程鑫 程華

（1.遼寧省錦州市疾病預(yù)防控制中心 遼寧錦州 121000；2.錦州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院）

1 前言

美沙拉秦誕生于20世紀(jì)80年代，主要功效是治療腸炎及其并發(fā)癥，當(dāng)時(shí)科學(xué)水平并不先進(jìn)，卻已具有顯著效果。本文主要論述了如何對這一藥物進(jìn)行有效檢測。其中液相系統(tǒng)以及氣相系統(tǒng)是進(jìn)行檢測的主要組成部分，本文采用的方式是電化學(xué)檢測法，結(jié)論更加準(zhǔn)確，能夠達(dá)到檢測的目的。

目前，高壓液相色譜儀通常用玻璃碳為材料來制作工作電極和電化學(xué)檢測器，例如PU4022（PYE UNICAM，Phillips）電化學(xué)檢測器及ModelLC17A（Bioanalytical systemInc）。這種電化學(xué)檢測器結(jié)構(gòu)復(fù)雜，不易保持系統(tǒng)的完全密封，而且玻璃碳電極非常昂貴，電極制作技術(shù)復(fù)雜。當(dāng)電極表面被污染時(shí)，需要將其機(jī)械磨光，既費(fèi)時(shí)又費(fèi)力。長期工作時(shí)，其穩(wěn)定性和重現(xiàn)性將變差。近年來逐漸出現(xiàn)被其他結(jié)構(gòu)簡單、價(jià)格便宜以及性能優(yōu)異的電化學(xué)檢測器替代的趨勢。碳絲流通電極在電化學(xué)分析儀器中，顯示出極大優(yōu)越性：其制作技術(shù)簡單，電極材料便宜；電極表面積很小，碳絲流通池上的電壓降很小，在電化學(xué)系統(tǒng)中，可用低濃度的電解質(zhì)；靈敏度高。但用于電位溶出分析中的碳絲流通電極不能用于HPLC中，因?yàn)橛糜诜怆姌O管針孔的環(huán)氧樹脂膠在有機(jī)溶劑中不穩(wěn)定。

為制造新型的電化學(xué)檢測器而提供的一種新型碳絲流通電極，高壓液相色譜儀電化學(xué)檢測器由至少一個(gè)工作電極和一個(gè)參比電極及一個(gè)對電極用連接管順次連接構(gòu)成。工作電極和參比電極為管式電極，電極絲在電極管中呈縱向設(shè)置，插口被封住，在電極管上涂有一層導(dǎo)電膠，通過此導(dǎo)電膠或在導(dǎo)電膠下纏繞一根金屬導(dǎo)線，使電極絲與控制器相連接；在此電化學(xué)檢測器中，工作電極為管式碳絲流通電極，電極管中的電極絲是直徑為3～25μm的碳絲，參比電極為管式銀絲電極，電極管中的電極絲是直徑為0.01～2 mm鍍Ag3PO4的銀絲，電極管和連接管為有機(jī)塑料管；電極管上的導(dǎo)電膠為碳粉導(dǎo)電膠或銀粉導(dǎo)電膠，所述的碳粉導(dǎo)電膠是將目數(shù)大于150目的碳粉與SDS膠（北京金山粘合劑廠）以2∶1（重量比）的比例混合，加乙酸乙酯作溶劑調(diào)配而成。

2 儀器與試藥

在檢測前，首先要對相應(yīng)的儀器以及試藥進(jìn)行充分的認(rèn)識(shí)，儀器主要采用型號為Aglient1200型的液相色譜儀，可以保證檢測的效果。這一部分中包含2個(gè)重要的組成部分：電化學(xué)檢測器、高效液相色譜儀。只有將這些儀器進(jìn)行有機(jī)結(jié)合，共同使用，才能發(fā)揮出最大的功效，提高檢測的準(zhǔn)確度。對于試藥的選取，主要選擇某制藥公司提供的不同批號的藥物，并且每一批號藥物中含有美沙拉秦的含量都不盡相同，有助于在這之間進(jìn)行相應(yīng)的對比，以得出最終的結(jié)論。

3 方法與結(jié)果

3.1 色譜條件

首先，對色譜柱的數(shù)據(jù)進(jìn)行調(diào)整，保證其滿足實(shí)驗(yàn)的要求。選用AngilentC-18色譜柱，尺寸：0.25 m×4.6 mm；固定相：色譜級球形十八烷基硅烷鍵合硅膠（3μm）；柱溫：40℃。流動(dòng)相：甲醇；溶液A（15：85）。（溶液A：含磷酸二氫鉀1.41 g/l、二水合磷酸氫二鈉0.47 g/l，用42 g/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至8.0。）流速：1.0 ml/min。檢測器：紫外分光光度計(jì)，檢測波長205 nm?？刂泼糠昼娏鲃?dòng)的速度，通常情況下為1.5ml/min。將工作中的電極調(diào)配好，選用玻碳圓盤電極，效果更加。同時(shí)，作為比照的電極，選用含有銀以及氯化銀的電極，將電壓調(diào)整到0.7 V以上，將溶液緩慢地導(dǎo)入色譜柱中，含量為20μl，根據(jù)對不同時(shí)間段的情況進(jìn)行對比可知，流動(dòng)相呈現(xiàn)不同的效果。

3.2 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

取1、2、3和4對照品適量，加流動(dòng)相A溶解并稀釋制成1濃度分別為0.5 mg、1μg、0.1μg和0.1μg的混合溶液，作為系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液，進(jìn)樣測定。色譜圖見圖1。

圖1 典型色譜圖

3.3 線性范圍

根據(jù)規(guī)定選取相應(yīng)的對照品，保證能夠滿足實(shí)驗(yàn)中所需要的含量，在此基礎(chǔ)上，將其進(jìn)行稀釋處理。具體方法是將色譜柱中的流動(dòng)相A添加至對照品中，將其稀釋成一定容量的溶液，同時(shí)，為了精準(zhǔn)地測量最終結(jié)果，要進(jìn)行多次實(shí)驗(yàn)，根據(jù)不同實(shí)驗(yàn)次數(shù)，按照單數(shù)的形式分別進(jìn)行提取l ml、3 ml等溶液含量，以此類推，最多為9 ml。將其安放在規(guī)定的位置上，然后再均勻地?fù)u晃，直至試管中的溶液出現(xiàn)變化。對不同規(guī)格的試藥進(jìn)行相應(yīng)檢測，最終得出結(jié)論。

同理，在實(shí)驗(yàn)2中，稱取相應(yīng)含量的試藥，并進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，將流動(dòng)相A添加在其中，均勻地?fù)u晃，并進(jìn)行稀釋，最終得到2μg/ml的試劑溶液。將不同含量的溶液按照一定的標(biāo)準(zhǔn)均勻地放置在事先準(zhǔn)備好的量瓶中，對其線性范圍進(jìn)行測量，最終得出相應(yīng)結(jié)論，測得的結(jié)果與實(shí)驗(yàn)1中的結(jié)果一致。繼續(xù)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)3以及實(shí)驗(yàn)4，對線性范圍進(jìn)行相應(yīng)檢測，詳細(xì)的檢測限比較見表1。在實(shí)驗(yàn)1中，檢測到線性范圍在0.21μl/ml～1.8μl/ml之間；在實(shí)驗(yàn)2以及后續(xù)的實(shí)驗(yàn)中，均檢測出相應(yīng)的線性范圍在0.2μl/ml～1.8μl/ml。根據(jù)線性范圍的測定，可以得知該藥物具有較高的靈敏度，在檢測的過程中，具有較高的精準(zhǔn)性，滿足實(shí)驗(yàn)要求。

表1 檢測限比較（ng，S/N=5）

3.4 精密度和穩(wěn)定性試驗(yàn)

取“2.5”項(xiàng)下的對照品的混合溶液重復(fù)測定6次，1、2、3和4的峰面積RSD分別為0.5%、0.5%、1.6%和1.5%。取“2.5”項(xiàng)下的對照品的混合溶液和供試品溶液，分別放置0、2、4、6和8h后，進(jìn)樣測定。結(jié)果1峰面積和1峰面積百分比、各有關(guān)物質(zhì)峰面積百分比均無明顯變化（RSD小于2%），表明溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

3.5 樣品測定

精密稱取1對照品適量，加流動(dòng)相A溶解并稀釋制成0.5 mg/ml的溶液作為供試品溶液。另精密稱取1、2、3、4對照品適量，加流動(dòng)相A溶解并稀釋，制成分別包含1、2、3、4對照品的1、1、0.1和0.1g/ml的對照品混合溶液。取“2.2”項(xiàng)下的系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液進(jìn)樣，調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使3峰高約為滿量程的20%。再取對照品混合溶液與供試品溶液進(jìn)樣，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算。結(jié)果3批1樣品中均未檢出2、3、4（美國藥典與歐洲藥典對2、3和4的限度分別為0.2、0.02和0.02%）。

4 結(jié)論

綜上所述，本文在對美沙拉秦進(jìn)行檢測的過程中，主要選取了2種相應(yīng)的試藥，規(guī)格及批號均不相同，目的是保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的精準(zhǔn)性，最終得出的相關(guān)結(jié)論符合國家對于藥品的相關(guān)規(guī)定，并且滿足國際藥典的要求。在今后的生產(chǎn)環(huán)節(jié)中，可以根據(jù)檢測出的數(shù)據(jù)，進(jìn)行相關(guān)藥物實(shí)驗(yàn)，以此作為重要的數(shù)據(jù)支持，有利于提升美沙拉秦藥物性能。