周雅,胡曉,李來(lái)好,楊賢慶,陳勝軍,吳燕燕,楊少玲

1(上海海洋大學(xué) 食品學(xué)院,上海,201306) 2(中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院 南海水產(chǎn)研究所,農(nóng)業(yè)農(nóng)村部水產(chǎn)品加工重點(diǎn)研究室,廣東 廣州,510300)

藍(lán)圓鲹(Decapterusmaruadsi),鱸形目鲹科圓鲹屬,是我國(guó)重要的海洋經(jīng)濟(jì)魚(yú)類之一[1],其產(chǎn)量大、分布廣、蛋白質(zhì)含量高、營(yíng)養(yǎng)豐富,是一種優(yōu)質(zhì)的海洋蛋白資源。目前,藍(lán)圓鲹主要以冰鮮及冷凍產(chǎn)品為主,部分用于生產(chǎn)飼料,其精深加工水平較低,亟需采用現(xiàn)代加工技術(shù)提升其高值化利用水平。

生物活性肽是對(duì)生物體的生命活動(dòng)有益或具有特定生理作用的肽類化合物,已被證明具有抗腫瘤、抗衰老、抗氧化、降血脂、降血壓、降血糖等多種生物活性[2-7]。生物活性肽具有免疫原性弱、安全性高、易被人體吸收及加工性能好等特點(diǎn),被廣泛應(yīng)用于化妝品、醫(yī)藥和保健食品等多個(gè)領(lǐng)域。黃嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XOD)抑制肽是一種能夠在體內(nèi)或體外抑制XOD活性,從而減少尿酸生成量的生物活性肽。XOD抑制肽可降低尿酸的生成,對(duì)治療高尿酸血癥和痛風(fēng)疾病具有潛在的應(yīng)用意義。目前,已有研究以脫脂核桃粉[8]、水稻[9]、羅非魚(yú)皮[10]、鰹魚(yú)[11-12]、鯊魚(yú)軟骨[13]、金槍魚(yú)[14]等動(dòng)植物蛋白為原料制備出具有XOD抑制活性的多肽,而對(duì)于藍(lán)圓鲹蛋白多肽的XOD抑制活性研究尚未見(jiàn)報(bào)道。

XOD(EC 1.17.3.2)是尿酸合成過(guò)程中的關(guān)鍵酶。XOD由2個(gè)對(duì)稱的亞基組成,每個(gè)亞基包含1個(gè)鉬蝶呤中心、1個(gè)黃素腺嘌呤二核苷酸(flavin adenine dinucleotide,FAD)和2個(gè)鐵-硫中心。在嘌呤代謝的過(guò)程中,電子依次通過(guò)XOD的鉬蝶呤,鐵-硫中心和FAD 3個(gè)氧化還原中心,催化次黃嘌呤生成黃嘌呤,進(jìn)而生成尿酸。因此,XOD抑制活性是評(píng)價(jià)降尿酸效果的重要指標(biāo)[15]。本研究以藍(lán)圓鲹為原料,采用酶解法制備XOD抑制肽,并對(duì)其制備工藝進(jìn)行了優(yōu)化。同時(shí)基于探究金屬離子作為輔基在酶活性中心發(fā)揮的作用,對(duì)酶解產(chǎn)物的金屬離子結(jié)合活性進(jìn)行了測(cè)定,并用紅外及紫外光譜對(duì)其結(jié)合位點(diǎn)進(jìn)行分析。旨在為藍(lán)圓鲹的高值化利用提供新的思路,并為藍(lán)圓鲹XOD抑制肽的開(kāi)發(fā)及其降尿酸活性研究提供重要參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

冰鮮藍(lán)圓鲹購(gòu)于廣州華潤(rùn)萬(wàn)家超市,去除頭尾、骨和內(nèi)臟,取魚(yú)肉,洗凈瀝干,絞成肉糜,于-20 ℃凍藏備用。

胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、堿性蛋白酶、復(fù)合蛋白酶,酷爾化學(xué)科技有限公司；黃嘌呤、XOD,美國(guó)Sigma公司；還原型谷胱甘肽(307.3 Da)、氧化型L-谷胱甘肽(612.63 Da)、桿菌肽(1 422.69 Da)、抑肽酶(6 511.44 Da)、細(xì)胞色素C(12 400 Da),北京睿博興科生物技術(shù)有限公司；MgCl2、FeCl2·4H2O,上海源葉生物科技有限公司；CuSO4·5H2O,天津市百世化工有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

電子天平,德國(guó)Sartorius公司；超純水系統(tǒng),美國(guó)Millipore公司；恒溫水浴鍋,上海森信實(shí)驗(yàn)儀器廠有限公司；高速冷凍離心機(jī),德國(guó)Sigma公司；冷凍干燥機(jī),德國(guó)Christ公司；凱氏定氮儀,丹麥FOSS公司；水浴恒溫振蕩器,金壇市精達(dá)儀器制造廠；自動(dòng)電位滴定儀,瑞士Metrohm公司；SUNRISE酶標(biāo)儀,瑞士TECAN公司；紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)、紅外光譜儀、高效液相色譜儀,日本島津公司；C18分析柱(4.6 mm×150 mm,2.7 μm)、電感耦合等離子體質(zhì)譜,美國(guó)Agilent 公司；高壓高通量微波消解系統(tǒng),美國(guó)CEM公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 藍(lán)圓鰺XOD抑制肽制備中酶的篩選

以藍(lán)圓鲹魚(yú)肉為原料,以1∶2(g∶mL)的料液比加入去離子水,加酶量0.3%(質(zhì)量分?jǐn)?shù)),選用胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、復(fù)合蛋白酶及堿性蛋白酶分別在其各自最適pH和溫度條件下酶解,水浴振蕩不同時(shí)間,酶解結(jié)束后,沸水浴滅酶15 min,冷卻后于4 ℃、8 000 r/min離心20 min,收集上清液經(jīng)抽濾、冷凍干燥后即得酶解物,放置在-20 ℃貯藏。5種蛋白酶的酶解條件及添加量見(jiàn)表1。然后取不同酶解條件的凍干肽粉,配制為質(zhì)量濃度為15 g/L的水溶液,分別進(jìn)行體外XOD抑制活性測(cè)定。

表1 不同蛋白酶的酶解條件及添加量

1.3.2 單因素試驗(yàn)

按照 1.3.1節(jié)方法對(duì)藍(lán)圓鲹魚(yú)肉進(jìn)行酶解,以體外XOD抑制活性為主要指標(biāo),水解度為輔助指標(biāo),分別考察中性蛋白酶的酶解時(shí)間(2、3、4、5、6 h)、酶解 pH(6.0、6.5、7.0、7.5)、料液比(1∶1、1∶2、1∶3、1∶4、1∶5)(g∶mL)以及酶添加量(質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%)對(duì)該指標(biāo)的影響。固定條件：酶解時(shí)間6 h、溫度50 ℃、pH 7.0、加酶量0.3%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))、料液比1∶2(g∶mL),酶解時(shí)每次改變其中1個(gè)因素,其他因素不變。

1.3.3 水解度的測(cè)定

采用凱氏定氮法測(cè)定藍(lán)圓鲹肉中總氮質(zhì)量m1(g),電位滴定法測(cè)定酶解液中氨態(tài)氮質(zhì)量m2(g),水解度的計(jì)算如公式(1)所示：

(1)

1.3.4 酶解物體外XOD抑制活性測(cè)定

參照WU等[16]的方法,并稍作修改。在96酶標(biāo)儀檢測(cè)板中分別加入50 μL待測(cè)樣品(15 g/L)或50 μL磷酸緩沖鹽(20 mmol/L,pH 7.5),50 μL 0.05 U/mL的XOD,37 ℃孵育30 min,加入150 μL 0.42 mmol/L黃嘌呤溶液,此時(shí)酶促反應(yīng)被啟動(dòng),持續(xù)記錄反應(yīng)體系在290 nm波長(zhǎng)處吸光值,根據(jù)酶解物XOD抑制情況適當(dāng)調(diào)整檢測(cè)時(shí)間。每個(gè)樣品做3個(gè)平行,以PBS緩沖液做空白對(duì)照,XOD抑制活性的計(jì)算如公式(2)所示：

(2)

式中：V0,酶促反應(yīng)體系的初始反應(yīng)速率；VS,樣品存在時(shí)酶促反應(yīng)體系的初始速率。

1.3.5 正交實(shí)驗(yàn)

在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,以XOD抑制活性為響應(yīng)值,設(shè)定時(shí)間(A)、pH(B)及酶添加量(C)的變化范圍及中心點(diǎn)值,采用 L9(34)正交實(shí)驗(yàn)進(jìn)行酶解條件的優(yōu)化,因素水平設(shè)計(jì)見(jiàn)表2。

表2 正交試驗(yàn)因素水平設(shè)計(jì)

1.3.6 酶解物結(jié)合金屬離子活性的測(cè)定

參考楊伊然等[17]的方法并加以修改,將藍(lán)圓鲹多肽(round scad peptides,RSPs)分別與Fe2+、Mg2+、Cu2+3種礦物離子在37 ℃,中性條件下結(jié)合40 min。結(jié)合后將溶液全部移入透析袋(截留分子質(zhì)量100 Da),每隔4 h換1次水,共透析24 h。透析結(jié)束后記錄膨脹后體積v,取5 mL透析后溶液于消化管內(nèi),加10 mL濃硝酸進(jìn)行微波消解。將消解后溶液用超純水定容至50 mL,用電感耦合等離子體質(zhì)譜檢測(cè)金屬離子質(zhì)量濃度c,礦物離子與多肽的結(jié)合率計(jì)算如公式(3)所示：

(3)

式中：c,檢測(cè)出金屬離子的質(zhì)量濃度,mg/L；v,膨脹后體積,mL；n,稀釋倍數(shù)；m,金屬離子總添加量,mg。

1.3.7 藍(lán)圓鲹XOD抑制肽分子質(zhì)量測(cè)定

采用凝膠色譜法測(cè)定其分子質(zhì)量(molecular weight,Mw)分布。取不同酶解時(shí)間藍(lán)圓鲹降尿酸活性肽凍干粉,用含有乙腈和水的流動(dòng)相配制成2 g/L溶液。流動(dòng)相A：體積分?jǐn)?shù)0.1%三氟乙酸的乙腈；流動(dòng)相B：體積分?jǐn)?shù)0.1%三氟乙酸的超純水；洗脫比例20%(A)∶80%(B),色譜柱：TSK-GEL?G2 000SWXL(7.8 mm×300 mm),流速0.5 mL/min,進(jìn)樣體積10 μL,檢測(cè)波長(zhǎng)214 nm,標(biāo)準(zhǔn)肽樣品：還原性谷胱甘肽(Mw307.3)、L-氧化型谷胱甘肽(Mw612.63)、桿菌肽(Mw1 422.69)、細(xì)胞色素C(Mw12 400),按一定比例混合后,過(guò)0.22 μm微孔濾膜,以相對(duì)分子質(zhì)量的對(duì)數(shù)(lgMw)對(duì)保留時(shí)間(t)作圖,得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：lgMw=-0.221 2t+6.885 6(R2=0.996 4)。

1.3.8 氨基酸分析

按GB/T 5009.124—2016《食品中氨基酸的測(cè)定》中的酸水解法測(cè)定18種基本氨基酸。

1.3.9 RSPs與RSPs-Fe2+結(jié)合物的紫外光譜掃描

為了研究肽和鐵的結(jié)合方式,對(duì)RSPs和RSPs-Fe2+進(jìn)行紫外光譜掃描分析。參考SUN等[18]的方法并稍加修改,將凍干肽粉RSPs和RSPs-Fe2+用去離子水配制成0.1 g/L的溶液。在測(cè)量樣品之前,用去離子水對(duì)紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)進(jìn)行空白校準(zhǔn),在波長(zhǎng)190～400 nm進(jìn)行紫外光譜掃描。

1.3.10 RSPs及RSPs-Fe2+結(jié)合物的紅外光譜掃描

采用壓片法測(cè)定RSPs和RSPs-Fe2+結(jié)合物的紅外光譜,掃描范圍為4 000～400 cm-1。

2 結(jié)果與分析

2.1 蛋白酶的篩選

用5種蛋白酶分別對(duì)藍(lán)圓鲹魚(yú)肉進(jìn)行酶解。由圖1-a可知,經(jīng)胰酶酶解6 h的產(chǎn)物水解度最高,達(dá)到20.41%,中性蛋白酶次之(15.3%),這可能是由不同蛋白酶的特異性酶切位點(diǎn)和作用方式引起的。藍(lán)圓鲹富含Asp、Lys、Glu、Leu等氨基酸,胰蛋白酶及中性蛋白酶可以特異性識(shí)別這些結(jié)合位點(diǎn)。不同蛋白酶酶解得到的肽段不同,導(dǎo)致其XOD抑制活性有差異。由圖1-b可知,中性蛋白酶在6 h時(shí)酶解產(chǎn)物表現(xiàn)出最佳的XOD抑制活性,達(dá)62.79%,堿性蛋白酶6 h酶解物次之(60.21%)。6 h后水解度及XOD抑制活性均有所降低。該結(jié)果與鄒琳[11]的研究結(jié)果相一致,其通過(guò)5種蛋白酶對(duì)鰹魚(yú)蛋白進(jìn)行酶解,發(fā)現(xiàn)中性蛋白酶酶解產(chǎn)物的XOD抑制活性最高,達(dá)到了94.99%。此外,趙謀明等[19]研究發(fā)現(xiàn)中性蛋白酶為酶解法制備秋刀魚(yú)XOD抑制肽的最佳用酶。因此,選擇中性蛋白酶做進(jìn)一步的制備工藝優(yōu)化。

a-水解度；b-XOD抑制活性

2.2 單因素試驗(yàn)結(jié)果分析

pH會(huì)改變底物和輔酶的解離程度,也會(huì)影響酶活性中心的相關(guān)基團(tuán),從而影響酶解反應(yīng)[11,20]。由圖2-a可知,pH為6～7.5時(shí),水解度呈現(xiàn)先增大后減小的趨勢(shì)。當(dāng)pH 7.0時(shí),水解度達(dá)到最大值17.26%,XOD抑制活性達(dá)到59.01%。綜合考慮水解度及XOD抑制活性,選定pH 6.5～7.5為較好酶解pH條件。由圖2-b可知,酶解物的水解度和XOD抑制活性隨著酶解時(shí)間的增長(zhǎng)呈現(xiàn)先增大后減小的趨勢(shì)。在酶解時(shí)間達(dá)到6 h時(shí),酶解物的水解度與XOD抑制活性均達(dá)到最大值,分別為18.02%、61.82%,隨后有所降低。因此,選擇5～7 h為藍(lán)圓鲹較佳酶解時(shí)間。如圖2-c所示,水解度在料液比為1∶2(g∶mL)時(shí)達(dá)到最大(19.20%),此時(shí)的XOD抑制活性也達(dá)到最大(61.43%)。因此,選擇料液比1∶2(g∶mL)為酶解最適料液比。由圖2-d可知,隨著加酶量的增加,藍(lán)圓鲹魚(yú)肉蛋白的水解度逐漸增大,在加酶量為0.5%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))時(shí),水解度達(dá)到最大值(19.2%)。XOD抑制活性呈先增大后減小的趨勢(shì),當(dāng)加酶量為0.3%(質(zhì)量分?jǐn)?shù)),XOD抑制活性達(dá)最大值(63.05%)。因此,選擇0.2%～0.4%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))為藍(lán)圓鲹酶解較佳加酶量。

a-pH；b-時(shí)間；c-料液比；d-加酶量

2.3 正交試驗(yàn)

根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果,按1.3.5的方法進(jìn)行正交試驗(yàn)。以XOD抑制活性為評(píng)價(jià)指標(biāo),正交試驗(yàn)結(jié)果如表3所示。極值R顯示,各因素在試驗(yàn)范圍內(nèi)對(duì)XOD抑制活性的影響主次順序?yàn)槊柑砑恿?C)>酶解pH(B)>酶解時(shí)間(A);方差分析結(jié)果表明,所選因素中酶解pH(B)和酶添加量(C)對(duì)XOD抑制活性的影響極其顯著,因素酶解時(shí)間(A)對(duì)XOD抑制活性具有顯著影響(表4)。得出最佳酶解條件A2B2C2,即酶解時(shí)間6 h,酶解pH 7.0,加酶量0.3%(質(zhì)量分?jǐn)?shù)),此條件下酶解產(chǎn)物的XOD抑制活性達(dá)64.03%。

表3 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果

表4 正交試驗(yàn)方差分析結(jié)果

2.4 藍(lán)圓鲹酶解物與不同金屬離子的結(jié)合活性

由于金屬離子常作為輔基在酶活性中心發(fā)揮作用,為此對(duì)酶解物的金屬離子結(jié)合活性進(jìn)行了測(cè)定。由圖3可知,對(duì)比不同酶解時(shí)間藍(lán)圓鲹酶解物的Fe2+、Mg2+和Cu2+結(jié)合能力,發(fā)現(xiàn)Fe2+結(jié)合能力最高,約為相同條件下Mg2+和Cu2+結(jié)合活性的3倍。其中6 h酶解產(chǎn)物RSPs的Fe2+結(jié)合率達(dá)到了61.56%,明顯高于Mg2+結(jié)合率(13.99%)和Cu2+結(jié)合率(17.12%)。該結(jié)果表明RSPs具有較強(qiáng)的Fe2+結(jié)合能力。結(jié)合正交試驗(yàn)結(jié)果,推測(cè)RSPs的較高XOD抑制活性可能與酶活性中心的鐵元素存在一定關(guān)聯(lián)。王婷婷[21]研究發(fā)現(xiàn)藍(lán)圓鲹魚(yú)肉經(jīng)中性蛋白酶和胰蛋白酶復(fù)配酶解5 h,表現(xiàn)出最高的Fe2+結(jié)合率(72.91%)。

圖3 酶解時(shí)間對(duì)藍(lán)圓鲹蛋白酶解物金屬離子結(jié)合率的影響

2.5 RSPs的分子質(zhì)量分布

利用高效液相色譜法測(cè)定RSPs分子質(zhì)量分布情況。圖4-a為RSPs的高效體積排阻色譜(high perfomance size exclusion chromatography,HPSEC)圖譜,其分子質(zhì)量分布情況如圖4-b所示,隨著酶解時(shí)間的延長(zhǎng),藍(lán)圓鲹酶解物中Mw>3 000 Da的多肽組分逐漸減少,Mw<1 000 Da的多肽組分逐漸增多。其中,6 h酶解產(chǎn)物RSPs中Mw>3 000 Da的組分僅占0.58%,Mw<1 000 Da的組分高達(dá)92.35%,由此說(shuō)明,小分子肽(<1 000 Da)可能具有更強(qiáng)的XOD抑制活性。何偉煒[22]研究發(fā)現(xiàn)多肽組分的XOD抑制活性與其中Mw<1 000 Da 的多肽含量正相關(guān)。LI等[23]從核桃粉中鑒定出2個(gè)Mw<1 000 Da的肽段WPPKN(640.8 Da)、ADIYTE(710.7 Da),均表現(xiàn)較高的XOD抑制活性。MUROTA等[13]從鯊魚(yú)軟骨中鑒定出Mw686.64 Da的五肽,其XOD抑制活性高于其粗酶解物。同時(shí),在一定范圍內(nèi),肽的分子質(zhì)量分布與其金屬離子結(jié)合活性有關(guān)。VATTEM等[24]用蛋清蛋白制備的鐵結(jié)合肽的Mw<1 000 Da。TORRES-FUENTES等[25]發(fā)現(xiàn)Mw<500 Da的鷹嘴豆蛋白衍生的水解產(chǎn)物亞組分比>500 Da的亞組分具有更高的Fe2+結(jié)合活性。

a-分子質(zhì)量HPSEC圖譜；b-分子質(zhì)量分布

2.6 RSPs氨基酸含量分析

為了研究氨基酸組成與RSPs的XOD抑制活性及Fe2+結(jié)合活性的關(guān)系,對(duì)藍(lán)圓鲹魚(yú)肉及RSPs的氨基酸進(jìn)行對(duì)比分析。由表5可知,RSPs中疏水性氨基酸(Ala、Val、Leu、Ile、Met、Trp和Phe)含量較高,達(dá)31.64%。何偉煒[22]研究發(fā)現(xiàn),存在疏水性氨基酸的多肽更容易通過(guò)疏水相互作用進(jìn)入XOD的活性中心,從而發(fā)揮抑制作用。李宇娟[12]研究發(fā)現(xiàn),疏水性氨基酸殘基之間的疏水相互作用更有利于多肽和XOD的結(jié)合。同時(shí),氨基酸組成也會(huì)影響多肽的金屬離子結(jié)合活性[26]。有研究表明,金屬離子更容易與富氧或富氮基團(tuán)結(jié)合,如磷酸基的氧和Asp和Glu的羧基等富氧基團(tuán),以及His的咪唑基、Arg、Asn中的富氮基團(tuán)[27]。由表5中氨基酸分析結(jié)果可知,RSPs中Glu、Asp、Arg、His含量在總氨基酸含量中占比較大,有利于發(fā)揮更好的Fe2+結(jié)合活性。SUN等[18]從海參卵子水解物中分離出Fe2+結(jié)合活性肽,其Asp、Arg及His的含量與Fe2+結(jié)合活性呈正相關(guān)。TORRES-FUENTES等[25]研究發(fā)現(xiàn),鷹嘴豆蛋白中多肽與鐵的結(jié)合活性與多肽中His有關(guān)。CAETANO-SILVA等[28]從乳清蛋白肽的序列中發(fā)現(xiàn)了高含量的Asp和Glu殘基,這2個(gè)殘基是主要的鐵結(jié)合位點(diǎn)。綜上說(shuō)明,RSPs的氨基酸組成有利于其發(fā)揮良好的XOD抑制活性及Fe2+結(jié)合活性。

表5 藍(lán)圓鲹魚(yú)肉與RSPs中的氨基酸組成分析

2.7 RSPs及RSPs-Fe2+結(jié)合物的紫外光譜分析

多肽在紫外光210 nm附近有其最強(qiáng)特征吸收峰,多肽在與金屬離子形成結(jié)合物的過(guò)程中,結(jié)合物中的配合體內(nèi)部電子的躍遷與游離配位體內(nèi)部電子的躍遷時(shí)的能量不同,從而導(dǎo)致其紫外吸收峰的移動(dòng)或消失,或出現(xiàn)新的吸收峰[18]。由圖5可知,RSPs和RSPs-Fe2+的紫外吸收光譜具有明顯的變化,RSPs與Fe2+結(jié)合后,紫外最大吸收峰從190 nm紅移到193 nm,且吸收強(qiáng)度增加。該結(jié)果與紀(jì)曉雯等[29]的研究結(jié)果相似。

圖5 RSPs及RSPs-Fe2+結(jié)合物紫外吸收光譜圖

2.8 RSPs及RSPs-Fe2+結(jié)合物的紅外光譜分析

圖6 RSPs及RSPs-Fe2+結(jié)合物紅外吸收光譜圖

3 結(jié)論

本文以藍(lán)圓鲹為原料,選用5種蛋白酶對(duì)其進(jìn)行水解,以酶解產(chǎn)物的XOD抑制活性為評(píng)價(jià)指標(biāo),篩選出中性蛋白酶為制備藍(lán)圓鲹XOD抑制肽的最適酶類,并探明其最佳酶解條件為：加酶量0.3%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))、料液比1∶2(g∶mL)、pH 7.0、酶解溫度50 ℃、酶解時(shí)間6 h。在此條件下獲得的多肽RSPs的XOD抑制活性達(dá)64.03%,且表現(xiàn)出較高的Fe2+結(jié)合活性(61.56%)。通過(guò)分子質(zhì)量分析,具有較高XOD抑制活性的RSPs的分子質(zhì)量較小,其Mw<1 000 Da的組分高達(dá)92.35%,且RSPs中與XOD抑制活性有關(guān)的疏水性氨基酸以及與金屬離子結(jié)合活性相關(guān)的氨基酸含量較高。此外,對(duì)RSPs和RSPs-Fe2+結(jié)合物進(jìn)行紫外光譜和紅外光譜掃描分析,結(jié)果表明RSPs與Fe2+的結(jié)合位點(diǎn)可能是RSPs的酰胺鍵、氨基的N原子與羧基的O原子。本研究可為藍(lán)圓鲹黃嘌呤氧化酶抑制肽的制備及開(kāi)發(fā)提供參考。