王懷禹，呂遠蓉，師紅萍

（南充職業(yè)技術學院四川南充 637131）

近年來養(yǎng)殖舍內微生物氣溶膠逐漸引起了國內外研究人員的關注，研究發(fā)現(xiàn)微生物氣溶膠是誘發(fā)畜禽和養(yǎng)殖人員呼吸道類疾病的重要因素之一，給畜牧業(yè)生產(chǎn)和人類身體健康帶來了嚴重的威脅。微生物氣溶膠是指活性微生物寄存在固態(tài)或液態(tài)等微小顆粒中而彌散在空氣中所成的膠體體系，根據(jù)所含微生物種類可分為細菌氣溶膠、病毒氣溶膠、真菌氣溶膠及放線菌氣溶膠等[1]。其中在細菌氣溶膠中少量占比的革蘭陰性菌，多為致病菌或條件性致病菌，是豬群細菌性疾病的重要指征，當前很多學者將革蘭陰性菌氣溶膠作為微生物氣溶膠重點研究對象。微生物氣溶膠廣泛存在于養(yǎng)殖場所、垃圾或排泄物處理場所等，具有數(shù)量多、分布廣、存活能力強、危害大等諸多特點。微生物氣溶膠對人和家畜具有潛在的危害，尤其在封閉的豬舍環(huán)境中氣載需氧菌含量更高，研究表明每天有約4.0×105cfu 進入人體，有約4.9× 106cfu 氣載需氧菌進入豬體內[2]。但在傳統(tǒng)的實際養(yǎng)殖過程中并沒有引起對空氣中微生物氣溶膠的足夠重視，隨著現(xiàn)代畜牧業(yè)規(guī)?；?、集約化生產(chǎn)模式的快速發(fā)展，畜禽舍內的環(huán)境問題日益突出。我國作為生豬養(yǎng)殖大國，養(yǎng)豬業(yè)在畜牧業(yè)中占據(jù)重要地位，要確保生豬養(yǎng)殖過程中豬群健康及高的生產(chǎn)性能，就必須從源頭上加強防控，加強豬舍空氣中微生物氣溶膠的監(jiān)測，并采取有效的措施降低有害微生物氣溶膠的含量，對于及時診斷相關群的疾病及其威脅非常必要。本文在南充地區(qū)選取某集約化養(yǎng)豬場為采樣地，用Andersen-6 微生物氣溶膠采樣器，對該豬場內部分保育舍、育肥舍、妊娠舍內細菌氣溶膠進行實時監(jiān)測及樣本采集，并對采集結果進行了統(tǒng)計分析，以期為南充地區(qū)集約化養(yǎng)豬業(yè)的健康養(yǎng)殖和疫病防控提供重要試驗依據(jù)，提高養(yǎng)豬業(yè)的經(jīng)濟效益。

1 材料與方法

1.1 主要儀器

Andersen-6 級空氣微生物采樣器采樣、電熱恒溫培養(yǎng)箱、無菌超凈工作臺。

1.2 主要試劑

大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA）、虎紅氯霉素瓊脂（RBC）、革蘭氏染色液等。

1.3 所選豬舍的種類及其情況

本研究于2020 年10 月對南充地區(qū)某規(guī)?；i場的保育舍、育肥舍和妊娠舍三種類型豬舍進行了微生物氣溶膠監(jiān)測。該豬場內保育舍、育肥舍和妊娠舍均為全封閉式建筑結構，豬舍保溫隔熱能力強，智能方式控制舍內環(huán)境，采用過濾式機械通風的方式進行通風換氣。養(yǎng)殖人員進入舍內需更換已消毒衣物，且進行適當隔離觀察。所有物品出入均應經(jīng)臭氧熏蒸消毒處理。

保育舍基本情況保育舍呈東西走向，長35m，高3m，寬為10m，面積為350m2，舍內共有三個飼養(yǎng)區(qū)，三列四個走道，共有30 個飼養(yǎng)單元，每單元飼養(yǎng)1 頭分娩母豬和15 頭左右約3 周齡的哺乳仔豬。

育肥舍基本情況育肥舍東西走向，長為35m，高3m，寬為10m，占地面積350m2，舍內共有兩個飼養(yǎng)區(qū)，兩列三個走道，共有24 個飼養(yǎng)單元，每個飼養(yǎng)單元飼養(yǎng)12 頭左右的約130 日齡的豬只。育肥豬平均體重約為85kg。

妊娠舍基本情況妊娠舍呈東西走向，長35m，寬10m，高3m，面積為350m2，舍內有三個飼養(yǎng)區(qū)域，三列四個走道，共有200 個飼養(yǎng)單元，舍內妊娠母豬約200 頭左右，平均分配于各飼養(yǎng)單元中。

1.4 各豬舍日常飼養(yǎng)管理

該豬場管理較為科學，各項防疫制度均能嚴格執(zhí)行，不同類型的豬只均可得到較好的飼養(yǎng)管理，供給適宜的、營養(yǎng)豐富的全價飼料，并及時進行微量元素或礦物質的補飼。豬舍內熱風爐自動控溫，飼養(yǎng)員每天上下午各一次檢查豬群狀況，能夠及時清理糞污，各豬舍內采用自動機械通風系統(tǒng)進行過濾換氣。各舍內基本情況見表1。

表1 各豬舍基本情況

1.5 試驗方法

本試驗選取南充地區(qū)某規(guī)?；B(yǎng)豬場，對其不同類型舍內相對封閉環(huán)境空氣中微生物氣溶膠進行監(jiān)測，進而判定豬場內空氣環(huán)境質量對養(yǎng)殖場的影響。

試驗設計首先進行豬場的選擇，在選定豬場內部選擇不同生長階段的豬舍。本次選擇南充地區(qū)某規(guī)?；B(yǎng)豬場內保育舍、育肥舍和妊娠舍進行微生物氣溶膠測定。各舍由外至內分別選取距離地面約0.8m 的6 個采樣點，使用Andersen-6 微生物氣溶膠采樣器在每個采樣點進行樣品采集。這是因為該高度與豬鼻呼吸相近。采集時間應根據(jù)所采豬舍環(huán)境空氣質量情況確定，通常不應超過半小時，舍內環(huán)境采集1～5min 即可，為保持菌落計數(shù)的準確性，每個培養(yǎng)皿上菌落數(shù)低于250 個為宜。根據(jù)選定豬場的實際情況，確定每天5：00、10：00、15：00 和20：00 四個時間點進行采集和監(jiān)測微生物氣溶膠，每采樣點連續(xù)重復采集3～5d，采樣器流量為28.3L/min，每次采集時間約為3min，可用計時器計算時間[3]。需要注意的是采樣器在采樣前應進行徹底消毒處理，可選用75%酒精消毒法或高壓滅菌法；同時要確保在進行采集時應沒有影響氣流的其他因素；所有用于采樣的培養(yǎng)基均需經(jīng)無菌檢驗后方可使用。定點定時采集樣品后，應迅速蓋好培養(yǎng)基，并標注好采樣點，放置于適宜溫度的恒溫培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。本試驗分離細菌使用大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA）進行需氧及厭氧培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)24h 后進行計數(shù)分析；分離真菌氣溶膠樣品使用虎紅氯霉素瓊脂（RBC）培養(yǎng)基培養(yǎng)，28℃培養(yǎng)48h 后計數(shù)。

數(shù)據(jù)采集試驗數(shù)據(jù)的采集按照以下方法步驟進行：①將無菌的Andersen-6 生物空氣采樣器放置到各個采樣點，并將適宜培養(yǎng)皿放入采樣器中。在采樣點采集樣品的各個環(huán)節(jié)，操作人員必須配戴口罩和手套，動作要輕，防止手、口、鼻上微生物落到平皿上影響試驗結果，需要注意的是在采樣器中放入平皿時，應快速進行，打開平皿蓋的同時，迅速蓋上撞擊盤，并掛好采樣器所有的彈簧鉤；②打開采樣器進氣口，在距離采樣點約2m左右的距離可開始采集樣品；③采樣結束，取出采樣平皿，迅速蓋好蓋子，并標記好采樣點及時間。可用封口膜封好培養(yǎng)皿，即可防止培養(yǎng)皿內的水分散失，又可防止污染；④處理好的培養(yǎng)皿放置適宜的恒溫箱內培養(yǎng)后，記錄每個培養(yǎng)皿上的菌落數(shù)。

數(shù)據(jù)分析通過多點多次采集、平皿培養(yǎng)計數(shù)的方法，對選定的三種不同環(huán)境中的微生物氣溶膠存在的細菌種類及數(shù)量進行了詳細分析和闡述。根據(jù)每次測定的結果，進行統(tǒng)計分析。空氣中微生物的數(shù)量（cfu/m3）用公式：平皿上菌落數(shù)/[采樣時間（min）×28.3L/min]× 1000 計算得出[4]。

2 試驗結果與討論

收集的空氣樣品進行培養(yǎng)菌落計數(shù)，根據(jù)Andersen 校正表校正后，分別獲得需氧菌和厭氧菌含量（cfu/m3）。再對培養(yǎng)出的需氧菌進行革蘭氏染色、鏡檢，確定各平板上革蘭陰性菌的菌落數(shù)量，并計算革蘭陰性菌的含量。

2.1 三種不同類型豬舍內細菌氣溶膠分析

三種不同類型豬舍內細菌濃度分析由試驗結果可見看出，三種不同類型豬舍細菌氣溶膠濃度不相同，且同豬舍內不同時間點細菌氣溶膠濃度也有所差異。保育舍、育肥舍和妊娠舍細菌氣溶膠平均濃度范圍分別為0.15×104～1.18×104cfu/m3、0.95× 104～1.93× 104cfu/m3和0.27×104～1.76×104cfu/m3。保育舍、育肥舍和妊娠舍內出現(xiàn)細菌氣溶膠濃度最高時間點分別在10：00、10：00 和15：00。各舍內細菌氣溶膠濃度普遍呈5：00-10：00 逐漸上升趨勢，15：00-20：00 逐漸下降的趨勢。

三種不同類型豬舍空氣中氣載需氧菌、厭氧菌和氣載真菌濃度分析 保育舍舍內氣載需氧菌濃度在0.34×104～2.13×104cfu/m3，氣載厭氧菌的濃度為0.04× 104～0.83× 104cfu/m3；氣載真菌的濃度在0.06×104～0.59×104cfu/m3；育肥舍舍內氣載需氧菌濃度在1.84×104～2.44× 104cfu/m3，氣載厭氧菌的濃度為0.89× 104～1.67× 104cfu/m3；氣載真菌的濃度在0.12×104～1.68× 104cfu/m3；妊娠舍舍內氣載需氧菌濃度在0.55×104～2.37×104cfu/m3，氣載厭氧菌的濃度為0.12× 104～1.42×104cfu/m3；氣載真菌的濃度在0.16× 104～1.49× 104cfu/m3，詳情見表2。

表2 各豬舍細菌濃度分析

三種不同類型豬舍空氣中革蘭氏陰性菌濃度分析保育舍、育肥舍和妊娠舍不同類型豬舍氣載需氧革蘭陰性菌的濃度分別在0.02× 103～0.94× 104cfu/m3、0.10× 103～1.76× 104cfu/m3和0.08×103～1.59× 104cfu/m3；研究發(fā)現(xiàn)各舍內空氣中氣載需氧菌中以大腸桿菌、成團腸桿菌和克雷伯菌等為優(yōu)勢菌種，假單胞菌屬其次。三種不同類型豬舍氣載需氧革蘭陰性菌在Andersen-6 收集器6 個層級上的分布情況有所差異，保育舍、育肥舍和妊娠舍內空氣細菌主要集中在第1 級（粒徑＞7μm）、第2 級（4.7～7μm）兩個層級內，分別為48%、44%和45%。

2.2 討論

本研究采用國際標準微生物氣溶膠收集器Andersen-6 級撞擊式采樣器，采集了選定的南充地區(qū)某規(guī)?；B(yǎng)豬場內保育舍、育肥舍和妊娠舍三種不同類型的豬舍舍內微生物氣溶膠，并對各舍內細菌類氣溶膠的種類和含量進行了比較和分析。分析表明豬舍內細菌氣溶膠粒徑分布表現(xiàn)為逐級減少的趨勢，不同類型豬舍內細菌氣溶膠濃度存在差異，該豬場表現(xiàn)為育肥舍＞妊娠舍＞保育舍。由數(shù)據(jù)可見該豬場空氣質量還有待加強。目前最常用的微生物氣溶膠的檢測方法是空氣微生物采樣后培養(yǎng)計數(shù)法，該方法最為基礎，應用最為廣泛，具有簡單、準確等優(yōu)點，但也具有一定的缺點，如死亡的或難培養(yǎng)的微生物無法檢出等。Andersen-6 采樣器是最常使用的一種采樣儀器，其粒譜范圍一般在0.2～20μm，具有易于操作、敏感性高、采集活粒子量多等優(yōu)點，其結果較為準確有效，能夠客觀地反映豬舍環(huán)境氣載細菌的情況。

近年來，我國畜禽產(chǎn)業(yè)結構逐步被集約化、規(guī)?；B(yǎng)殖模式所替代，在管理集約化、相對封閉的背景下，對養(yǎng)殖場內環(huán)境問題的關注日益突出。養(yǎng)殖生產(chǎn)中的糞污、粉塵、微生物等不僅對環(huán)境造成嚴重污染，而且對人和畜禽的健康也帶來潛在的威脅。環(huán)境中微生物數(shù)量和形成的氣溶膠有正向相關性，微生物氣溶膠種類眾多，根據(jù)病原體的類型可分為細菌氣溶膠、真菌氣溶膠、病毒氣溶膠、放線菌氣溶膠等多種類型。微生物氣溶膠可引發(fā)畜禽傳染性疾病、過敏性疾病和中毒等。據(jù)不完全統(tǒng)計細菌類氣溶膠有160 種，病毒類氣溶膠700 多種等[5]。研究發(fā)現(xiàn)長期暴露于高濃度的有毒有害氣體空氣環(huán)境會使畜禽食欲減退、免疫力降低、生長性能下降等，因此開展畜禽舍內環(huán)境空氣中微生物氣溶膠的研究具有重要的意義。對于規(guī)?；?、集約化的生豬養(yǎng)殖行業(yè)來說，人工調節(jié)豬舍內環(huán)境溫濕度及調控全封閉豬舍空氣質量是確保豬只健康生長及改善生豬生長性能的重要途徑?！?/p>