王明明 王磊 竇芳 李韋韋 文愛東 王婧雯
摘 要 目的:研究β-乳香酸對大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞氧糖剝奪損傷的改善作用。方法:將大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞分為正常對照組、模型組和β-乳香酸低、中、高濃度組(1、10、100 μmol/L),除正常對照組外,其余各組細(xì)胞加入相應(yīng)含藥培養(yǎng)基,并進(jìn)行氧糖剝奪培養(yǎng)以復(fù)制氧糖剝奪損傷模型。采用MTT法檢測細(xì)胞的存活率,采用化學(xué)比色法檢測細(xì)胞上清液中乳糖脫氫酶(LDH)活性,采用Hoechst-PI染色法觀察細(xì)胞形態(tài)的變化,采用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞早期凋亡率,采用Western blot法檢測細(xì)胞中凋亡相關(guān)蛋白[B細(xì)胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相關(guān)X蛋白(Bax)、激活型胱天蛋白酶3(cleaved caspase-3)]的表達(dá)。結(jié)果:與模型組比較,β-乳香酸中、高濃度組細(xì)胞存活率、Bcl-2蛋白表達(dá)水平均顯著升高(P<0.01),細(xì)胞上清液中LDH活性、細(xì)胞早期凋亡率和細(xì)胞中cleaved caspase-3、Bax蛋白表達(dá)水平均顯著降低 (P<0.05或P<0.01);細(xì)胞核致密濃染、碎片狀現(xiàn)象明顯減少。結(jié)論:β-乳香酸可改善大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞氧糖剝奪損傷,其作用機(jī)制可能與下調(diào)cleaved caspase-3、Bax蛋白表達(dá),上調(diào)Bcl-2蛋白表達(dá)有關(guān)。
關(guān)鍵詞 β-乳香酸;海馬神經(jīng)元細(xì)胞;氧糖剝奪;細(xì)胞凋亡
ABSTRACT? ?OBJECTIVE: To study the improvement effects of β-boswellic acid on hippocampal neurons cells injury of rats induced by oxygen-glucose deprivation. METHODS: The hippocampal neurons cell of rats were divided into normal control group, model group and β-boswellic acid low-concentration, medium-concentration and high-concentration groups (1, 10, 100 μmol/L). Except for normal control group, other groups were cultured with relevant medium and given oxygen glucose deprivation to induce oxygen-glucose deprivation induced injury model. MTT assay was adopted to detect cell viability. Chemical colorimetry was used to detect LDH activity in cell culture supernatant. Hoechst-PI staining was used to detect the morphology change of cells. Flow cytometry was used to detect early apoptosis rate of cells. The expression of apoptosis-related protein (Bcl-2, Bax and cleaved caspase-3) were detected by Western blot. RESULTS: Compared with model group, the survival rate of cells and protein expression of Bcl-2 were increased significantly in β-boswellic acid medium-concentration and high-concentration groups (P<0.01), while LDH activity, early apoptosis rate, protein expression of cleaved caspase-3 and Bax were all decreased significantly (P<0.05 or P<0.01). The densely stained nuclei and fragmentation decreased significantly. CONCLUSIONS: β-boswellic acid can relieve oxygen-glucose deprivation induced injury of hippocampal neurons cells, the mechanism of which may be associated with down-regulating the protein expression of cleaved caspase-3 and Bax and up-regulating the protein expression of Bcl-2.
KEYWORDS? ?β-boswellic acid; Hippocampal neurons cells; Oxygen-glucose deprivation; Cell apoptosis
腦卒中是引起人類死亡和殘疾的第二大病因,具有高發(fā)病率、高病死率、高致殘率、高復(fù)發(fā)率及經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)重的特點(diǎn),嚴(yán)重影響國民健康;其中,80%的患者為缺血性卒中[1]。缺血性腦卒中是因大腦動脈血流短暫或持久性的閉塞導(dǎo)致腦供血不足或中斷,進(jìn)而誘發(fā)一系列級聯(lián)反應(yīng),造成缺血區(qū)腦組織不可逆的損傷,導(dǎo)致神經(jīng)功能缺陷[2]。海馬組織是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的重要組成部分,是腦組織中對缺血缺氧最敏感的部位之一[3-4],因此,抑制海馬神經(jīng)元細(xì)胞凋亡可有效減輕缺血性腦損傷的程度,進(jìn)而防治缺血性腦卒中[5]。
乳香為橄欖科植物乳香樹 Boswellia carterii Birdw.及同屬B. bhaur dajiana Birdw.樹皮滲出的樹脂,目前已被歐洲藥品管理局列為治療腦癌水腫的潛在治療藥物[6],其中β-乳香酸是其重要的藥效物質(zhì)[7]。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn),β-乳香酸可促進(jìn)海馬神經(jīng)元的生長和分支;另外,其在大鼠腦組織中的濃度明顯高于乳香的其他藥效成分,具有較高的血腦屏障滲透率[8-9]。但β-乳香酸是否對缺血性腦卒中具有治療作用,尚不明確。
基于此,本研究以大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞為研究對象,建立氧糖剝奪損傷模型,通過檢測細(xì)胞凋亡情況和凋亡相關(guān)蛋白[B細(xì)胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相關(guān)X蛋白(Bax)、激活型胱天蛋白酶3(cleaved caspase-3)]的表達(dá),探討β-乳香酸對海馬神經(jīng)元細(xì)胞氧糖剝奪損傷的改善作用,以期為β-乳香酸防治缺血性腦血管疾病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
1 材料
1.1 主要儀器
本研究所用主要儀器有:HF-90型CO2培養(yǎng)箱(上海力申科學(xué)儀器有限公司),IX53型倒置相差顯微鏡(日本Olympus公司),ELX-800型酶標(biāo)儀(美國Bio-Tek公司),H-2050R型超速冷凍離心機(jī)(湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開發(fā)有限公司),SW-CJ-2FD型超凈工作臺(蘇州凈化設(shè)備有限公司),NW10LVF型超純水系統(tǒng)(力康生物醫(yī)療科技控股有限公司),DYY-7C型電泳儀、WD-9413B型凝膠成像系統(tǒng)(北京六一生物科技有限公司),NovoCyte型流式細(xì)胞儀(艾森生物有限公司),DH36001B型電熱恒溫培養(yǎng)箱(天津泰斯特儀器有限公司)。
1.2 主要藥品與試劑
本研究所用主要藥品與試劑有:β-乳香酸(上海純優(yōu)生物科技有限公司,批號P1513,純度不低于95%),胰蛋白酶(上海中喬新舟生物科技有限公司,批號0103),DMEM培養(yǎng)基(美國Hyclone公司,批號SH30027),胎牛血清(以色列BI公司,批號04-011-1A),Neurobasal培養(yǎng)基、L-谷氨酰胺、細(xì)胞培養(yǎng)添加劑B27(美國Gibco公司,批號分別為12348-017、25030-149、17504-044),阿糖胞苷(日本TCI公司,批號C2035),磷酸鹽緩沖液(PBS)、二甲基亞砜(DMSO)、蛋白上樣緩沖液、碘化丙啶(PI)、細(xì)胞裂解液、ECL發(fā)光液(上海碧云天生物技術(shù)研究所,批號分別為ST476、ST038、P0015、ST511、P0013、P0018),MTT試劑、乳酸脫氫酶(LDH)測定試劑盒、BCA蛋白濃度測定試劑盒、細(xì)胞凋亡檢測試劑盒、辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的山羊抗兔免疫球蛋白G(IgG)二抗、兔抗大鼠cleaved caspase-3單克隆抗體、兔抗大鼠Bcl-2 單克隆抗體、兔抗大鼠Bax單克隆抗體、兔抗大鼠β-actin單克隆抗體(沈陽萬類生物科技有限公司,批號分別為WLA021、WLA072、WLA004、WLA001、WLA023、WL02117、WL01556、WL01637、WL01372)。
1.3 動物
本研究所用動物為SPF級SD新生大鼠(出生2天),雄性,購自第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心,實(shí)驗(yàn)動物生產(chǎn)許可證號為SCXK(陜)2019-001。大鼠的飼養(yǎng)環(huán)境溫度為(22±1) ℃、濕度為45%~55%,飼養(yǎng)過程中大鼠自由進(jìn)食飲水。
2 方法
2.1 原代海馬神經(jīng)元細(xì)胞的分離與培養(yǎng)
參考文獻(xiàn)[10]并對方法改良后進(jìn)行細(xì)胞分離培養(yǎng)。取新生大鼠,置于 75%乙醇中浸泡5 min,于無菌條件下取出其腦組織,分離海馬組織,以PBS洗凈殘血后剪碎,放入無菌離心管中,加入0.125%胰蛋白酶,于37 ℃條件下水浴5 min進(jìn)行消化;將消化后的混懸液反復(fù)吹打溶液,靜置,待自然沉淀后棄去上清液;沉淀中加入0.125%胰蛋白酶繼續(xù)消化,待自然沉淀后收集上清液;然后向上清液中加入含10%胎牛血清和青/鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基以中和消化酶,然后以70 μm孔徑的一次性細(xì)胞濾網(wǎng)過濾,取上清液,以1 000 r/min離心7 min,棄上清液;將沉淀接種至多聚賴氨酸包被的6孔板中,于37 ℃、5%CO2恒溫箱中培養(yǎng)8 h后,換成含2%B27和0.5 mmol/L L-谷氨酰胺及100 U/mL青/鏈霉素的Neurobasal培養(yǎng)基中培養(yǎng)48 h,然后加入10 μmol/L阿糖胞苷抑制膠質(zhì)細(xì)胞生長,每隔3 天換液1次,培養(yǎng)7~10天后進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。
2.2 海馬神經(jīng)元細(xì)胞分組、造模與給藥
取海馬神經(jīng)元細(xì)胞分為正常對照組、模型組和β-乳香酸不同濃度組(1、10、100 μmol/L,濃度根據(jù)文獻(xiàn)[11-12]設(shè)置)。正常對照組和模型組加入含2%B27和0.5 mmol/L谷氨酰胺的Neurobasal培養(yǎng)基1 mL;β-乳香酸各濃度組加入含相應(yīng)藥物以及含2%B27和0.5 mmol/L? ?L-谷氨酰胺的Neurobasal培養(yǎng)基1 mL。各組細(xì)胞于37 ℃、5%CO2恒溫箱中培養(yǎng)24 h后,將β-乳香酸各濃度組和模型組的培養(yǎng)基更換為無糖DMEM培養(yǎng)基,并將細(xì)胞置于缺氧造模盒內(nèi),通入混合氣體(含有95%N2、5%CO2),于37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2 h以誘導(dǎo)建立氧糖剝奪模型[13-14];正常對照組繼續(xù)用含2%B27和0.5 mmol/L谷氨酰胺的Neurobasal培養(yǎng)基培養(yǎng),不作缺氧缺糖處理。造模結(jié)束將各組培養(yǎng)基更換為含2%B27和0.5 mmol/L L-谷氨酰胺的Neurobasal培養(yǎng)基(β-乳香酸各濃度組繼續(xù)加入相應(yīng)藥物)。
2.3 海馬神經(jīng)元細(xì)胞存活率的測定
采用MTT法進(jìn)行檢測。取“2.1”項(xiàng)下海馬神經(jīng)元細(xì)胞,以5×103個/孔接種于96孔板中,然后按“2.2”項(xiàng)下方法分組、造模與給藥,每組設(shè)3個復(fù)孔。細(xì)胞于37 ℃、5%CO2恒溫箱中培養(yǎng)24 h后,加入MTT染色液20 μL,繼續(xù)培養(yǎng)4 h;棄去上清液,加入DMSO 150 μL以溶解細(xì)胞,避光靜置10 min后,采用酶標(biāo)儀于570 nm波長下測定各孔吸光度值(OD),并計(jì)算細(xì)胞存活率[細(xì)胞存活率(%)=(OD實(shí)驗(yàn)組/OD正常對照組)×100%]。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。
2.4 海馬神經(jīng)元細(xì)胞上清液中LDH活性的測定
采用化學(xué)比色法進(jìn)行檢測。取“2.1”項(xiàng)下海馬神經(jīng)元細(xì)胞,以5×103個/孔接種于96孔板中,然后按“2.2”項(xiàng)下方法分組、造模與給藥,每組設(shè)3個復(fù)孔。細(xì)胞于37 ℃、5%CO2恒溫箱中培養(yǎng)24 h后,取培養(yǎng)液上清液,根據(jù)LDH測定試劑盒說明書方法操作,采用酶標(biāo)儀于440 nm波長處測定各孔OD,并計(jì)算LDH 活性。
2.5 海馬神經(jīng)元細(xì)胞形態(tài)的觀察
采用Hoechst-PI染色法進(jìn)行觀察。取“2.1”項(xiàng)下海馬神經(jīng)元細(xì)胞,以5×103個/孔接種于置有蓋玻片的12孔培養(yǎng)板中,按“2.2”項(xiàng)下方法分組、造模與給藥。細(xì)胞于37 ℃、5%CO2恒溫箱中培養(yǎng)24 h后,滴加Hoechst熒光染料(10 μg/mL),于37 ℃條件下孵育10 min;以PBS清洗3次,加入1 μg/mL PI,于4 ℃條件下孵育20 min;滴加預(yù)冷的4%多聚甲醛固定15 min;以 PBS清洗3次,然后采用熒光倒置顯微鏡觀察(正常細(xì)胞的細(xì)胞核經(jīng)Hoechst染色后呈淡藍(lán)色圓形狀,凋亡細(xì)胞的細(xì)胞核經(jīng)Hoechst染色后呈亮藍(lán)色分葉、碎片狀;死細(xì)胞或晚期凋亡細(xì)胞因細(xì)胞膜被破壞,可被PI染成亮紅色[15])。
2.6 海馬神經(jīng)元細(xì)胞早期凋亡率的檢測
取“2.1”項(xiàng)下海馬神經(jīng)元細(xì)胞,以5×103個/孔接種于具有蓋玻片的6孔培養(yǎng)板中,按“2.2”項(xiàng)下方法分組、造模與給藥,每組設(shè)3個復(fù)孔。細(xì)胞于37 ℃、5%CO2恒溫箱中培養(yǎng)24 h后,以1 000 r/min離心5 min,收集細(xì)胞,以PBS清洗2次,棄上清液;加入Binding buffer 500 μL輕輕重懸細(xì)胞;加入Annexin V-FITC 5 μL混勻后,再加入PI 10 μL,室溫避光孵育15 min,然后采用流式細(xì)胞儀檢測各組細(xì)胞早期凋亡率。
2.7 海馬神經(jīng)元細(xì)胞中cleaved caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)水平的檢測
采用Western blot法進(jìn)行檢測。取“2.1”項(xiàng)下海馬神經(jīng)元細(xì)胞,以5×103個/孔接種于6孔培養(yǎng)板中,按“2.2”項(xiàng)下方法分組、造模與給藥,每組設(shè)3個復(fù)孔。細(xì)胞于37 ℃、5%CO2恒溫箱中培養(yǎng)24 h后,棄上清液,以PBS沖洗3次,加入適量裂解液,于冰上裂解30 min;以10 000 r/min離心5 min,取上清液,采用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度。蛋白經(jīng)變性后,進(jìn)行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE),轉(zhuǎn)膜;以TBST清洗5 min,以5%脫脂奶粉溶液封閉1 h;加入cleaved caspase-3、Bcl-2、Bax、β-actin一抗、(稀釋度分別為1 ∶ 400、? ? 1 ∶ 500、1 ∶ 500、1 ∶ 500),于4 ℃條件下孵育過夜;以TBST清洗5 min×4次,加入二抗(稀釋度為1 ∶ 5 000),室溫振蕩孵育1 h;以TBST 清洗5 min×6次,加入 ECL發(fā)光液,經(jīng)凝膠成像系統(tǒng)掃描。采用Image J v1.44軟件分析,以目的蛋白與內(nèi)參β-actin的灰度值的比值來表示目的蛋白的表達(dá)水平。
2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
采用SPSS 19.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。數(shù)據(jù)以x±s表示,組間比較采用單因素方差分析。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
3 結(jié)果
3.1 β-乳香酸對海馬神經(jīng)元細(xì)胞存活率的影響
與正常對照組比較,模型組海馬神經(jīng)元細(xì)胞存活率顯著降低(P<0.01);與模型組比較,β-乳香酸中、高濃度組海馬神經(jīng)元細(xì)胞存活率均顯著升高(P<0.01),詳見圖1。
3.2 β-乳香酸對海馬神經(jīng)元細(xì)胞上清液中LDH活性的影響
與正常對照組比較,模型組海馬神經(jīng)元細(xì)胞上清液中LDH活性顯著升高( P<0.01);與模型組比較,β-乳香酸中、高濃度組海馬神經(jīng)元細(xì)胞上清液中LDH活性均顯著降低( P<0.01),詳見圖2。
3.3 β-乳香酸對海馬神經(jīng)元細(xì)胞形態(tài)的影響
正常對照組海馬神經(jīng)元細(xì)胞染色均勻,細(xì)胞核形態(tài)完整;模型組海馬神經(jīng)元細(xì)胞的細(xì)胞核呈致密濃染,可見核固縮和核碎片現(xiàn)象;β-乳香酸中、高濃度組海馬神經(jīng)元細(xì)胞染色均勻,細(xì)胞核致密濃染、核碎片狀現(xiàn)象明顯減少;β-乳香酸低劑量組海馬神經(jīng)元細(xì)胞的細(xì)胞核仍存在致密濃染,核固縮和碎片仍顯著,詳見圖3。
3.4 β-乳香酸對海馬神經(jīng)元細(xì)胞早期凋亡率的影響
與正常對照組比較,模型組海馬神經(jīng)元細(xì)胞早期凋亡率顯著升高(P<0.01);與模型組比較,β-乳香酸中、高濃度組海馬神經(jīng)元細(xì)胞早期凋亡率均顯著降低(P<0.05 或 P<0.01),詳見圖4、圖5。
3.5 β-乳香酸對海馬神經(jīng)元細(xì)胞中凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
與正常對照組比較,模型組海馬神經(jīng)元細(xì)胞中Bax、cleaved caspase-3蛋白的表達(dá)水平均顯著升高( P<0.01),Bcl-2蛋白的表達(dá)水平顯著降低( P<0.01);與模型組比較,β-乳香酸中、高濃度組海馬神經(jīng)元細(xì)胞中Bax、cleaved caspase-3蛋白的表達(dá)水平均顯著降低(P<0.05或 P<0.01),Bcl-2蛋白的表達(dá)水平均顯著升高 ( P<0.05或 P<0.01),詳見圖6、圖7。
4 討論
缺血性腦卒中是危害人類健康的主要疾病之一。發(fā)生缺血性腦卒中后,由于缺氧缺糖導(dǎo)致腦細(xì)胞,尤其是神經(jīng)元細(xì)胞損傷,是造成神經(jīng)功能缺陷的主要原因,因此減少神經(jīng)元細(xì)胞損傷是減輕缺血性腦卒中病情的策略之一[16]。海馬組織是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的重要組成部分,與多種中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能活動有關(guān),是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中對缺氧耐受相對較差的部位[15]。因此,本研究選擇海馬神經(jīng)元細(xì)胞來建立氧糖剝奪損傷模型。
乳香由樹脂、樹膠和揮發(fā)油等組成,其中含量較高的是樹脂(約60%~70%),其主要成分有游離的α-乳香酸、β-乳香酸、11-酮基-β-乳香酸等[17]。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn),β-乳香酸在神經(jīng)可塑性中發(fā)揮著核心作用,具有促進(jìn)海馬神經(jīng)元生長和分支的作用[18]。本研究結(jié)果顯示,10、100 μmol/L的β-乳香酸可顯著升高氧糖剝奪損傷模型海馬神經(jīng)元細(xì)胞的存活率,表明β-乳香酸可通過提高海馬神經(jīng)元細(xì)胞的存活率,減輕其氧糖剝奪損傷。
LDH廣泛存在于人體各組織內(nèi),正常細(xì)胞中LDH漏出量很少,而當(dāng)其受損時,細(xì)胞膜的完整性和通透性被破壞,使得LDH漏出[19]。因此,檢測海馬神經(jīng)元細(xì)胞上清液中 LDH的活性,即可間接反映細(xì)胞的受損程度。本研究結(jié)果顯示,10、100 μmol/L的β-乳香酸可降低氧糖剝奪損傷海馬神經(jīng)元細(xì)胞上清液中 LDH的活性;進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),海馬神經(jīng)元細(xì)胞的細(xì)胞核致密濃染、碎片狀現(xiàn)象較模型組明顯減少,細(xì)胞早期凋亡率也顯著降低,說明β-乳香酸可通過減少細(xì)胞凋亡,減輕海馬神經(jīng)元的氧糖剝奪損傷。
相關(guān)研究發(fā)現(xiàn),caspase家族、Bcl-2家族等相關(guān)蛋白可參與細(xì)胞凋亡的過程;其中,caspase家族相關(guān)蛋白可參與細(xì)胞凋亡的各個時期[20-21]。該家族由14個成員組成,在正常細(xì)胞中均以無活性的酶原形式存在;其中caspase-3在細(xì)胞凋亡的級聯(lián)反應(yīng)途徑中位于核心位置,是凋亡信號轉(zhuǎn)導(dǎo)下游的執(zhí)行者,主要分布于細(xì)胞質(zhì)中,初始無活性,當(dāng)收到凋亡信號刺激被激活后,活化為cleaved caspase-3[20]。Bcl-2分布于線粒體外膜、核膜和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上,位于線粒體上游,可通過調(diào)節(jié)線粒體膜間隙蛋白的釋放來調(diào)控細(xì)胞凋亡;Bax定位于細(xì)胞質(zhì),是Bcl-2家族重要的促凋亡因子[21]。本研究結(jié)果顯示,10、100 μmol/L的β-乳香酸可顯著降低氧糖剝奪損傷模型海馬神經(jīng)元細(xì)胞中Bax、cleaved caspase-3蛋白表達(dá)水平,升高Bcl-2蛋白表達(dá)水平,表明β-乳香酸可通過下調(diào)cleaved caspase-3、Bax蛋白表達(dá)以及上調(diào)Bcl-2蛋白表達(dá)來抑制細(xì)胞凋亡,從而改善海馬神經(jīng)元細(xì)胞氧糖剝奪損傷。
綜上所述,β-乳香酸可改善大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞氧糖剝奪損傷,其作用機(jī)制可能與下調(diào)cleaved caspase-3、Bax蛋白表達(dá),上調(diào)Bcl-2蛋白表達(dá)有關(guān)。
參考文獻(xiàn)
[ 1 ] WANG H D,MOHSEN N,CHRISTINE A,et al. Global,regional,and national life expectancy,all-cause mortality,and cause-specific mortality for 249 causes of death,1980-2015:a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2015[J]. Lancet,2016,388 (10053):1459- 1544.
[ 2 ] 劉天龍,柳敏娜,王文軍,等. Z-沒藥甾酮對缺血性腦卒中大鼠氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用及分子機(jī)制[J].解放軍醫(yī)藥雜志,2020,32(1):6-27.
[ 3 ] 杜成昊,萬海同,周惠芬,等.谷紅注射液對新生乳鼠海馬神經(jīng)元缺氧缺糖損傷的保護(hù)作用[J].中華中醫(yī)藥雜志,2017,32(1):289-293.
[ 4 ] 張曉璇,馬征,于寧,等.丁苯酞對缺血性腦卒中大鼠海馬神經(jīng)元凋亡的抑制作用及其對p38 MAPK信號通路的影響[J].吉林大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2019,45(5):1086- 1091.
[ 5 ] LU X ,LING D,YUAN Q S,et al. Neuroprotective effects of curcumin against rats with focal cerebral ischemia- reperfusion injury[J]. Int J Mol Med,2019,43(4):1879- 1887.
[ 6 ] CARSTEN S,KARINA K,LARS T,et al. Increased bioavailability of 11-keto-beta-boswellic acid following single oral dose frankincense extract administration after a standardized meal in healthy male volunteers:modeling and simulation considerations for evaluating drug exposures[J]. J Clin Pharmacol,2012,52(10):1592-1600.
[ 7 ] BHAHWAL A S,GHULAM N Q,SUBHASH C T. Boswellic acids:a group of medicinally important compounds[J]. Nat Prod Rep,2009,26(1):72-89.
[ 8 ] KARIMA O,RIAZI G,KHODADADI S,et al. An in vitro study of the role of β-boswellic acid in the microtubule assembly dynamics[J]. FEBS Lett,2012,586(23):4132- 4138.
[ 9 ] KATHLEEN G,H?SCH J,F(xiàn)RICKER G,et al. In vitro metabolism,permeation,and brain availability of six major boswellic acids from Boswellia serrata gum resins[J]. Fitoterapia,2013,84(2013):99-106.
[10] 董永喜,董莉,付思紅,等.辛芍組方對氧糖剝奪損傷的神經(jīng)PC12細(xì)胞凋亡的影響及其機(jī)制研究[J].中國藥房,2016,27(28):3907-3910.
[11] KONG C C,MIAO F F,WU Y,et al. Oxycodone suppresses the apoptosis of hippocampal neurons induced by oxygen-glucose deprivation/recovery through caspase-dependent and caspase-independent pathways via κ- and δ-opioid receptors in rats[J/OL]. Brain Res,2019[2020-12- 23]. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/31276638/.DOI:10. 1016/j.brainres.2019.146319.
[12] GUPTA S,AHSAN A U I,WANI A,et al. The amino analogue of beta-boswellic acid efficiently attenuates the release of pro-inflammatory mediators than its parent compound through the suppression of NF-κB/IκBα signalling axis[J]. Cytokine,2017,107:93-104.
[13] JEBELLI A,KHALAJ-KONDORI M,RAHMATI-YAMCHI M. The effect of beta-boswellic acid on the expression of Camk4 and Camk2α genes in the PC12 cell line[J]. Adv Pharm Bul,2020,10(3):437-443.
[14] ZHOU L,ZHANG J,WANG C,et al. Tanshinone inhibits neuronal cell apoptosis and inflammatory response in cerebral infarction rat model[J]. Int J Immunopathol Pharmacol,2017,30(2):123-129.
[15] 楊輝,魯利香,肖政華,等.缺氧缺糖海馬神經(jīng)元模型最佳造模時間的選擇[J].貴州醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2017,42(7):778-782.
[16] 張黎黎,黃家貴,沈長波,等.白藜蘆醇預(yù)處理對缺糖缺氧再灌注大鼠原代皮質(zhì)神經(jīng)元的保護(hù)作用[J].中成藥,2014,36(5):897-903.
[17] 王峰,華會明,王淑美,等. 乳香的化學(xué)成分研究[J].中草藥,2011,42(7): 1293-1296.
[18] KARIMA O,RIAZI G,YOUSEFI R,et al. The enhancement effect of beta-boswellic acid on hippocampal neurites outgrowth and branching (an in vitro study)[J]. Neurol Sci,2010,31(3):315-320.
[19] 周惠芬,萬海同,何昱,等.丹參-川芎有效成分配伍對氧糖剝奪海馬神經(jīng)元細(xì)胞保護(hù)作用研究[J].中草藥,2019,50(6):1372-1381.
[20] 劉春華,劉捷.神經(jīng)元凋亡與Caspase家族及細(xì)胞周期研究進(jìn)展[J].人民軍醫(yī),2018,61(7):641-644.
[21] 馮健愉,朱玉山,陳佺,等. Bcl-2家族蛋白的生理功能及結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)[J].中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報,2019,41(8):1477- 1489.
(收稿日期:2021-01-11 修回日期:2021-03-28)
(編輯:唐曉蓮)