劉曉飛，侯艷，馬京求，戚月娜，趙小紅，張娜

（哈爾濱商業(yè)大學(xué)食品工程學(xué)院，黑龍江哈爾濱150028）

糙米在水分充足、光照適當(dāng)?shù)沫h(huán)境下，便可萌芽。萌芽使糙米內(nèi)部大量的酶被喚醒釋放，并在萌芽過(guò)程中營(yíng)養(yǎng)素由結(jié)合態(tài)變?yōu)橛坞x態(tài)[1]，萌芽后的糙米包含的營(yíng)養(yǎng)成分較萌芽前有所提高[2]，還會(huì)產(chǎn)生大量的γ-氨基丁酸[3]，γ-氨基丁酸可以緩解動(dòng)脈硬化以及改善肝功能等[4]。同時(shí)，發(fā)芽糙米內(nèi)部還具有多種抗氧化活性物質(zhì)，如多酚類物質(zhì)、黃酮類物質(zhì)、多糖、糖蛋白[5]等。目前，水、有機(jī)溶劑以及有機(jī)溶劑與水等的混合體系被廣泛應(yīng)用于提取多酚等抗氧化物質(zhì)[6]，因此可選擇水、甲醇、乙醇、丙酮等溶劑提取多酚類物質(zhì)，這些溶劑亦可有效提取黃酮類物質(zhì)。李婧雯等[7]采用不同極性的6種溶劑對(duì)蒲公英進(jìn)行提取，水提取物中多糖含量最高，乙醇的提取物中總黃酮和總酚含量是最高的，甲醇的提取物中皂苷含量最高。崔泰花等[8]采用不同極性的8種溶劑對(duì)桔梗進(jìn)行提取，結(jié)果顯示總酚在蒸餾水提取物中含量最高，石油醚的提取物中總黃酮、麥角甾醇含量是最高的，乙醇的提取物中去芹糖桔梗皂苷D含量是最高的，桔梗皂苷D僅在蒸餾水提取物中檢出。

本試驗(yàn)分別以蒸餾水、甲醇、無(wú)水乙醇、丙酮、石油醚制備發(fā)芽糙米提取物，采用DPPH自由基清除率、羥基自由基清除率、超氧陰離子自由基清除率和鐵離子還原能力為指標(biāo)進(jìn)行抗氧化活性評(píng)價(jià)，并測(cè)定各發(fā)芽糙米提取物中總酚、總黃酮、γ-氨基丁酸、糖蛋白和多糖含量，并考察其對(duì)抗氧化活性的影響。對(duì)發(fā)芽糙米活性功能評(píng)估及開發(fā)應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

糙米：黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院；甲醇、無(wú)水乙醇、丙酮、石油醚、抗壞血酸、氫氧化鈉、濃硫酸、硝酸鋁、無(wú)水碳酸鈉（分析純）：南京生物化學(xué)試劑研究中心。

1.2 儀器與設(shè)備

M288479高速萬(wàn)能粉碎機(jī)：北京東方德教育科技有限公司；SHZ-B水浴恒溫振蕩器：天津市泰斯特儀器儀表有限公司；TGL-16G-B臺(tái)式高速離心機(jī)：閩南星科科學(xué)儀器廠；RE-301旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器：上海保玲儀器設(shè)備有限公司；721E紫外可見分光光度計(jì)：上海光譜儀器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 待測(cè)樣品的提取

1.3.1.1 糙米發(fā)芽

選用胚完好且完整的糙米，用0.1 mol/L次氯酸鈉溶液浸泡1 h，用冷卻的開水清洗3次，4℃避光的條件下，將糙米浸泡在無(wú)菌水中12 h。取出糙米后放置在潮濕的環(huán)境中在20℃條件下培養(yǎng)過(guò)夜。去除掉沒有發(fā)芽的糙米后置于干燥箱內(nèi)干燥[9]。

1.3.1.2 發(fā)芽糙米提取物的制備

將干燥好的發(fā)芽糙米粉碎，過(guò)80目篩。精確稱量5.0 g發(fā)芽糙米粉5份，按照1∶20(g/mL)料液比分別與蒸餾水、甲醇、無(wú)水乙醇、丙酮和石油醚混合，65℃水浴振蕩90 min，4 200 r/min離心10 min，沉淀物按相同條件再提取1次，合并上清液、過(guò)濾、相應(yīng)溶劑定容、蒸發(fā)濃縮，得到最終提取物。將經(jīng)不同極性溶劑提取的發(fā)芽糙米提取物分別稀釋 0、2.5、5.0、7.5、10.0 倍，備用。

1.3.2 DPPH自由基清除率測(cè)定

取不同稀釋倍數(shù)的各提取物0.5 mL，添加0.1 mmol/L DPPH溶液（取0.039 4 g DPPH溶于1 L無(wú)水乙醇中）2.5 mL，室溫25℃放置于避光處?？瞻讓?duì)照為無(wú)水乙醇，陽(yáng)性對(duì)照為抗壞血酸[10]。517 nm處測(cè)吸光度值。計(jì)算公式如下。

式中：E1為DPPH自由基清除率，%；A0為空白組吸光度值；A1為待測(cè)樣品吸光度值。

1.3.3 超氧陰離子自由基清除率測(cè)定

取不同稀釋倍數(shù)的各提取物0.1 mL，添加0.1 mol/L pH 8.2 的三羥甲基氨基甲烷（tromethamine，Tris）緩沖溶液2.8 mL，混勻。25℃水浴10 min，加入3 mmol/L沒食子酚溶液0.1 mL，每30 s于325 nm波長(zhǎng)處測(cè)定一次吸光度值，連續(xù)測(cè)定5 min，記錄數(shù)據(jù)，繪制其回歸方程，空白對(duì)照為蒸餾水，陽(yáng)性對(duì)照為抗壞血酸[11]。計(jì)算公式如下。

式中：E2為超氧陰離子自由基清除率，%；Va為蒸餾水斜率；Vb為樣品斜率。

1.3.4 羥基自由基清除率測(cè)定

0.75 mmol/L的鄰二氮菲無(wú)水乙醇溶液1.0 mL，依次添加pH 7.4 0.2 mol/L磷酸緩沖液2.0 mL、不同稀釋倍數(shù)各提取物1 mL，充分振蕩。再添加1.0 mL 0.75 mmol/L硫酸亞鐵溶液，振蕩均勻，最后添加1.0 mL 1%的過(guò)氧化氫溶液。37℃水浴1 h，510 nm測(cè)吸光度值，空白對(duì)照為蒸餾水，陽(yáng)性對(duì)照為抗壞血酸[12]。計(jì)算公式如下。

式中：E3為羥基自由基清除率，%；A為蒸餾水替代樣品的吸光度；B為樣品反應(yīng)后的吸光度；C為蒸餾水代替H2O2的吸光度。

1.3.5 鐵離子還原能力測(cè)定

取不同稀釋倍數(shù)的各提取物2.0 mL，添加0.2 mol/L pH 6.6磷酸緩沖溶液2.0 mL，1%鐵氰化鉀溶液2.0 mL。50℃水浴20 min，添加2.0 mL 10%三氯乙酸溶液，振蕩，3 000 r/min離心5 min，取上清液2.0 mL，依次加入0.1%的三氯化鐵溶液0.4 mL，蒸餾水2 mL，50℃水浴10 min；當(dāng)溶液由黃變藍(lán)時(shí)，700 nm處對(duì)其吸光度值進(jìn)行測(cè)定，空白對(duì)照為蒸餾水，陽(yáng)性對(duì)照為抗壞血酸[13]。

1.3.6 總酚含量的測(cè)定

采用Folin-Ciocalteu法測(cè)定各提取物中的總酚含量[14]。精準(zhǔn)稱取沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)樣品10.0 mg，用50%甲醇配成2.5 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)液。準(zhǔn)確吸取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL標(biāo)準(zhǔn)液于試管，50%甲醇定容至1.0 mL。吸取不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)液各0.1 mL，加入50%的Folin-Ciocalteu試劑1.0 mL，充分振蕩1.0 min后加入0.2 g/L的碳酸鈉溶液2.0 mL，再添加蒸餾水至5.0 mL，充分混勻后在避光室溫25℃條件下放置2.0 h，于760 nm測(cè)其吸光度值。記錄數(shù)據(jù)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得到?jīng)]食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為y=1.458 4x+0.021 3，R2=0.997 7。

取不同稀釋倍數(shù)的各提取物0.1 mL，按照上述方法測(cè)定其吸光度值，以沒食子酸為當(dāng)量計(jì)算各提取物中總酚含量。

1.3.7 總黃酮含量的測(cè)定

采用亞硝酸鈉-硝酸鋁法測(cè)定各提取物中的總黃酮含量[15]。精準(zhǔn)稱量蘆丁標(biāo)準(zhǔn)樣品17.5 mg，用50%甲醇配制成2.5 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)液。準(zhǔn)確吸取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL標(biāo)準(zhǔn)液移入試管，添加5%亞硝酸鈉溶液0.15 mL、再添加10%硝酸鋁溶液0.15 mL，分別靜置6 min，加入2 mL 4%氫氧化鈉溶液，添加蒸餾水至5.0 mL，待測(cè)液混勻后放置3 min，于508 nm處測(cè)定吸光度值。記錄數(shù)據(jù)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得到蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為y=12.051x-0.007 1，R2=0.997 7。

取不同稀釋倍數(shù)的不同極性溶劑提取液0.5 mL，按照上述方法測(cè)定其吸光度，以蘆丁為當(dāng)量計(jì)算各提取物中總黃酮含量。

1.3.8 γ-氨基丁酸含量的測(cè)定

采用比色法測(cè)定各提取物中的γ-氨基丁酸含量[16]。準(zhǔn)確配制 0.04、0.10、0.25、0.50、1.00 mg/mL 的 γ-氨基丁酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，加入0.1 mol/L四硼酸鈉緩沖液0.8 mL，6%重蒸苯酚液2.0 mL，混勻后添加1.0 mL 7.5%的次氯酸鈉溶液，充分振蕩。沸水浴10 min，隨即冰浴5 min，待溶液顯現(xiàn)藍(lán)綠色，隨即添加2.0 mL 60%乙醇溶液，于645 nm處測(cè)定其吸光度值。記錄數(shù)據(jù)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得到γ-氨基丁酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為 y=0.907 7x-0.011，R2=0.999 2。

取不同稀釋倍數(shù)的各提取物1.0 mL，按照上述方法測(cè)定吸光度，計(jì)算各提取物中γ-氨基丁酸含量。

1.3.9 糖蛋白含量的測(cè)定

采用考馬斯亮藍(lán)檢測(cè)法分析各提取物中的糖蛋白含量。配制1.0 mg/mL的牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別吸取 5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、11.0 mL 用蒸餾水定容至100 mL，吸取稀釋液各1.0 mL，添加5.0 mL考馬斯亮藍(lán)溶液，振蕩后靜置2 min，在595 nm測(cè)其吸光度，空白對(duì)照為蒸餾水。記錄數(shù)據(jù)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得到牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為y=0.077 9x+0.083 1，R2=0.992 4。

取不同稀釋倍數(shù)的不同極性溶劑提取液1.0 mL，按上述方法測(cè)其吸光度，計(jì)算各提取物中糖蛋白含量。

1.3.10 多糖含量的測(cè)定

采用苯酚-硫酸檢測(cè)法分析各提取物中的多糖含量。精確配制1.0 mg/mL葡萄糖溶液100 mL，精確吸取10 mL，蒸餾水定容到250 mL，即為葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液，分別移取 0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8 mL，用蒸餾水定容到2.0mL，添加1.0mL6%苯酚溶液、5.0mL濃硫酸。充分振蕩，25℃冷卻20 min，490 nm測(cè)其吸光度，空白對(duì)照為蒸餾水。記錄數(shù)據(jù)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得到葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為y=0.328 0x-0.018 5，R2=0.994 4。

取不同稀釋倍數(shù)的各提取物1.0 mL，按照上述方法測(cè)其吸光度，計(jì)算各提取物中多糖含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 DPPH自由基清除能力

不同極性溶劑發(fā)芽糙米提取物的DPPH自由基清除率如圖1所示。

圖1 不同極性溶劑提取物對(duì)DPPH自由基清除率的影響Fig.1 Effects of different polar solvent extracts on DPPH free radical scavenging rate

由圖1可知，不同極性溶劑發(fā)芽糙米提取物對(duì)DPPH自由基的清除率均小于抗壞血酸，但相差不大。隨著提取物稀釋倍數(shù)的增大，溶液內(nèi)的抗氧化活性物質(zhì)含量越少，因此所有提取物對(duì)DPPH自由基清除能力均變?nèi)?。整體上各提取物對(duì)DPPH自由基的清除能力大小依次為蒸餾水>丙酮>無(wú)水乙醇>甲醇>石油醚。李現(xiàn)日等[17]發(fā)現(xiàn)：當(dāng)金花葵花提取物的濃度相同時(shí)，不同的極性溶劑提取物DPPH自由基清除能力順序依次為正丁醇＞無(wú)水乙醇＞石油醚＞水。這幾種溶劑的極性強(qiáng)弱為水>甲醇>無(wú)水乙醇>丙酮>正丁醇>石油醚，由此可知提取溶劑的極性對(duì)提取物的DPPH自由基清除能力并無(wú)太大的影響。而Sepahpour等[18]研究姜黃、咖喱葉和火炬姜檸檬草發(fā)現(xiàn)，蒸餾水提取物的抗氧化能力低于其它極性溶劑提取物，這與本試驗(yàn)結(jié)果差異較大，可能是蒸餾水更適于發(fā)芽糙米中抗氧化物質(zhì)的提取。

2.2 超氧陰離子自由基清除能力

不同極性溶劑發(fā)芽糙米提取物對(duì)超氧陰離子自由基清除率的影響如圖2所示。

圖2 不同極性溶劑提取物對(duì)超氧陰離子自由基清除率的影響Fig.2 Effects of different of polar solvent extracts on superoxide anion radical scavenging rate

由圖2可知，不同極性溶劑發(fā)芽糙米提取物對(duì)超氧陰離子自由基的清除率均低于抗壞血酸，且相差較大。其中蒸餾水提取物與無(wú)水乙醇提取物的清除率隨提取物稀釋倍數(shù)的增加呈陡峭性下降趨勢(shì)，而甲醇提取物的清除效果一直比其它極性溶劑提取物差，且隨提取物稀釋倍數(shù)的增大呈平緩型下降趨勢(shì)。隨著提取物稀釋倍數(shù)的增大，所有提取物超氧陰離子自由基清除率均下降。此現(xiàn)象的出現(xiàn)，可能是由于極性溶劑濃度對(duì)發(fā)芽糙米中抗氧化物質(zhì)的提取量有影響。整體上各提取物超氧陰離子自由基清除能力強(qiáng)弱順序?yàn)闊o(wú)水乙醇>丙酮>石油醚>蒸餾水>甲醇。郭剛軍等[19]發(fā)現(xiàn)不同溶劑普洱茶的提取物對(duì)超氧陰離子自由基清除的能力強(qiáng)弱依次為抗壞血酸>水>正丁醇>氯仿>乙醇，而幾種溶劑的極性強(qiáng)弱為水>甲醇>乙醇>丙酮>正丁醇>氯仿>石油醚，可見提取溶劑的極性對(duì)提取物清除超氧陰離子自由基的能力無(wú)太大影響。而與本試驗(yàn)結(jié)果的差別可能是由于被提取物不同，且提取出的抗氧化活性物質(zhì)的種類及含量不同。

2.3 羥基自由基清除能力

不同極性溶劑發(fā)芽糙米提取物對(duì)羥基自由基清除能力的影響如圖3所示。

圖3 不同極性溶劑提取物對(duì)羥自由基清除率的影響Fig.3 Effects of different polar solvent extracts on hydroxyl radical scavenging rate

由圖3可知，不同極性溶劑發(fā)芽糙米提取物對(duì)羥基清除率均小于抗壞血酸，且相差較大。其中蒸餾水提取物的清除率隨提取物稀釋倍數(shù)增大呈陡峭性下降趨勢(shì)，而其它溶劑提取物的清除率隨提取物稀釋倍數(shù)增大而呈平緩性下降趨勢(shì)。甲醇提取物的清除率與丙酮提取物相差不大，但均小于其它提取物。隨著提取物稀釋倍數(shù)的增大，所有提取物的羥基自由基清除效果均變?nèi)?，可見各提取物的羥基自由基清除率受溶液濃度影響較大。同時(shí)，由于極性不同的溶劑從發(fā)芽糙米中提取出的抗氧化物質(zhì)數(shù)量也有區(qū)別，自由基的清除率也可能受此影響。各提取物對(duì)羥基自由基的清除率依次為蒸餾水>石油醚>無(wú)水乙醇>甲醇>丙酮。云成悅等[20]發(fā)現(xiàn)不同極性溶劑頭花蓼多酚的提取物對(duì)羥基自由基清除率的大小為水>石油醚>氯仿>正丁醇>乙酸乙酯，而溶劑的極性強(qiáng)弱為水>甲醇>乙醇>丙酮>正丁醇>乙酸乙酯>氯仿>石油醚，可知提取溶劑的極性對(duì)發(fā)芽糙米提取物的羥基自由基清除能力并無(wú)太大影響。而本試驗(yàn)結(jié)果順序與之并不一致，可能是因?yàn)椴煌奈镔|(zhì)本身所含有的抗氧化活性物質(zhì)的種類以及含量不同。

2.4 鐵離子還原能力

不同極性溶劑發(fā)芽糙米提取物對(duì)鐵離子還原能力的影響如圖4所示。

由圖4可知，不同極性溶劑發(fā)芽糙米提取物對(duì)鐵離子的還原能力均弱于抗壞血酸，且相差較大。蒸餾水提取物與甲醇提取物對(duì)鐵離子的還原能力隨提取物稀釋倍數(shù)的增加呈平緩性下降趨勢(shì)，其余提取物下降幅度更為平緩。因此各提取物對(duì)鐵離子的還原能力受溶液溶度的影響極大。Mehral等[21]也有類似的發(fā)現(xiàn)。無(wú)水乙醇提取物與丙酮提取物的鐵離子還原能力相差不大，但隨著提取溶液稀釋倍數(shù)的增加，丙酮提取物受濃度的影響比無(wú)水乙醇提取物大。整體上不同極性溶劑的發(fā)芽糙米提取物還原鐵離子能力的強(qiáng)弱依次為蒸餾水>甲醇>無(wú)水乙>丙酮>石油醚。曹清華等[22]發(fā)現(xiàn)經(jīng)不同極性溶劑提取的白術(shù)提取物鐵離子還原能力排序依次為抗壞血酸>乙酸乙酯>正丁醇>石油醚>水，溶劑的極性順序?yàn)樗?甲醇>乙醇>丙酮>正丁醇>乙酸乙酯>石油醚，由此可以發(fā)現(xiàn)溶液的極性對(duì)發(fā)芽糙米提取物的鐵離子還原能力并無(wú)太大的影響。而本試驗(yàn)結(jié)果順序與之不一致，可能是提取方式不一致，也可能是不同物質(zhì)本身所含的抗氧化活性物質(zhì)有所不同。

圖4 不同極性溶劑提取物對(duì)鐵離子還原能力的影響Fig.4 Effects of different of polar solvent extracts on iron ion reduction ability

2.5 不同溶劑提取物中活性物質(zhì)分析

2.5.1 蒸餾水提取物中活性物質(zhì)分析

蒸餾水提取物中各活性物質(zhì)含量如圖5所示。

圖5 蒸餾水提取物中各物質(zhì)含量Fig.5 Contents of each substance in distilled water extract

從圖5可以得到，發(fā)芽糙米蒸餾水提取物中各物質(zhì)含量大小的排序?yàn)樘堑鞍祝径嗵牵睛?氨基丁酸＞總黃酮＞總酚?？梢园l(fā)現(xiàn)蒸餾水適合用于發(fā)芽糙米內(nèi)部糖蛋白的提取。結(jié)合圖1、圖3、圖4結(jié)果，與其它極性溶劑提取物相比，蒸餾水提取物具有較高的DPPH自由基清除能力、羥基自由基清除能力和鐵離子還原能力?？赏茰y(cè)蒸餾水提取物中的糖蛋白與多糖起著主要的抗氧化作用，而γ-氨基丁酸、總酚和總黃酮起到的作用則較小。涂宗財(cái)?shù)萚23]采用不同極性的溶劑提取紅薯葉中的總酚，發(fā)現(xiàn)水提液具有最高的總酚得率。董怡等[24]研究溪黃草根的不同極性溶劑提取物中的總酚含量，發(fā)現(xiàn)總酚含量最高的為60%乙醇的提取物，而總酚含量最低的為水的提取物。由此可以發(fā)現(xiàn)，不同植物經(jīng)不同極性溶劑提取的提取物中總酚含量最高的不都是水提取物，造成此現(xiàn)象的原因可能是不同植物本身的性質(zhì)有較大的差別。

2.5.2 甲醇提取物中活性物質(zhì)分析

甲醇提取物中各活性物質(zhì)含量如圖6所示。

圖6 甲醇提取物中各物質(zhì)含量Fig.6 Contents of each substance in methanol extract

由圖6可知，發(fā)芽糙米甲醇提取物中各物質(zhì)的含量大小排序?yàn)槎嗵牵咎堑鞍祝究傸S酮＞γ-氨基丁酸＞總酚。由前面試驗(yàn)結(jié)果可知，甲醇提取物對(duì)鐵離子的還原能力僅次于蒸餾水提取物，在甲醇提取物中對(duì)鐵離子還原起主要作用的物質(zhì)是多糖，其次是糖蛋白、γ-氨基丁酸、總黃酮以及總酚。劉曉飛等[25]發(fā)現(xiàn)發(fā)芽糙米內(nèi)部的多糖具有良好的抗氧化效果和總還原能力。由此可知，多糖具有較好的抗氧化效果。而大量研究表明[26]總酚和總黃酮是抗氧化活性的物質(zhì)基礎(chǔ)，多酚及總黃酮含量較多的樣品顯示出更好的抗氧化能力。由于甲醇提取物中總酚及總黃酮的含量較少，所以未在甲醇提取物的抗氧化能力上起到作用。由圖6還可以發(fā)現(xiàn)甲醇適合發(fā)芽糙米中多糖的提取，可以從發(fā)芽糙米中提取多糖，作為天然的抗氧化劑用來(lái)延緩人體的衰老或者是其它的不良癥狀。

2.5.3 無(wú)水乙醇提取物中活性物質(zhì)分析

無(wú)水乙醇提取物中各活性物質(zhì)含量如圖7所示。

由圖7可以得到，發(fā)芽糙米無(wú)水乙醇提取物中各物質(zhì)含量大小的排序?yàn)樘堑鞍祝径嗵牵睛?氨基丁酸＞總黃酮＞總酚?？梢园l(fā)現(xiàn)無(wú)水乙醇適合發(fā)芽糙米中糖蛋白的提取。由前面試驗(yàn)結(jié)果可知，與其它提取物相比，無(wú)水乙醇提取物對(duì)超氧陰離子自由基具有最強(qiáng)的清除作用，提取物中的糖蛋白在超氧陰離子自由基的清除中起主要作用，多糖起次要作用，γ-氨基丁酸、總黃酮和總酚起到的作用較小。而韓璐等[27]發(fā)現(xiàn)焙烤發(fā)芽糙米中的黃酮具有較強(qiáng)的鐵離子還原能力。Paula等[28]發(fā)現(xiàn)物質(zhì)提取的產(chǎn)率取決于所用的溶劑，隨極性、pH值、溫度、提取時(shí)間和樣品的組成而變化。所以造成上述現(xiàn)象出現(xiàn)的原因可能是提取時(shí)間以及提取溫度等使發(fā)芽糙米中總黃酮的含量發(fā)生了改變，從而導(dǎo)致提取到的總黃酮含量較低。

圖7 無(wú)水乙醇提取物中各物質(zhì)含量Fig.7 Content of each substance in anhydrous ethanol extract

2.5.4 丙酮提取物中活性物質(zhì)分析

丙酮提取物中各活性物質(zhì)的含量如圖8所示。

圖8 丙酮提取物中各物質(zhì)含量Fig.8 Content of each substance in acetone extract

由圖8可以得到，發(fā)芽糙米的丙酮提取物中各物質(zhì)含量大小的排序?yàn)槎嗵牵睛?氨基丁酸＞糖蛋白＞總黃酮＞總酚?？芍诒崛∥镏衅鹱钪饕寡趸饔玫奈镔|(zhì)是多糖，其次是γ-氨基丁酸，而糖蛋白、總黃酮和總酚起到的作用較小。丙酮提取物是除無(wú)水乙醇提取物外對(duì)超氧陰離子自由基具有較強(qiáng)清除能力的提取物，可推測(cè)多糖對(duì)超氧陰離子自由基具有較好的清除效果。同時(shí)還可以發(fā)現(xiàn)丙酮也較適宜于發(fā)芽糙米中多糖的提取。而卓瑪次力[29]發(fā)現(xiàn)青稞發(fā)芽糙米中的γ-氨基丁酸具有極強(qiáng)的DPPH自由基清除能力。由此可以得出γ-氨基丁酸不僅對(duì)超氧陰離子自由基具有較好的清除能力，對(duì)DPPH自由基也具有較好的清除作用。

2.5.5 石油醚提取物中活性物質(zhì)分析

石油醚提取物中各活性物質(zhì)的含量如圖9所示。

圖9 石油醚提取物中各物質(zhì)含量Fig.9 Content of various substances in petroleum ether extract

由圖9可以得到，發(fā)芽糙米石油醚提取物中各物質(zhì)含量大小的排序?yàn)樘堑鞍祝径嗵牵睛?氨基丁酸＞總酚＞總黃酮。因此在石油醚提取物中起最主要抗氧化作用的物質(zhì)是糖蛋白，其次是多糖，而γ-氨基丁酸、總黃酮和總酚起到的作用較小。石油醚提取物是除蒸餾水提取物外對(duì)羥基自由基具有較強(qiáng)清除效果的提取物，所以糖蛋白對(duì)羥基自由基具有較好的清除能力。同時(shí)還可以發(fā)現(xiàn)石油醚也較適宜于發(fā)芽糙米中糖蛋白的提取。劉曉飛等[5]發(fā)現(xiàn)發(fā)芽糙米內(nèi)的糖蛋白對(duì)DPPH自由基、羥基自由基的清除作用與抗壞血酸基本沒有差異，但超氧陰離子自由基清除能力和總還原能力弱于抗壞血酸。二者之間結(jié)果有所差異，這可能是由于發(fā)芽糙米中糖蛋白的提取方法存在差異，也可能是由于溶液極性的不同影響其抗氧化活性。

3 結(jié)論

本研究的結(jié)果表明，不同的極性溶劑發(fā)芽糙米提取物均具有一定的抗氧化活性，且呈一定的量效關(guān)系，但溶液的極性對(duì)提取物的抗氧化作用無(wú)太大的影響，更重要的是不同極性溶劑提取物的抗氧化能力的大小順序也會(huì)隨評(píng)價(jià)方法的不同而呈現(xiàn)出差異。發(fā)芽糙米的蒸餾水提取物對(duì)DPPH自由基清除率、羥基自由基清除率和鐵離子還原能力較高，而無(wú)水乙醇提取物對(duì)超氧陰離子自由基清除能力較高。

本研究也測(cè)定了發(fā)芽糙米不同極性溶劑提取物中總酚、總黃酮、γ-氨基丁酸、糖蛋白和多糖的含量，分析了各種物質(zhì)的含量對(duì)其抗氧化能力產(chǎn)生的影響。結(jié)果表明發(fā)芽糙米的蒸餾水提取物、無(wú)水乙醇提取物和石油醚提取物中的糖蛋白含量最高，發(fā)芽糙米的甲醇提取物和丙酮提取物中多糖含量最高，除石油醚提取物中為黃酮含量最低之外，其余的不同極性溶劑的發(fā)芽糙米提取物中含量最低的均為總酚。所以發(fā)芽糙米不同溶劑提取物中多糖和糖蛋白對(duì)自由基清除活性和鐵離子還原能力均具有較大的影響。