張亞男，王印寶，陳 秀，羅震宇，向妙蓮，陳 明

不同殺菌劑對(duì)柑橘果實(shí)采后炭疽病菌室內(nèi)毒力測(cè)定

張亞男，王印寶，陳 秀，羅震宇，向妙蓮，陳 明*

（江西農(nóng)業(yè)大學(xué) 農(nóng)學(xué)院/江西省果蔬采后處理關(guān)鍵技術(shù)與質(zhì)量安全協(xié)同創(chuàng)新中心/江西省果蔬保鮮與無損檢測(cè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江西 南昌 330045）

【目的】為篩選出防治柑橘炭疽病的有效藥劑?！痉椒ā坎捎镁z生長(zhǎng)速率法測(cè)定了9種殺菌劑對(duì)柑橘炭疽病菌（）的毒力作用?！窘Y(jié)果】25%吡唑醚菌酯、95%肟菌酯、96%戊唑醇、95%苯醚甲環(huán)唑、40%雙胍三辛烷基、75%百菌清、75%肟菌酯戊唑醇、80%代森錳鋅和70%甲基硫菌靈的EC50分別為0.258 1，0.542 7，0.849 2，0.917 4，1.572 1，3.736 2，4.009 8，5.761 6，17.041 7 mg/L?！窘Y(jié)論】供試9種殺菌劑對(duì)均有一定的抑菌作用，其中25%吡唑醚菌酯毒力最強(qiáng)，70%甲基硫菌靈的毒力最弱。

柑橘炭疽病菌；毒力測(cè)定；殺菌劑

【研究意義】由引起的柑橘炭疽病是柑橘產(chǎn)區(qū)普遍發(fā)生的一種真菌性病害，該病發(fā)生快蔓延廣，給柑橘生產(chǎn)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失[1-2]?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】可使柑橘在生長(zhǎng)季節(jié)中整個(gè)植株葉片卷曲脫落、枝梢壞死干枯、花柱發(fā)褐腐爛，果柄形成“枯蒂”、果實(shí)腐爛干縮[3-5]，或使果實(shí)腰部呈現(xiàn)圓形或近圓形褐色病斑凹陷，病斑革質(zhì)或硬化，同時(shí)病斑上還分布著大量黑色或朱紅色點(diǎn)狀分生孢子盤及由其分泌的分生孢子，嚴(yán)重時(shí)病斑擴(kuò)大可致發(fā)病果實(shí)脫落[5-6]。此外，屬于典型潛伏型侵染菌，潛伏在柑橘果實(shí)內(nèi)隨采后貯運(yùn)導(dǎo)致采后腐爛變質(zhì)，商品價(jià)值下降[7-9]?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】化學(xué)殺菌劑是目前控制柑橘果實(shí)采后炭疽病的主要途徑，在生產(chǎn)中主要應(yīng)用多菌靈和甲基硫菌靈等苯并咪唑類殺菌劑防治該病害[10-12]。但是隨著此類殺菌劑的大量重復(fù)使用，由其導(dǎo)致病原菌的抗藥性等問題越來越嚴(yán)重，急需篩選更多高效低毒的殺菌劑交替使用，避免產(chǎn)生抗藥性?！緮M解決的關(guān)鍵問題】研究以25%吡唑醚菌酯、95%肟菌酯、96%戊唑醇、95%苯醚甲環(huán)唑、40%雙胍三辛烷基、75%百菌清、75%肟菌酯戊唑醇、80%代森錳鋅和70%甲基硫菌靈等9種殺菌劑為材料，測(cè)定其室內(nèi)毒力作用，以期為柑橘果實(shí)采后炭疽病的防治提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 供試病菌

柑橘炭疽病菌（）由江西農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院植物病理實(shí)驗(yàn)室提供，-80 ℃保存，試驗(yàn)前活化待用。

1.2 供試藥劑

80%代森錳鋅400 g/L WP、70%甲基硫菌靈100 g/L WP、75%百菌清400 g/L WP、25%吡唑醚菌酯250 g/L EC、75%肟菌酯戊唑醇WG、95%肟菌酯WG、96%戊唑醇WP、95%苯醚甲環(huán)唑WP和40%雙胍三辛烷基WP，由江西農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院植物保護(hù)系農(nóng)藥實(shí)驗(yàn)室提供。

1.3 供試藥劑對(duì)病原菌的毒力測(cè)定

本試驗(yàn)采用菌絲生長(zhǎng)速率法，先將各供試藥劑用無菌水配成母液，再用無菌水稀釋，配置成7個(gè)不同濃度（每個(gè)藥劑的濃度經(jīng)預(yù)備試驗(yàn)抑制率均在5%～95%）梯度的藥液。用取液器分別吸取2 mL藥液與6 mL PDA培養(yǎng)基（培養(yǎng)基溫度為50 ℃左右），然后在直徑為9 cm的培養(yǎng)皿內(nèi)均勻混合成帶藥平板培養(yǎng)基，試驗(yàn)同時(shí)設(shè)置無菌水空白對(duì)照。

活化-80 ℃保存的柑橘炭疽病菌株，置25 ℃黑暗環(huán)境培養(yǎng)，7 d后用滅菌打孔器取直徑為7 mm邊緣的菌絲塊，分別轉(zhuǎn)移到帶藥平板培養(yǎng)基上，每處理3次重復(fù)，置于25 ℃恒溫培養(yǎng)箱。當(dāng)菌絲培養(yǎng)約培養(yǎng)皿直徑2/3時(shí)，即可采用十字交叉法測(cè)量菌落直徑，取其平均值計(jì)算出菌絲生長(zhǎng)抑制率。菌絲生長(zhǎng)抑制率計(jì)算公式如下。

菌絲生長(zhǎng)抑制率=[1-(處理菌落直徑-菌餅直徑)/(對(duì)照菌落直徑-菌餅直徑)]×100% （1）

1.4 數(shù)據(jù)處理

利用SPSS 22.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，應(yīng)用最小二乘法，建立“質(zhì)量濃度對(duì)數(shù)-幾率值”的直線方程，其中因變量（）為抑菌率換算而成的幾率值，而自變量（）為實(shí)驗(yàn)藥劑濃度對(duì)應(yīng)的對(duì)數(shù)值，并分別得出各供試藥劑的EC50值和其相關(guān)系數(shù)2。

2 結(jié)果與分析

9種殺菌劑對(duì)的室內(nèi)毒力測(cè)定結(jié)果見表1。25%吡唑醚菌酯EC對(duì)菌絲生長(zhǎng)的抑菌活性最高，EC50為0.258 1mg/L，而70%甲基硫菌靈WP對(duì)的毒力最弱，其EC50為17.041 7 mg/L。75%百菌清WP、75%肟菌酯戊唑醇WG、80%代森錳鋅WP、95%肟菌酯、96%戊唑醇WP、95%苯醚甲環(huán)唑WP、40%雙胍三辛烷基WP和80%代森錳鋅WP對(duì)菌絲抑菌活性次之，其EC50分別為0.542 7，0.849 2，0.917 4，1.572 1，3.736 2，4.009 8，5.761 6 mg/L，EC50值在10 mg/L以下，均有較好的抑菌活性。

表1 9種殺菌劑對(duì)柑橘炭疽病菌的室內(nèi)毒力測(cè)定

3 結(jié)論與討論

試驗(yàn)采用菌絲生長(zhǎng)速率法分析了9種殺菌劑對(duì)柑橘炭疽病菌的毒力，結(jié)果表明，除70%甲基硫菌靈對(duì)的毒力相對(duì)較弱，其它8種殺菌劑對(duì)柑橘炭疽病菌均具有較好的抑菌效果，其中25%吡唑醚菌酯對(duì)菌絲生長(zhǎng)的抑菌效果最好，其EC50僅為0.258 1mg/L。吡唑醚菌酯屬于甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑，該試劑會(huì)阻止細(xì)胞色素傳遞，導(dǎo)致線粒體不能生產(chǎn)細(xì)胞正常代謝所需的能量，細(xì)胞死亡，從而抑制孢子萌發(fā)和菌絲生長(zhǎng)。大量研究表明，炭疽病菌對(duì)不同殺菌劑的敏感性存在顯著差異，不同殺菌劑通過一定比例配比也可表現(xiàn)較好的抑菌作用[1,13-14]。王賢達(dá)等[1]試驗(yàn)證實(shí)，45%咪鮮胺和60%唑醚·代森聯(lián)對(duì)的抑菌效果較好，其EC50值依次為0.05，0.11 μg/mL。而陳怡志等[9]采用25%咪鮮胺微乳劑和25%苯醚甲環(huán)唑微乳劑質(zhì)量比6:4復(fù)配劑1 000倍液、2 000倍液、3 000倍液均對(duì)柑橘炭疽病表現(xiàn)出較好的防治效果。此外，唑胺菌酯與咪鮮胺以5:1的配比對(duì)亦有較好的抑菌作用[14]。

基于本試驗(yàn)室內(nèi)毒力測(cè)定結(jié)果，在柑橘果實(shí)采后炭疽病防治中，建議優(yōu)先使用25%吡唑醚菌酯，而95%肟菌酯、96%戊唑醇和95%苯醚甲環(huán)唑可作為交替使用殺菌劑。因室內(nèi)試驗(yàn)和實(shí)踐環(huán)境存在較大差異，上述9種殺菌劑對(duì)柑橘果實(shí)采后炭疽病的貯藏效果，有待后續(xù)試驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證。

[1] 王賢達(dá), 林雄杰, 胡菡青, 等. 4種殺菌劑對(duì)3種果樹炭疽病菌的室內(nèi)毒力測(cè)定[J]. 東南園藝, 2020, 8(4): 28-31.

[2] 趙相燕. 柑橘炭疽病綜合防治技術(shù)[J]. 云南農(nóng)業(yè), 2016(8): 34-35.

[3] 黃小蘭. 柑橘膠孢炭疽菌毒素的粗提取及致病性研究[D]. 重慶: 西南大學(xué), 2017.

[4] 蒲占湑, 鹿連明, 黃振東, 等. 浙江省柑橘膠孢炭疽菌遺傳多樣性的ISSR分析[J]. 福建農(nóng)林大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版), 2017, 46(6): 607-611.

[5] 尹良芬, 都勝芳, 蔡明歷, 等. 野生柑橘炭疽病鑒定[J]. 西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào), 2017, 30(3): 590-594.

[6] 羅秀梅. 柑橘炭疽病的發(fā)生規(guī)律與防治方法[J]. 種子科技, 2016, 34(8): 95.

[7] 李航兵, 黃斌, 王新華, 等. 漢中市柑橘炭疽病的發(fā)生原因及綜合防治技術(shù)[J]. 陜西農(nóng)業(yè)科學(xué), 2017, 63(12): 90-91.

[8] 鄒娟, 姚卓, 尚永華. 柑橘炭疽病菌的生物學(xué)特性及枯草芽胞桿菌對(duì)其的抑制作用[J]. 植物保護(hù), 2016, 42(1): 61-67.

[9] 陳怡志, 張蕊, 楊石有. 不同藥劑對(duì)柑橘炭疽菌的毒力測(cè)定及田間防病效果[J]. 中國(guó)植保導(dǎo)刊, 2017, 37(2): 53-57.

[10] 杜丹超, 蒲占湑, 胡秀榮, 等. 氟啶胺對(duì)多種柑橘病原真菌的室內(nèi)毒力作用[J]. 浙江柑橘, 2020, 37(1): 13-15.

[11] 賴寶春, 吳順章, 鄭春明, 等. 琯溪蜜柚炭疽病病原鑒定[J]. 果樹學(xué)報(bào), 2017, 34(9): 1178-1184.

[12] 黃小蘭, 蓋智星, 王日葵, 等. 對(duì)羥基苯甲酸處理對(duì)采后柑橘炭疽病的抑制及機(jī)理研究[J]. 食品與機(jī)械, 2016, 32(9): 121-125.

[13] 趙杰, 陳宣明, 遇露, 等. 唑胺菌酯與咪鮮胺混劑對(duì)柑橘炭疽病的藥效試驗(yàn)[J]. 農(nóng)藥, 2016, 55(4): 290-291.

[14] 張帥, 李世雄, 楊太新, 等. 苯醚甲環(huán)唑和吡唑醚菌酯混合物對(duì)炭疽病菌的聯(lián)合毒力及藥效[J]. 植物保護(hù), 2013, 39(6): 160-163.

張亞男, 王印寶, 陳秀, 等. 不同殺菌劑對(duì)柑橘果實(shí)采后炭疽病菌室內(nèi)毒力測(cè)定[J]. 生物災(zāi)害科學(xué), 2021, 44(2): 150-152.

Toxicity Tests of Different Fungicides Againstof Postharvest Citrus Fruits

ZHANG Ya’nan, WANG Yinbao, CHEN Xiu, LUO Zhengyu, XIANG Miaolian, CHEN Ming*

(Collaborative Innovation Center of Postharvest Key Technology and Quality Safety of Fruits and Vegetables of Jiangxi Province/Jiangxi Key Laboratory for Postharvest Technology and Non-destructive Testing of Fruits & Vegetables, School of Agronomy, Jiangxi Agricultural University, Nanchang 330045, China)

[Objectives] The study was conducted to screen effective fungicides to control citrus anthracnose caused by. [Methods] The toxicity tests of 9 fungicides againstwere compared by using the mycelial growth rate method under laboratory conditions. [Results] The results showed that EC50of 25% Pyraclostrobin, 95% Trifloxystrobin, 96% Tebuconazole, 95% Difenoconazole, 40% Biguanide trioctyl, 75% Chlorothalonil, 75% Trifloxystrobin tebuconazole, 80% Mancozeb and 70% Thiophanate methyl were 0.2581 mg/L, 0.5427 mg/L, 0.8492 mg/L, 0.9174 mg/L, 1.5721 mg/L, 3.7362 mg/L, 4.0098 mg/L, 5.7616 mg/L and 17.0417 mg/L, respectively. [Conclusion] All 9 fungicides had certain inhibition effects on, of which 25% Pyraclostrobin had the best one, while 70% Thiophanate methyl had the weakest.

; toxicity test; fungicide

S436.66

A

2095-3704（2021）02-0150-03

2021-03-10

2021-04-15

江西省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(20192BAB204018)和江西省果蔬采后處理關(guān)鍵技術(shù)及質(zhì)量安全協(xié)同創(chuàng)新中心項(xiàng)目(JXGS-03)

張亞男（1993—），女，碩士生，主要從事果實(shí)采后生理研究，zyn781246@163.com，*通信作者：陳明，副教授，博士，mingchen@jxau.edu.cn。