韓惠超 葉世蕓 李向東 楊潔

（1.貴州中醫(yī)藥大學(xué) 貴州貴陽(yáng) 550002；2.貴州得軒堂護(hù)康藥業(yè)股份有限公司）

1 前言

五味消毒飲出自清代《醫(yī)宗金鑒》，具有清熱解毒、消散疔瘡的功效[1]，為清熱解毒的代表方，其方劑由金銀花、野菊花、蒲公英、紫花地丁、天葵子等組成。目前，對(duì)于其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究，尤其是方劑中蒲公英的指標(biāo)性成分菊苣酸的檢測(cè)尚未見(jiàn)報(bào)道，故本文采用高效液相色譜法對(duì)本方中蒲公英的有效成分菊苣酸的含量進(jìn)行測(cè)定。

2 材料和儀器

材料：對(duì)照品菊苣酸（成都普瑞法科技開(kāi)發(fā)有限公司，含量98%）。

五味消毒飲處方：金銀花、野菊花、蒲公英、紫花地丁、天葵子（藥材來(lái)源信息見(jiàn)表1）；冰醋酸（色譜純）、甲醇（色譜純）；黃酒；娃哈哈純凈水。

表1 藥材產(chǎn)地信息

儀器：高效液相色譜儀；煎藥壺；電子分析天平；超聲波清洗器。

3 方法與結(jié)果

3.1 溶液制備

3.1.1對(duì)照品溶液制備

精確稱(chēng)取菊苣酸對(duì)照品11.6 mg，用甲醇溶解并定容至10 mL容量瓶?jī)?nèi)，搖勻，充分混合均勻并稀釋?zhuān)瞥珊繛?.16 mg/mL的對(duì)照品溶液，備用。

3.1.2供試品溶液制備

按照表2組方，遵循古籍方法：取金銀花11.19g、野菊花、蒲公英、紫花地丁、天葵子各4.48 g浸泡30min，加400 mL水文火煎煮20 min，放入100 mL黃酒武火煎煮5 min，用300目尼龍布過(guò)濾，藥渣按同法再次煎煮，將2次煎液合并，用水定容至800 mL，共15批水煎液。分別取10 mL，通過(guò)0.22μm微孔濾膜進(jìn)行過(guò)濾，備用。

表2 15批方劑藥材信息

3.2 色譜條件

色譜柱：Welch UItimate XB-C18（4.6mm×250 mm，5μm）。

流動(dòng)相：0.5%醋酸水溶液-甲醇梯度洗脫（0～10 min，10%～32%甲 醇；10～20 min，32%甲 醇；20～35 min，32%～46%甲醇）。

柱溫：30℃。

流速：1.0 mL/min。

檢測(cè)波長(zhǎng)：320 nm。

進(jìn)樣量：10μL。

3.3 檢測(cè)波長(zhǎng)選擇

將一定濃度對(duì)照品溶液于波長(zhǎng)200～400 nm進(jìn)行全波段掃描，結(jié)果表明在320 nm處有最大吸收。

3.4 線(xiàn)性關(guān)系

精確量取菊苣酸對(duì)照品貯備液，分別稀釋成2、4、8、16、32倍，充分搖勻，即得含量為1.16、0.58、0.29、0.145、0.0725、0.03625 mg/mL的對(duì)照品溶液，各進(jìn)樣10μL，注入液相色譜儀中按“3.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定。

以菊苣酸對(duì)照品測(cè)得的峰面積值為縱坐標(biāo)，對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，進(jìn)行線(xiàn)性回歸分析，得回歸方程為：

結(jié)果顯示，菊苣酸在0.0725～1.16 mg/mL內(nèi)呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。

3.5 精密度試驗(yàn)

精確量取供試品溶液，按3.2色譜條件測(cè)定，按“3.2”項(xiàng)下色譜條件重復(fù)進(jìn)樣測(cè)定6次，測(cè)得菊苣酸的峰面積并計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為2.85%，結(jié)果顯示其精密度良好。

3.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取同批五味消毒飲6份，于3.2色譜條件下對(duì)溶液的菊苣酸含量進(jìn)行HPLC測(cè)定，結(jié)果顯示菊苣酸的平均含量為0.0670 mg/mL，且在0.0662～0.0681 mg/mL內(nèi)，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為1.17%（n=6），表明有良好的重復(fù)性。

3.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一份供試品溶液，分別在0、2、4、8、12、16 h于3.2色譜條件下進(jìn)樣，結(jié)果表明含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=1.93%（n=6），表明在12 h內(nèi)供試品溶液中菊苣酸的含量基本穩(wěn)定。

3.8 加樣回收率試驗(yàn)

取同一份供試品溶液進(jìn)行6次回收率試驗(yàn)，對(duì)照品加入量中的菊苣酸的含量和樣品中的菊苣酸含量之和在規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)線(xiàn)性范圍內(nèi)，結(jié)果表明6次同一供試品溶液中測(cè)得菊苣酸的平均回收率為100.2%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為1.58%（n=6），測(cè)得結(jié)果在規(guī)定范圍內(nèi)，表明該方法可行。

3.9 樣品含量測(cè)定

對(duì)15批樣品按3.2的色譜條件進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果表明15批五味消毒飲中菊苣酸的含量稍有不同，但RSD值較小，表明該方法穩(wěn)定可行，見(jiàn)表3。

表3 五味消毒飲含量測(cè)定結(jié)果

4 討論

五味消毒飲為《古代經(jīng)典名方目錄（第一批）》收錄，方中銀花清熱解毒，消散癰腫；紫花地丁、蒲公英、野菊花，紫背天葵子清熱解毒，涼血消腫[2]。目前并沒(méi)有關(guān)于菊苣酸含量測(cè)定的相關(guān)研究，為確定蒲公英在處方中的含量，本文根據(jù)測(cè)定蒲公英菊苣酸的含量可以測(cè)定蒲公英含量的思路，通過(guò)試驗(yàn)，建立了測(cè)定五味消毒飲中菊苣酸的方法。本文采用Welch UItimate XB-C18色譜柱，0.5%醋酸水溶液-甲醇為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為320 nm測(cè)定五味消毒飲中菊苣酸的含量，菊苣酸濃度的線(xiàn)性關(guān)系良好；精密度、重現(xiàn)性、穩(wěn)定性、試驗(yàn)結(jié)果良好；且供試品按照《古代經(jīng)典名方中藥復(fù)方制劑及其物質(zhì)基準(zhǔn)申報(bào)資料要求（征求意見(jiàn)稿）》要求采用遵古的原則按照古籍的方法進(jìn)行提取，該方法可為五味消毒飲的質(zhì)量控制提供參考。