藥指導(dǎo)，來調(diào)整葉酸的使用度，可有效保障孕婦安全，同時(shí)預(yù)防胎兒出生缺陷的發(fā)生率，值得推廣。

綜上所述，育齡婦女的HCY水平與其葉酸代謝關(guān)鍵酶的基因多態(tài)性存在一定關(guān)聯(lián)，能夠幫助不同基因型孕婦的葉酸服用情況提供指導(dǎo)價(jià)值，同時(shí)可減低胎兒出生缺陷的發(fā)生率。