張曼玲，李朝娟，湯曉琴，楊 飛，門 靖，任亞寧

西安萬隆制藥股份有限公司，陜西 西安 710119

1-(3-氯苯基)-4-(3-氯丙基)哌嗪鹽酸鹽，CAS號為52605-52-4，分子式C13H19Cl3N2，分子量309.66，作為一種重要的氯苯基哌嗪衍生物，在化工醫(yī)藥、有機(jī)合成領(lǐng)域有廣泛的應(yīng)用[1-2]。同時(shí)，1-(3-氯苯基)-4-(3-氯丙基)哌嗪鹽酸鹽是制備抗抑郁藥奈法唑酮(Nefazodone)、依托哌酮(Etoperidone)、曲唑酮(Trazodone)、非典型抗精神病藥物伊潘立酮(Iloperidone)的關(guān)鍵中間體[3-7]，而制備1-(3-氯苯基)-4-(3-氯丙基)哌嗪鹽酸鹽的經(jīng)典合成路線是以1-溴-3-氯丙烷為起始原料，經(jīng)與1-(3-氯苯基)哌嗪反應(yīng)生成1-(3-氯苯基)-4-(3-氯丙基)哌嗪再經(jīng)成鹽精制獲得[8]。因此，1-溴-3-氯丙烷的分析及檢測技術(shù)對原料藥的品質(zhì)至關(guān)重要。

吳成杰等[9]建立了一種氣相色譜法(GC)檢測1-溴-3氯丙烷在磷酸哌喹中的方法，色譜系統(tǒng)選用DB-1(30 m×0.32 mm,3.0 μm)氣相色譜柱，程序升溫，氫火焰離子化檢測器，分流比為5∶1，測試表明樣品1-溴-3氯丙烷在1～15 μg/mL內(nèi)進(jìn)樣，外標(biāo)法以峰面積計(jì)，線性關(guān)系良好，平均回收率為99.5%，最低檢測質(zhì)量濃度為0.227 2 μg/mL。楊茉等[10]開發(fā)了GC檢測伊潘立酮中1-溴-3-氯丙烷的方法，色譜系統(tǒng)采用DM-624(30 m×0.53 mm，3.0 μm)氣相色譜柱，程序升溫，氫火焰離子化檢測器，分流比為3∶1，結(jié)果顯示1-溴-3-氯丙烷在7.5～37.5 μg/mL內(nèi)進(jìn)樣，呈現(xiàn)出良好的線性關(guān)系，平均回收率為99.4%，最低檢測質(zhì)量濃度為12.5 μg/mL。陳蓉等[11]采用頂空氣相色譜法成功測定鹽酸地拉卓原料藥中1-溴-3-氯丙烷以及乙醇、丙酮和甲苯3種殘留溶劑，以Agilent DB-WAX毛細(xì)管柱(30 m×0.32 mm，0.50 μm)為色譜柱，程序升溫，氫火焰離子化檢測器，以分流比5∶1測定1-溴-3-氯丙烷，以分流比50∶1測定乙醇、丙酮和甲苯，頂空進(jìn)樣，結(jié)果表明：1-溴-3-氯丙烷、乙醇、丙酮和甲苯在測試范圍內(nèi)線性關(guān)系均良好，達(dá)到實(shí)驗(yàn)檢測要求。但是以上方法的操作都相對復(fù)雜，在實(shí)際應(yīng)用中有一定的限制。

本研究在文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，開發(fā)一種基于GC測定1-(3-氯苯基)-4-(3-氯丙基)哌嗪鹽酸鹽中1-溴-3-氯丙烷的殘留方法，并進(jìn)行優(yōu)化，以此對1-(3-氯苯基)-4-(3-氯丙基)哌嗪鹽酸鹽進(jìn)行質(zhì)量控制，以便獲得操作簡單、重復(fù)性好的1-溴-3-氯丙烷殘留檢測分析方法，以期為相關(guān)藥物的質(zhì)量控制及雜質(zhì)質(zhì)譜分析檢測提供指導(dǎo)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 試劑與儀器

1-溴-3-氯丙烷(含量≥98.0%)，Sigma公司；1-(3-氯苯基)-4-(3-氯丙基)哌嗪鹽酸鹽(含量≥98.0%，批號：ZT-200501、ZT-200502、ZT-200503)，武漢欣欣佳麗生物科技有限公司；乙腈，色譜純，國藥集團(tuán)試劑有限公司；純化水，屈臣氏集團(tuán)有限公司。

Agilent 7890B型氣相色譜儀(FID檢測器)，Agilent公司；MS105DU型電子天平，梅特勒-托利多公司。

1.2 色譜條件

色譜柱為Agilent DB-624毛細(xì)管柱(30 m×0.25 mm，1.8 μm)；程序升溫為起始溫度30 ℃，保持10 min，再以速率20 ℃/min升至220 ℃，保持10 min；檢測器溫度為240 ℃；進(jìn)樣口溫度為220 ℃；載氣為N2，流速為2.0 mL/min；分流比為5∶1。進(jìn)樣方式為直接進(jìn)樣，進(jìn)樣量1.0 μL。

1.3 溶液的配制

稀釋劑為V(乙腈)∶V(水)=100∶1；稀釋劑作為空白溶劑。

對照品溶液：稱取1-溴-3-氯丙烷123.30 mg置于100 mL容量瓶中，加稀釋劑溶解至刻度，搖勻，作為對照品儲備溶液；精密量取1.0 mL置于20 mL容量瓶中，加稀釋劑至刻度，搖勻備用。

供試品溶液：稱取1-(3-氯苯基)-4-(3-氯丙基)哌嗪鹽酸鹽樣品約1 g，精密稱定，置10 mL容量瓶中，加稀釋劑適量溶解并定容(采用0.25 μm過濾膜進(jìn)行過濾前處理)。

2 結(jié)果與討論

2.1 專屬性及系統(tǒng)適用性

取空白溶劑、對照品溶液和供試品溶液(批號：ZT-200501)，分別進(jìn)樣檢測，結(jié)果見圖1。由圖1可知：空白溶劑乙腈峰對1-溴-3-氯丙烷峰無干擾，1-溴-3-氯丙烷峰與溶劑峰的分離度良好，R>1.5。

2.2 線性關(guān)系

精密量取1-溴-3-氯丙烷的對照品儲備溶液0.1、0.2、0.5、0.8、1.0和2.0 mL，分別置20 mL的量瓶中，加入稀釋劑至刻度，搖勻(記為線性1～6)。取線性1～6的樣品分別進(jìn)樣，將測得結(jié)果進(jìn)行線性回歸，回歸方程為y=9 862.269 0x+595.595 4，相關(guān)系數(shù)r=0.999 6。由回歸方程可知：1-溴-3-氯丙烷在6.18～122.40 μg/mL濃度范圍內(nèi)，與濃度成良好的線性關(guān)系，

圖1 空白溶劑、對照品溶液和供試品的GC圖

2.3 定量限與檢出限

精密量取對照品溶液，用稀釋劑逐級稀釋，分別進(jìn)樣。按信噪比(S/N)=10∶1考察定量限，測得1-溴-3-氯丙烷的定量限為6.18 μg/mL。取定量限溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，1-溴-3-氯丙烷峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為1.86%(n=6)。按S/N=3∶1考察檢出限，1-溴-3-氯丙烷檢出限為1.51 μg/mL。

2.4 精密度試驗(yàn)

進(jìn)樣精密度：取對照品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：1-溴-3-氯丙烷峰面積的RSD為1.21%(n=6)，表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：制備6份加標(biāo)供試品液，色譜條件進(jìn)樣檢測，記錄峰面積并以外標(biāo)法計(jì)算1-溴-3-氯丙烷的殘留量，結(jié)果表明：6份加標(biāo)供試品溶液測得1-溴-3-氯丙烷的殘留量的平均值為0.049 1%，RSD為2.52%(n=6)，表明方法重復(fù)性良好。

中間精密度試驗(yàn)：不同時(shí)間、不同分析人員、不同的氣相色譜儀進(jìn)行重復(fù)性樣品溶液制備12份，進(jìn)樣檢測，記錄峰面積并以外標(biāo)法計(jì)算1-溴-3-氯丙烷的殘留量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：12份加標(biāo)供試品溶液測得1-溴-3-氯丙烷的殘留量的平均值為0.48%，RSD為3.76%(n=12)，表明本方法重現(xiàn)性良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取對照品溶液、供試品溶液，分別于室溫放置0、4、8、12、16、20和24 h，分別進(jìn)樣檢測，結(jié)果顯示：24 h內(nèi)對照品溶液1-溴-3-氯丙烷峰面積的RSD為2.63%(n=7)；24 h內(nèi)重復(fù)性溶液1-溴-3-氯丙烷峰面積的RSD為2.95%(n=7)，表明對照品溶液、供試品溶液在室溫下放置24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6 準(zhǔn)確度試驗(yàn)

取樣品(批號：ZT-200501)適量，分別加入10%、100%、200%濃度的對照品溶液適量，制成10%加標(biāo)供試品溶液、100%加標(biāo)供試品溶液、200%加標(biāo)供試品溶液，每個(gè)濃度平行制備3份。取各水平加標(biāo)供試品溶液和供試品溶液分別進(jìn)樣檢測，計(jì)算1-溴-3-氯丙烷的回收率，結(jié)果見表1。由表1可知：9份加標(biāo)供試品溶液的回收率為90.78%～92.81%，平均回收率為91.77%，RSD為1.78%，表明本方法測定樣品中1-溴-3-氯丙烷殘留的準(zhǔn)確度良好。

表1 準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

2.7 耐用性試驗(yàn)

考察載氣流速、柱溫、進(jìn)樣口溫度等參數(shù)，在不同條件下測定1-溴-3-氯丙烷含量，結(jié)果見表2。由表2可知：耐用性結(jié)果的RSD為5.20%，表明該方法耐用性良好。

表2 耐用性試驗(yàn)結(jié)果

2.8 樣品中1-溴-3-氯丙烷殘留的測定

取樣品適量，制備供試品溶液，分別進(jìn)樣檢測，按外標(biāo)法計(jì)算1-溴-3-氯丙烷的含量，結(jié)果見表3。由表3可知：3個(gè)批次的樣品中都沒有檢出1-溴-3-氯丙烷含量。

表3 樣品中1-溴-3-氯丙烷殘留量測定結(jié)果(n=3)

3 結(jié)論

本研究開發(fā)了一種GC法分析測定1-(3-氯苯基)-4-(3-氯丙基)哌嗪鹽酸鹽中1-溴-3-氯丙烷殘留方法，探討了GC測定過程中的影響因素，包括專屬性、線性關(guān)系、定量限與檢出限、精密度、穩(wěn)定性、準(zhǔn)確度、耐用性等，測試結(jié)果表明：在6.18～122.40 μg/mL范圍內(nèi)，呈現(xiàn)出良好的線性關(guān)系，其加標(biāo)回收率為90.78%～92.81%，RSD為1.78%，定量限為6.18 μg/mL，檢出限為1.51 μg/mL，穩(wěn)定性和耐用性良好。

該檢測方法操作簡單、重復(fù)性好，對開發(fā)1-(3-氯苯基)-4-(3-氯丙基)哌嗪鹽酸鹽的質(zhì)量控制和檢測方法具有重要借鑒意義。