陳麗梅，王 慧，張高傳，劉紅寧＊＊

（1.江西中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)基礎(chǔ)理論分化發(fā)展研究中心 南昌 330004；2.江西省中醫(yī)病因生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 南昌 330004；3.江西中醫(yī)藥大學(xué)高等研究院 南昌 330004）

艾灸是艾絨燃燒作用于機(jī)體特定的穴位，通過(guò)光、熱、芳香效應(yīng)及燃燒灰燼等綜合作用，通過(guò)對(duì)機(jī)體的血液運(yùn)行[1-5]、神經(jīng)內(nèi)分泌功能[6]、能量變化[7]、抗自由基[8]等作用調(diào)節(jié)機(jī)體的生理和心理，起到保健和治療疾病的功能。艾絨燃燒時(shí)會(huì)釋放出遠(yuǎn)紅外和近紅外光譜，遠(yuǎn)紅外主要通過(guò)傳導(dǎo)擴(kuò)散熱量，近紅外可直接穿透到機(jī)體深層組織，使組織電子發(fā)生遷移，在這個(gè)過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生大量的能量，同時(shí)將能量從一處傳到另一處，為細(xì)胞代謝和免疫功能提供能量基礎(chǔ)。研究發(fā)現(xiàn)，適宜溫度刺激可提高內(nèi)皮細(xì)胞能量物質(zhì)，提升其生長(zhǎng)活力[9]，說(shuō)明艾灸可引起細(xì)胞的能量變化。而能量代謝是機(jī)體物質(zhì)代謝的基本形式，是維持機(jī)體生命活動(dòng)的物質(zhì)基礎(chǔ)。足三里穴為足陽(yáng)明胃經(jīng)的合穴，胃經(jīng)氣血在此處形成較大的氣血場(chǎng)，具有燥化脾濕，生發(fā)胃氣之效。以前的臨床和實(shí)驗(yàn)研究都是以疾病為載體，然而艾灸足三里除了可以作用于疾病狀態(tài)，對(duì)正常機(jī)體也有益處。我們想知道艾灸足三里后，其對(duì)正常大鼠胃組織能量相關(guān)因子的影響，以及影響能量代謝的相關(guān)代謝物基礎(chǔ)，同時(shí)為艾灸溫?zé)崽匦蕴峁├碚撘罁?jù)。干姜，性熱，主入脾胃經(jīng)，具有補(bǔ)脾陽(yáng)作用。研究發(fā)現(xiàn)，熱性中藥可增強(qiáng)機(jī)體能量代謝[10-11]。本文通過(guò)比較艾灸 “足三里” 和干姜對(duì)胃組織能量代謝作用機(jī)制差異，來(lái)窺探體外艾灸補(bǔ)陽(yáng)和口服藥物補(bǔ)陽(yáng)之間的異同。代謝組學(xué)是系統(tǒng)生物學(xué)的重要分支，可從整體上反映機(jī)體的受外部刺激后，機(jī)體出現(xiàn)的微妙代謝變化。故本文采用代謝組學(xué)的技術(shù)，探討艾灸足三里穴和干姜對(duì)胃組織能量代謝的影響及其作用機(jī)制。

1 方法

1.1 干姜提取液的制備

稱取干姜1 kg，加10倍量純凈水浸泡60 min，快速加熱至微沸后開(kāi)始計(jì)時(shí)，加熱回流提取1 h，過(guò)濾，剩余藥渣加入8倍量純凈水加熱至微沸后繼續(xù)加熱回流40 min，合并2次濾液，真空濃縮至1 g·mL-1，-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健 康Sprague Dawley（SD）大 鼠24只（Specific pathogen Free，SPF級(jí)），雄性，體質(zhì)量（160±20）g，購(gòu)自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK（湘）2016-0002。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)條件：SPF級(jí)動(dòng)物房，相對(duì)濕度為55%-65%，溫度在（24±2）℃，照明條件為光照-黑暗交替各12 h，自由飲水。艾條（艾絨比8∶1，直徑8 mm）購(gòu)于江西鄱艾生物科技有限公司。普通飼料購(gòu)于江西中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物中心。大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，將大鼠隨機(jī)分為3組，分別為空白對(duì)照組、艾灸足三里組、干姜組。艾灸組將大鼠固定在大鼠固定器上，根據(jù)大鼠喜暗的習(xí)性，蒙住大鼠的雙眼，以便減少運(yùn)動(dòng)。艾灸雙側(cè)足三里，每天1次，每次 15 min，并灌胃生理鹽水，連續(xù)4周；干姜組每天灌胃生藥1.05 g·kg-1的干姜水提液，并除了不艾灸，其他過(guò)程和艾灸組一樣，對(duì)照組除了不艾灸，其他過(guò)程均與艾灸組和干姜組一致。

1.3 樣品的收集

實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，大鼠禁食不禁水12 h。大鼠麻醉后，腹主動(dòng)脈取血，將血液在室溫下靜置2 h-3 h，4℃條件下3500 rpm離心10 min。取血結(jié)束后，取胃組織，放入液氮中猝滅，然后轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱保存，備用。每個(gè)實(shí)驗(yàn)指標(biāo)均選取同一部位的組織進(jìn)行檢測(cè)。

1.4 大鼠胃組織Na+-K+-ATP、Ca2+-ATP、Mg2+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶、SDH活性的測(cè)定

準(zhǔn)確稱取0.1 g胃組織，加入9倍量的生理鹽水，制成10%的勻漿液，1500 rpm離心10 min，取上清液按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。

1.5 體質(zhì)量變化和體溫變化

稱量實(shí)驗(yàn)前和實(shí)驗(yàn)結(jié)束后所有大鼠的重量及測(cè)量實(shí)驗(yàn)前后肛溫。

1.6 肝腎功能的影響

按照試劑盒說(shuō)明書檢測(cè)大鼠血清AST、ALT、Cr、BUN、UA。試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.7 代謝組學(xué)樣品的處理

將血清從-80℃冰箱中取出，在4℃條件下解凍。取50μL血清，加入150μL甲醇，渦旋2 min使其完全混勻，在低溫下放置3 h。然后，將血清在4℃條件下以15000 rpm離心10 min，吸取上清液并離心濃縮使其干燥。將殘?jiān)眉状肌盟?（15∶85）溶解，混勻。取上清液用于UHPLC-Q-TOF/MS分析。從每個(gè)樣品中取出10μL，并混合在一起作為質(zhì)量控制樣品，每5個(gè)樣品注入一針質(zhì)控樣品以監(jiān)控整個(gè)實(shí)驗(yàn)。LC-MS的總離子色譜法在正負(fù)掃描模式下進(jìn)行。

1.7.1 色譜條件

ACQUITY UOLCBEH C18（1.7μm，2.1 mm×5 mm，Waters公司），使用Agilent 1200 System（美國(guó)安捷倫）進(jìn)行色譜分離。自動(dòng)進(jìn)樣器保持在4℃，色譜柱溫度在35℃。流速保持在0.3 mL·min-1。UPLC流動(dòng)相由0.1%的甲酸水溶液（溶劑A）和乙腈（溶劑B）組成。梯度洗脫的步驟如下：0 min-6 min，2%-20%B；6 min-8 min，20%-40%B；8 min-12 min，40%-67%B；12 min-22 min，67%-100%B；22 min-23 min，100%-2%B，23 min-24 min，2%-2%B。

1.7.2 質(zhì)譜條件

Agilent 6538飛行時(shí)間質(zhì)譜儀對(duì)血清樣品進(jìn)行正負(fù)離子模式分析。采用Dual ESI源，正負(fù)離子源模式下：毛細(xì)血管電壓（Capillary voltage）4000 V（正模式），3500 V（負(fù)模式）；霧化器壓力30 psig；干燥氣流10 L·min-1；干燥氣溫度300℃，碎片電壓（Fragmentor）175 V；錐孔電壓65 V，儀器采用參比自動(dòng)校正，參比液速度為55 ul·min-1，參比離子質(zhì)荷比為121.05973和922.09798。

1.7.3 數(shù)據(jù)采集和數(shù)據(jù)分析

運(yùn)用Profinder B.0 6.0對(duì)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)處理，首先采用無(wú)監(jiān)督的主成分分析（Principal component analysis，PCA）對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，進(jìn)行Student’st-檢驗(yàn)和方差分析以及數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換分析（FC），滿足P<0.05且FC>2的變量作為潛在生物標(biāo)志物。如果PCA分析分離不好，則選擇PLS-AD進(jìn)行分析，將VIP>1、P<0.05和FC>2作為生物標(biāo)志物的篩選條件。

將分析得到的分子量和保留時(shí)間，結(jié)合METLIN（http://www.metlin.scipps.edu）、HMDB（www.hmdb.ca）等數(shù)據(jù)庫(kù)，對(duì)化合物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定，將最終得到的鑒定物輸入 MetaboAnalyst 4.0（http://www.metaboanalyst.ca/faces/ModuleView.xhtmL）分析平臺(tái)進(jìn)行代謝通路分析。

1.8 統(tǒng)計(jì)分析

使用SPASS17.0統(tǒng)計(jì)軟件，通過(guò)單因素方差分析（ANOVA）對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，P<0.05被認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。所用數(shù)據(jù)均用±s表示。

2 結(jié)果

2.1 體質(zhì)量、體溫變化

與空白對(duì)照組相比，艾灸足三里組和干姜組大鼠的體溫沒(méi)有顯著性變化（P>0.05），體質(zhì)量顯著下降（P<0.01）（表1）。

表1 艾灸足三里大鼠體質(zhì)量體溫變化(n=8,xˉ±s)

2.2 艾灸足三里和干姜水提液對(duì)肝腎功能的影響

結(jié)果顯示，與空白組對(duì)照組相比，艾灸足三里組及干姜組大鼠ALT、AST、UA、BUN、Cr沒(méi)有顯著性變化（P>0.05），說(shuō)明連續(xù)艾灸足三里及給予干姜水提液對(duì)正常大鼠的肝腎功能沒(méi)有顯著影響（表2）。

表2 艾灸足三里和干姜水提液對(duì)肝腎功能影響(n=8,xˉ±s)

2.3 艾灸足三里和干姜水提液對(duì)胃ATP酶活性、SDH活性的影響（n=8，xˉ±s）

與空白對(duì)照組相比，艾灸足三里組能提高正常大鼠胃Na+-K+-ATP酶，Mg2+-ATP酶，Ca2+-ATP酶，Ca2+-Mg2+-ATP酶活性，且都達(dá)到顯著水平（P<0.01）。干姜組大鼠Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶沒(méi)有顯著性差異（P>0.05），可顯著提高M(jìn)g2+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性（P<0.01）。說(shuō)明艾灸足三里和給予干姜水提取液后，大鼠的能量消耗增加。

同時(shí)，與空白對(duì)照組相比，艾灸組和干姜組大鼠胃組織SDH活性也顯著提高（P<0.01）。（圖1）。由結(jié)果可知，艾灸 “足三里” 和給予干姜水提液既增加大鼠的能量消耗也增加了能量生產(chǎn)，影響機(jī)體的能量代謝。

圖1 艾灸組及干姜組對(duì)胃ATP酶、SDH活性的影響

2.4 艾灸足三里和干姜水提液對(duì)大鼠血清代謝模式的影響

PCA結(jié)果顯示，艾灸足三里組和干姜組在正離子模式下兩組代謝物分離的較好，組內(nèi)聚集程度較好，說(shuō)明艾灸 “足三里” 及灌胃干姜水提液后大鼠的內(nèi)源性物質(zhì)與正常對(duì)照組相比發(fā)生了顯著性的變化。負(fù)離子模式下，兩組代謝物分離不是很好，故對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行PLS-DA分析，在PLS-DA模式下，兩組代謝物分離效果較好（圖2、圖3）。

圖2 艾灸足三里組代謝模式圖

圖3 干姜組代謝模式圖

2.5 潛在生物標(biāo)志物的篩選及鑒定

通過(guò)代謝物精確的質(zhì)荷比和同位素比例，從正離子模式下提取m/z 544.3401的離子，得到相應(yīng)的保留時(shí)間和色譜峰，通過(guò)分子特征提取，分子式在MassHunter中得分比較高，在二級(jí)質(zhì)譜中主要有m/z 86.0980、m/z 184.0751、m/z 258.1111、m/z 287.2373、m/z 361.2758、m/z 526.3298的碎片，通過(guò)HMDB數(shù)據(jù)庫(kù)鑒定內(nèi)源性代謝物，將二級(jí)質(zhì)譜的碎片與HMDB數(shù)據(jù)庫(kù)的碎片進(jìn)行匹配，發(fā)現(xiàn)與2-花生四烯酸甘油磷酸膽堿的標(biāo)準(zhǔn)化合物圖譜最吻合，因此被鑒定為2-花生四烯酸甘油磷酸膽堿（圖4）。用上述方法最后鑒定了艾灸 “足三里” 后有5個(gè)潛在生物標(biāo)志物，分別為N-乳代亮氨酸、2-花生四烯酸甘油磷酸膽堿、PC(20:2(11Z,14Z)/14:0)、異亮氨酸、D-谷氨酰胺，其中異亮氨酸、N-乳酸酰亮氨酸、D-谷氨酰胺含量下降，2-花生四烯酸甘油磷酸膽堿、PC(20:2(11Z,14Z)/14:0)含量升高。給予干姜提取液后有5個(gè)潛在生物標(biāo)志物，分別為黃嘌呤、視黃酯、2-花生四烯酰甘油磷酸膽堿、花生四烯酸、3-羥膽酸，其中2-花生四烯酰甘油磷酸膽堿含量升高，視黃酯、花生四烯酸、嘌呤含量下降。

圖4 2-花生四烯酸甘油磷酸膽堿二級(jí)質(zhì)譜圖

2.6 生物標(biāo)記物代謝通路分析

將已鑒定的生物標(biāo)記物導(dǎo)入MetaboAnalys 4.0進(jìn)行Pathway Analysis分析，結(jié)果顯示，艾灸足三里穴涉及的代謝通路包括D-谷氨酰胺和D-谷氨酸代謝，亞油酸代謝、α-亞麻酸代謝，纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸的生物合成和降解、甘油磷脂代謝、花生四烯酸代謝、氨?；?tRNA的生物合成，其中纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸的生物合成，甘油磷脂代謝為主要的代謝途徑。給予干姜水提液涉及的代謝通路為視黃醇代謝、花生四烯酸代謝、嘌呤代謝、不飽和脂肪酸代謝的生物合成（圖5）。

圖5 對(duì)機(jī)體代謝途徑的影響

3 討論

在特定穴位上艾灸會(huì)出現(xiàn)明顯的溫度傳導(dǎo)，如果穴位局部溫度升高，熱量會(huì)在血液中傳遞[12]，推測(cè)艾灸可能是通過(guò)加熱補(bǔ)充細(xì)胞的能量。盧圣鋒等認(rèn)為，艾灸在引起組織溫度變化的過(guò)程，實(shí)際上就是能量傳遞的過(guò)程[13]。從整體觀上來(lái)說(shuō)，能量代謝是生命系統(tǒng)的基本過(guò)程，而熱是能量代謝的重要表現(xiàn)形式[14]。能量代謝包括能量的產(chǎn)生和利用兩方面。ATP（腺苷三磷酸）酶與能量的利用有密切的關(guān)系[15]。細(xì)胞膜兩側(cè)的離子濃度及離子轉(zhuǎn)運(yùn)需要利用能量來(lái)維持，ATP酶活性升高的同時(shí)也增加ATP的利用。艾灸足三里和給藥干姜均可提高胃的ATP酶活性，說(shuō)明體外輸入熱量和口服熱性干姜均可增加機(jī)體胃組織能量消耗。SDH（琥珀酸脫氫酶）是三羧酸循環(huán)中的重要的酶，其活性升高說(shuō)明三羧酸循環(huán)加快，能量生成升高。艾灸足三里和給藥熱性中藥干姜后，SDH活性升高，說(shuō)明兩種方式均能促進(jìn)機(jī)體三羧酸循環(huán)，使機(jī)體能量產(chǎn)生增加。

代謝組學(xué)結(jié)果顯示，艾灸足三里主要通過(guò)氨基酸代謝、脂質(zhì)代謝來(lái)影響胃的能量代謝。N-乳代亮氨酸是苯丙氨酸的乳酰基衍生物，是乳酸和亮氨酸通過(guò)逆蛋白水解快速形成，其在血清內(nèi)水平與乳酸和亮氨酸的水平強(qiáng)烈相關(guān)。亮氨酸和異亮氨酸屬于支鏈氨基酸，是潛在的營(yíng)養(yǎng)信號(hào)分子。亮氨酸可調(diào)節(jié)糖代謝、脂肪合成與分解，提高胰島素敏感性，促進(jìn)能量代謝[16-18]，參與機(jī)體產(chǎn)熱等重要的生物學(xué)過(guò)程。研究表明，脂肪組織通過(guò)改變GLUT4（葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4）表達(dá)而引起支鏈氨基酸酶表達(dá)變化，和協(xié)同分解循環(huán)BCAA（支鏈氨基酸），從而能夠調(diào)節(jié)支鏈氨基酸的水平[19]。在健康的大鼠中，支鏈氨基酸吸收和氧化發(fā)生在多個(gè)不同的組織[20]，其一旦進(jìn)入細(xì)胞，BCAA既可以儲(chǔ)存在氨基酸池，也可以被整合到蛋白之中，或者被送到線粒體中進(jìn)行氧化，也可用于合成酮體和葡萄糖。BCAA在BCATc（胞質(zhì)支鏈轉(zhuǎn)氨基轉(zhuǎn)移酶）和BCATm（線粒體支鏈氨基轉(zhuǎn)移酶）的催化下發(fā)生可逆的轉(zhuǎn)胺反應(yīng)生成BCKAs（支鏈α-酮酸）。BCAT（支鏈氨基轉(zhuǎn)移酶）的表達(dá)受到轉(zhuǎn)錄因子KLF15（糖皮質(zhì)激素激活）和PGC-1α（過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體-γ共激活因子-1α）的調(diào)控。BCKAs進(jìn)入多亞基酶復(fù)合物BCKDH（支鏈酮酸脫氫酶）氧化反應(yīng)，該酶的亞基BCKDHA和BCKDHB受PGC1-a和PPAR（過(guò)氧化物酶體增殖劑激活受體）家族蛋白的正向調(diào)節(jié)。線粒體解偶聯(lián)蛋白2和解偶聯(lián)蛋白3正向調(diào)節(jié)BCAAs[21]。BCAT催化氨基從BCAAs轉(zhuǎn)移到α-酮戊二酸形成谷氨酸，然后與丙酮酸結(jié)合，通過(guò)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶生成丙氨酸，參與到TCA循環(huán)中。BCAA的水平會(huì)影響TCA（三羧酸循環(huán)）循環(huán)的中間體，從而影響能量代謝。另一方面，支鏈氨基酸在酮酸脫氫酶的催化下形成BCacyl CoA（支鏈酰基輔酶A），通過(guò)琥珀酰輔酶A參與TCA循環(huán)，影響機(jī)體的能量代謝[22]（圖6）。本實(shí)驗(yàn)中，支鏈氨基酸含量下降，可能在艾灸過(guò)程中有更多的支鏈氨基酸作為底物形成生酮參與到TCA循環(huán)中，調(diào)節(jié)組織能量代謝。此外，BCKDH表達(dá)減少與體重和肥胖呈顯著負(fù)相關(guān)[21]。艾灸胃經(jīng)后支鏈氨基酸，乳酸含量降低揭示艾灸可能促進(jìn)胃組織細(xì)胞有氧氧化，相對(duì)減少無(wú)氧糖酵解而提高機(jī)體能量代謝。

圖6 BCAA及其分解代謝酶與營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及代謝途徑的相互作用

谷氨酰胺是人體中含量比較多的氨基酸，它是神經(jīng)系統(tǒng)中谷氨酸類神經(jīng)遞質(zhì)的前體[23,24]，可增加腸道血流量和耗氧量，對(duì)維持胃腸黏膜的完整性發(fā)揮重要的作用[25]。研究發(fā)現(xiàn)，在正常和缺氧條件下，谷氨酰胺驅(qū)動(dòng)的氧化磷酸化是轉(zhuǎn)化為哺乳動(dòng)物ATP的主要來(lái)源[26]。谷氨酰胺可用于生產(chǎn)煙酰胺、腺苷磷酸、核苷酸、嘌呤、抗氧化劑以及維持細(xì)胞的完整性。機(jī)體在營(yíng)養(yǎng)不良、體育鍛煉恢復(fù)等分解代謝條件下，利用谷氨酰胺的比率高于或等于葡萄糖的比率[27,28]。人體內(nèi)谷氨酰胺通過(guò)激活細(xì)胞外信號(hào)激酶和C-Jun末端激酶來(lái)調(diào)控免疫細(xì)胞的增殖[29]，如白細(xì)胞利用谷氨酰胺作為能量底物，參與組織的修復(fù)過(guò)程[30]。在中性粒細(xì)胞中，谷氨酰胺對(duì)于避免中性粒細(xì)胞中NADPH（還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷）氧化酶活性的改變和腎上腺素引起的過(guò)氧化物酶的產(chǎn)生具有重要意義[31]。谷氨酰胺代謝過(guò)程中產(chǎn)生的TCA循環(huán)代謝物，如檸檬酸、琥珀酸、富馬酸等，在適應(yīng)性和先天性免疫中參與炎癥控制和內(nèi)在免疫反應(yīng)[30]。研究發(fā)現(xiàn)，以自然殺傷細(xì)胞系（NK-92）為培養(yǎng)對(duì)象，加入一定濃度谷氨酰胺后，培養(yǎng)一段時(shí)間后，谷氨酰胺濃度顯著下降，NK-92顯著擴(kuò)增且促進(jìn)胞內(nèi)ATP生成[32]。艾灸足三里4周后，谷氨酰胺含量下降，可能是谷氨酰胺作為底物，通過(guò)谷氨酰胺和谷氨酸代謝通路參與到TCA循環(huán)中，為機(jī)體ATP合成和消耗及提升機(jī)體免疫提供物質(zhì)基礎(chǔ)。

2-花生四烯酸甘油磷酸膽堿是甘油磷酸膽堿家族成員，甘油磷酸膽堿（GPC）是卵磷脂分解而來(lái)[33]，由磷?；?、甘油和膽堿組成[34,35]，它不僅是磷脂代謝的中間產(chǎn)物，而且是合成磷脂酰膽堿和乙酰膽堿的前體物質(zhì)。研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)機(jī)體使用儲(chǔ)存的脂肪作為能量來(lái)源時(shí)，甘油會(huì)被釋放到血液中，然后轉(zhuǎn)化葡萄糖，為細(xì)胞的新陳代謝提供能量[36]。膽堿是一種重要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，有助于維持細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的完整性、甲基代謝、跨膜信號(hào)、脂-膽固醇運(yùn)輸和代謝以及正常大腦的發(fā)育[37]。研究發(fā)現(xiàn)，GPC攝入有助于衰老相關(guān)的現(xiàn)象（味覺(jué)敏感性和能量調(diào)節(jié)），同時(shí)對(duì)脂質(zhì)代謝產(chǎn)生積極的影響[38]。本實(shí)驗(yàn)研究，艾灸足三里可增加2-花生四烯酸甘油磷酸膽堿含量，提示艾灸足三里調(diào)節(jié)能量代謝和發(fā)揮其延緩衰老作用可能與脂質(zhì)代謝相關(guān)。

熱性中藥干姜主要通過(guò)視黃醇代謝、脂質(zhì)代謝和嘌呤代謝通路影響胃的能量代謝。影響視黃醇代謝的差異代謝物為視黃酯，其在一定條件下可分解為視黃醇和視黃酸。研究發(fā)現(xiàn)，視黃醇（維生素A）是激活線粒體蛋白激酶C（Protein kinase C，PKC）的重要輔助因子[39]，結(jié)合位點(diǎn)定位于Raf和蛋白激酶C家族的調(diào)控域，特別是鋅指結(jié)構(gòu)域，也包含他們的激活中心，其通過(guò)氧化還原作用激活PKC，蛋白激酶被激活后一方面通過(guò)增加乙酰輔酶A（acetyl-CoA）的產(chǎn)量，進(jìn)而刺激PDH（丙酮酸脫氫酶）復(fù)合物[40-41]，增加丙酮酸的利用率[42]，從而促進(jìn)線粒體內(nèi)氧化磷酸化，導(dǎo)致線粒體耗氧量和ATP合成增加；另一方面維生素A線粒體中其電子載體的作用，與PKC（蛋白激酶）結(jié)合后可以加快電子的傳遞，進(jìn)而促進(jìn)氧化磷酸化進(jìn)程。在本實(shí)驗(yàn)中，視黃酯含量下降，推測(cè)視黃酯可能通過(guò)自身消耗，促進(jìn)線粒體氧化磷酸化過(guò)程。影響脂質(zhì)代謝的差異代謝物花生四烯酸?；ㄉ南┧峥赏ㄟ^(guò)PKC/AMPK信號(hào)傳導(dǎo)激活脂肪細(xì)胞，降低脂肪水平。影響嘌呤代謝的差異代謝物是黃嘌呤。黃嘌呤是黃嘌呤氧化酶氧化次黃嘌呤的產(chǎn)物之一。體內(nèi)90%的次黃嘌呤可以通過(guò)修復(fù)作用再利用形成次黃嘌呤核苷酸。嘌呤核苷酸循環(huán)可通過(guò)提高AMP（一磷酸腺苷）活性、脫氨和參與三羧酸循環(huán)來(lái)調(diào)節(jié)能量代謝[43]。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)黃嘌呤含量下降，推測(cè)可能次黃嘌呤通調(diào)節(jié)TCA循環(huán)來(lái)影響能量代謝。

本研究發(fā)現(xiàn)，體外艾灸 “足三里” 和口服熱性中藥干姜均可影響胃組織的能量代謝。艾灸可提高正常大鼠的能量代謝相關(guān)因子的活性，體現(xiàn)了艾灸的溫?zé)崽匦约把a(bǔ)陽(yáng)特點(diǎn)。其影響這些特性的機(jī)制主要是通過(guò)調(diào)節(jié)氨基酸代謝，脂質(zhì)代謝，其中氨基酸代謝主要是通過(guò)相關(guān)的物質(zhì)生成生酮，進(jìn)而參與到三羧酸循環(huán)中去，從而影響能量的代謝。熱性中藥干姜主要通過(guò)視黃醇代謝、脂質(zhì)代謝、嘌呤代謝調(diào)節(jié)能量代謝。