杜輝輝，陶 潔，聶 寧，雷 鳴，楊蕊嘉，鐵柏清

（湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)資源環(huán)境學(xué)院，湖南省灌溉水源水質(zhì)污染凈化工程技術(shù)研究中心，長(zhǎng)沙 410128）

銻（Sb）是一種微量類(lèi)金屬元素，在土壤中的天然濃度很低，約為0.05～4.0 mg·kg-1[1]。但近幾十年來(lái)，隨著銻礦開(kāi)采和冶煉活動(dòng)的增加，區(qū)域土壤銻濃度大大超過(guò)環(huán)境背景值，引起嚴(yán)峻的環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)問(wèn)題。中國(guó)是世界上銻產(chǎn)量最大的國(guó)家，銻礦開(kāi)采和冶煉區(qū)污染問(wèn)題尤為突出，特別是在湖南、貴州、廣西等銻礦產(chǎn)出地[2]。因此，銻污染土壤的治理與修復(fù)工作有十分重要的意義，而深入理解銻進(jìn)入土壤后的界面化學(xué)行為是治理與修復(fù)的理論前提[3]。

土壤是一個(gè)異質(zhì)多相復(fù)合體系，其中礦物約占固相組成的95%以上。銻進(jìn)入土壤后，會(huì)在礦物表面發(fā)生吸附解吸、氧化還原等反應(yīng)，影響其生物有效性和歸宿[4]。大量研究表明，金屬氧化物如鐵/錳礦物對(duì)銻有較強(qiáng)的吸附能力[5-6]，是銻在土壤中的主要吸附載體。銻在鐵/錳氧化物表面主要形成穩(wěn)定的內(nèi)圈絡(luò)合物[7]，且Sb（Ⅲ）會(huì)發(fā)生氧化反應(yīng)[8-9]。目前，有關(guān)銻在土壤鋁氧化物表面吸附的研究還很缺乏。

土壤礦物常常與有機(jī)組分，如腐殖酸、微生物，膠結(jié)在一起形成礦質(zhì)-有機(jī)復(fù)合體[10-12]。它們之間的交互作用改變了膠體的物理化學(xué)性質(zhì)，如粒徑、比表面積、電荷及官能團(tuán)等，進(jìn)而影響污染物特別是重金屬在膠體界面的吸附解吸、遷移轉(zhuǎn)化等行為[13]。近年來(lái)，多有研究報(bào)道重金屬鎘（Cd2+）、鉛（Pb2+）、銅（Cu2+）等在礦物-有機(jī)物/微生物復(fù)合界面的吸附行為[14-17]；有機(jī)組分不僅促進(jìn)了重金屬在礦物表面的吸附，還顯著改變它們?cè)趶?fù)合膠體界面的分配[18-19]。但目前，尚很少有研究關(guān)注有機(jī)組分對(duì)銻在金屬氧化物表面吸附的影響。

本研究擬選取代表性土壤鋁氧化物（α-Al2O3）及微生物（耐銻蠟狀芽孢桿菌），通過(guò)批吸附試驗(yàn)并結(jié)合X-射線光電子能譜和電鏡能譜，從銻的吸附量、親和力、分布、結(jié)合官能團(tuán)和價(jià)態(tài)轉(zhuǎn)變等方面綜合探討Sb（Ⅲ/Ⅴ）在α-Al2O3-蠟狀芽孢桿菌二元復(fù)合膠體界面的吸附過(guò)程和機(jī)制，闡明微生物在吸附過(guò)程中的作用，以期對(duì)理解銻在土壤微界面的化學(xué)行為提供一定的理論支撐。

1 材料與方法

1.1 供試材料

α-Al2O3購(gòu)自上海阿拉丁生化科技股份有限公司，粒徑小于等于200 nm。

供試菌株為一株革蘭氏陽(yáng)性蠟狀芽孢桿菌（Bacillus cereus），其DNA序列數(shù)據(jù)庫(kù)（GenBank）錄入號(hào)為MH345838。該菌株為本課題組前期從銻污染土壤中篩選的一株耐銻細(xì)菌[20]。細(xì)菌的培養(yǎng)采用溶菌肉湯（Luria-Bertani）培養(yǎng)基（酵母粉5 g·L-1，蛋白胨10 g·L-1，氯化鈉10 g·L-1，pH ≈ 7.0），培養(yǎng)至指數(shù)生長(zhǎng)末期，離心收集，用0.01 mol·L-1KCl洗滌三次后懸浮。

Sb（Ⅲ）和Sb（Ⅴ）標(biāo)準(zhǔn)溶液分別用三氧化二銻和焦銻酸鉀配制。

1.2 α-Al2O3-細(xì)菌二元膠體制備

采用吸附方式制備礦物-細(xì)菌二元膠體：將α-Al2O3和細(xì)菌分別均勻懸浮于0.01 mol·L-1KCl電解質(zhì)中，在攪拌條件下，將兩懸液均勻混合，并反應(yīng)2 h，使兩者的吸附達(dá)到平衡[21]?？疾靸煞N不同組分比例，即礦物：細(xì)菌質(zhì)量比分別為30︰70和70︰30。制備的復(fù)合膠體置于4℃條件下保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 批吸附試驗(yàn)

取適量吸附劑（蠟狀芽孢桿菌、α-Al2O3及其復(fù)合體）置于50 mL塑料離心管中，加入一定量的Sb（Ⅲ）/Sb（Ⅴ）溶液，最后用0.01 mol·L-1KCl 定容至30 mL。在試驗(yàn)過(guò)程中，控制吸附劑濃度為0.5 g·L-1，Sb濃度為 0～100 mg·L-1，調(diào)節(jié)懸液pH為6.5，并置于恒溫?fù)u床（25℃）振蕩12 h。隨后將懸浮液離心，上清液用 0.45 μm 濾膜過(guò)濾，并用電感耦合等離子體發(fā)射光譜儀（ICP-OES，PerkinElmer Optima 8300，美國(guó)）測(cè)定總銻。離心后的沉淀物用于掃描電鏡（SEM）和X-射線光電子能譜（XPS）分析。

1.4 SEM和XPS測(cè)定

掃描電子顯微鏡（FE-SEM / EDX，Quanta F250，德國(guó)）用于觀察α-Al2O3-細(xì)菌復(fù)合膠體形貌。樣品用2.5%戊二醛原位固定并用乙醇脫水。將α-Al2O3-細(xì)菌復(fù)合體吸附Sb的產(chǎn)物進(jìn)行SEM能譜面掃描測(cè)定，分析碳（C）、氮（N）、氧（O）、鋁（Al）和Sb的分布。

用 XPS 電子光譜儀（Thermo ESCALAB 250XI，美國(guó)）記錄 C1s、O1s 和Sb 3d高分辨圖譜，用XPSPEAK41軟件擬合 XPS 光譜。

2 結(jié)果與討論

2.1 α-Al2O3-細(xì)菌復(fù)合膠體形貌特征

圖1 呈現(xiàn)了α-Al2O3及α-Al2O3-細(xì)菌復(fù)合膠體形貌。氧化鋁為納米粒級(jí)的細(xì)顆粒，但多團(tuán)聚在一起，形成粒徑較大的團(tuán)聚體。在α-Al2O3-細(xì)菌復(fù)合膠體中，細(xì)菌為桿狀，氧化鋁顆粒緊密吸附在細(xì)菌細(xì)胞表面。α-Al2O3的等電點(diǎn)大約在pH 8左右[22]，因此在本實(shí)驗(yàn)體系中，α-Al2O3和蠟狀芽孢桿菌之間會(huì)有較強(qiáng)的靜電引力，促使它們緊密膠結(jié)在一起。但本研究發(fā)現(xiàn)α-Al2O3并未在細(xì)菌表面形成一層緊致的“礦物膜”，這與前人所研究的鐵氧化物-細(xì)菌復(fù)合膠體[23]有顯著區(qū)別，因此細(xì)菌表面位點(diǎn)未被α-Al2O3完全掩蓋，在隨后銻的吸附反應(yīng)中可能發(fā)揮作用。此外還發(fā)現(xiàn)，在有細(xì)菌存在時(shí)，α-Al2O3顆粒很少團(tuán)聚成大團(tuán)聚體，而多以小顆粒形式吸附在細(xì)菌表面，較小的粒徑可能進(jìn)一步提供更多的吸附點(diǎn)位。

2.2 銻在復(fù)合膠體上的等溫吸附

圖2 為銻在pH 6.5時(shí)的等溫吸附結(jié)果，吸附數(shù)據(jù)可較好地用朗格繆爾（Langmuir）方程擬合（擬合度R2≥0.98，表1）。Langmuir方程式為：

式中，Qe代表在銻平衡濃度為Ce時(shí)的吸附量，mg·g-1；Qmax為最大吸附容量，mg·g-1；KL代表親和力。

由圖2可知，α-Al2O3對(duì)銻的吸附能力要遠(yuǎn)大于細(xì)菌：α-Al2O3對(duì)Sb（Ⅲ）和Sb（Ⅴ）的最大吸附量分別為52.72和50.64 mg·g-1；而蠟狀芽孢桿菌則為15.46和13.88 mg·g-1（表1）。這主要由于在pH 6.5時(shí)，α-Al2O3攜帶較多的正電荷而細(xì)菌表面攜帶負(fù)電荷，較強(qiáng)的靜電吸引力使α-Al2O3吸附更多的Sb含氧陰離子。銻在α-Al2O3-蠟狀芽孢桿菌復(fù)合體上的吸附量介于單一礦物和細(xì)菌之間，且隨著復(fù)合體中α-Al2O3質(zhì)量比的增多，Sb的吸附量增加，即α-Al2O3-細(xì)菌_70：30大于α-Al2O3-細(xì)菌_30：70。

表1 銻等溫吸附Langmuir擬合Table 1 Fitting of Sb adsorption isotherms with the Langmuir model

在前人的研究中，“組分相加”原則常用來(lái)預(yù)測(cè)重金屬在復(fù)合膠體上的吸附量[24-26]，即通過(guò)計(jì)算單一組分上的吸附量，再結(jié)合組分比例，計(jì)算得到復(fù)合體的吸附量。在之前的研究中構(gòu)建了基于Langmuir模型的“組分相加”方法[27]，在此，本研究計(jì)算得到α-Al2O3-細(xì)菌復(fù)合體的理論吸附量（見(jiàn)圖2中虛線）。由圖2可知Sb在α-Al2O3-細(xì)菌復(fù)合體上的理論吸附曲線要小于實(shí)際擬合線；理論最大吸附量（CA-Qmax，表1）要小于實(shí)際吸附量（Qmax，表1），這一結(jié)果表明α-Al2O3和細(xì)菌的交互作用促進(jìn)了Sb的吸附?，F(xiàn)有的研究普遍認(rèn)為，帶負(fù)電荷的組分會(huì)抑制As/Sb等含氧陰離子在金屬氧化物表面的吸附[28-29]。本研究中這一不同結(jié)果可能主要因?yàn)樵趶?fù)合膠體中，α-Al2O3顆粒的團(tuán)聚度低（圖1），因此有更多的礦物吸附點(diǎn)位暴露，從而促進(jìn)Sb的吸附；此外，也不能忽視可能存在的“橋鍵”作用，Sb含氧陰離子可能以“陰離子橋”形式吸附于氧化鋁和細(xì)菌之間；細(xì)菌本身吸附量遠(yuǎn)少于氧化鋁，細(xì)菌表面位點(diǎn)掩蓋效應(yīng)對(duì)Sb的吸附影響可能極小。

2.3 銻在復(fù)合膠體中的微觀分布特征

為了進(jìn)一步研究Sb在α-Al2O3-細(xì)菌復(fù)合膠體上的分布，采集了C、N、O、Al及Sb元素的SEM圖譜（圖3），其中C可代表細(xì)菌組分，Al代表礦物組分。由于復(fù)合膠體的不均質(zhì)性，在區(qū)域中選取若干個(gè)點(diǎn)進(jìn)行測(cè)定。在圖3的 1點(diǎn)，C、N、O、Al及Sb的含量約為26%、1.5%、46%、24%、0.25%；在2點(diǎn)，對(duì)應(yīng)的含量約為46%、8.8%、32%、10.6%和0.02%。本研究發(fā)現(xiàn)，在富含Al元素的點(diǎn)，其吸附Sb的量較Al含量低的點(diǎn)要高很多。用相似的方法對(duì)比1、2、3和4處的元素相對(duì)含量，推測(cè)α-Al2O3在二元復(fù)合膠體吸附銻的過(guò)程中起主導(dǎo)作用。

2.4 銻與復(fù)合膠體的微觀結(jié)合機(jī)制

X-射線光電子能譜（XPS）技術(shù)廣泛應(yīng)用于元素的定量定性分析，可從分子尺度闡釋微觀結(jié)合機(jī)制。本研究中分析了α-Al2O3及蠟狀芽孢桿菌吸附Sb前后的C、O和Sb元素高分辨指紋圖譜，以期獲得參與Sb吸附反應(yīng)的官能團(tuán)及配位信息。雖然也采集α-Al2O3-細(xì)菌復(fù)合膠體的XPS圖譜，但由于復(fù)合體的異質(zhì)性，很難保證不同XPS測(cè)定點(diǎn)礦物：細(xì)菌比例是相同的，因此也不能準(zhǔn)確分析其吸附Sb前后的差別，因此本研究?jī)H分析單一組分吸附Sb前后的XPS圖譜。

圖4 （左）為氧化鋁吸附Sb（Ⅲ/Ⅴ）前后的O 1s圖譜，其中O主要包括532.1 eV處的表面氧（Al-O-H）以及530.7 eV處的晶體氧（Al-O-Al）。當(dāng)吸附Sb（Ⅲ）后，Al-OH特征峰的面積由27.16%增加至32.7%；吸附Sb（Ⅴ）后增至33.64%。這一現(xiàn)象表明α-Al2O3表面的鋁羥基參與了銻的絡(luò)合，可能形成Al-O-Sb內(nèi)圈絡(luò)合物[5]。前人利用X射線吸收精細(xì)結(jié)構(gòu)譜（EXAFS）發(fā)現(xiàn)銻在非晶形水鋁礦表面主要形成了雙齒共角絡(luò)合物[30]，但本研究?jī)H基于XPS的數(shù)據(jù)很難區(qū)分在α-Al2O3表面Sb的精細(xì)配位結(jié)構(gòu)。

圖4 （右）為細(xì)菌的C 1s圖譜，可分為三個(gè)主要組分：約288.0 eV為C=O/O=C=O，主要包括羧基、酯基；286.2 eV處為C-（O，N），為醇、胺、酰胺；285 eV處為C-（C，H），猜測(cè)為脂質(zhì)或者氨基酸的側(cè)鏈[20]。當(dāng)細(xì)菌吸附 Sb（Ⅲ）后，其C=O/O=C=O組分由25%降低至22%，C-（C，H）組分由51%降低至36%；當(dāng)細(xì)菌結(jié)合Sb（Ⅴ）后，這兩個(gè)組分分別降至17%和45%。上述結(jié)果表明羧基和氨基參與了細(xì)菌表面銻的絡(luò)合反應(yīng)[31]。

雖然無(wú)法直接分析α-Al2O3-細(xì)菌復(fù)合膠體XPS圖譜，但通過(guò)對(duì)單一組分的分析可知，Al-OH、COOH和NH2為復(fù)合膠體表面銻的主要結(jié)合點(diǎn)位，且形成了內(nèi)圈絡(luò)合物。

前人研究發(fā)現(xiàn)Sb（Ⅲ）可在鐵/錳氧化物表面發(fā)生氧化反應(yīng)[7-9，32]，但尚未有研究報(bào)道Sb能否在α-Al2O3上發(fā)生相似的反應(yīng)。因此本研究對(duì)Sb 3d3/2XPS光譜進(jìn)行擬合，如圖5所示，Sb（Ⅲ）的峰位于低能量處（～539.4 eV）而Sb（Ⅴ）位于高能量處（～540.2 eV）。當(dāng)Sb（Ⅲ）吸附在α-Al2O3表面，有50%的Sb（Ⅲ）被氧化成Sb（Ⅴ）。由于Al為非變價(jià)元素，因此在氧化過(guò)程中，真正參與電子傳遞的是O2，α-Al2O3可能僅發(fā)揮導(dǎo)體或催化作用。

此外發(fā)現(xiàn)，α-Al2O3-細(xì)菌復(fù)合體吸附Sb（Ⅲ）后主要還是以Sb（Ⅲ）的形式存在，幾乎不存在Sb（Ⅴ），這一現(xiàn)象表明細(xì)菌抑制了Sb（Ⅲ）在氧化鋁表面的氧化反應(yīng)。起初作者推測(cè)蠟狀芽孢桿菌本身可以還原Sb（Ⅴ），從而使部分氧化的Sb（Ⅴ）重新轉(zhuǎn)變?yōu)镾b（Ⅲ）。因此檢測(cè)了純細(xì)菌吸附Sb（Ⅲ）的產(chǎn)物，但由于Sb在細(xì)菌表面的吸附量極少，達(dá)不到XPS的檢測(cè)限，因此未能直接證明。但通過(guò)文獻(xiàn)不難發(fā)現(xiàn)，大部分研究報(bào)道細(xì)菌可以氧化Sb（Ⅲ），如假單胞菌屬[33]、叢毛單胞菌屬[34]以及農(nóng)桿菌屬[35]，卻很少有研究報(bào)道可還原Sb（Ⅴ）的微生物，特別是芽孢桿菌屬。因此作者推測(cè)，細(xì)菌是通過(guò)間接作用影響Sb（Ⅲ）的還原，可能的原因推測(cè)如下：1）單一氧化鋁可作為導(dǎo)體（介質(zhì)）傳遞Sb（Ⅲ）與溶解O2之間的電子，而細(xì)菌由于表面官能團(tuán)的質(zhì)子化，負(fù)電荷較多，電子傳導(dǎo)可能不通暢，因此，復(fù)合體中細(xì)菌表面絡(luò)合的Sb（Ⅲ）很難被氧化；2）氧化鋁可能會(huì)與細(xì)菌表面官能團(tuán)如羧基、含磷官能團(tuán)發(fā)生內(nèi)圈絡(luò)合反應(yīng)[36]，進(jìn)一步影響參與氧化反應(yīng)的官能團(tuán)和電子傳遞。

3 結(jié) 論

由于攜帶電荷的不同，氧化鋁可緊密吸附在蠟狀芽孢桿菌表面，形成較緊致的礦物-細(xì)菌復(fù)合體。銻在α-Al2O3上的吸附量顯著高于細(xì)菌；銻在礦物-細(xì)菌復(fù)合膠體上的吸附不符合“組分相加”原則，存在顯著的促進(jìn)效應(yīng)。在復(fù)合膠體中，氧化鋁對(duì)銻的吸附起主導(dǎo)作用。鋁羥基、羧基和氨基參與了銻在復(fù)合膠體上的絡(luò)合反應(yīng)。細(xì)菌的存在抑制Sb（Ⅲ）在氧化鋁表面的氧化反應(yīng)。因此，在研究銻在土壤中的生物地球化學(xué)循環(huán)時(shí)必須考慮礦物-有機(jī)物相互作用。