肖安菊，龔達(dá)林，劉三波，余 浩，喻 昕

（1.湖北理工學(xué)院醫(yī)學(xué)院，湖北 黃石 435003；2.華潤(rùn)三九（黃石）藥業(yè)有限公司，湖北 黃石 435004）

雷公藤片、雷公藤多苷片為衛(wèi)矛科木質(zhì)藤本植物雷公藤（Tripterygium wilfordiiHook.f.）的根或根的去皮部位經(jīng)醋酸乙酯提取后制成的片劑。原藥品標(biāo)準(zhǔn)采用中性氧化鋁柱純化后［1］，采用HPLC法測(cè)定雷公藤片中雷公藤甲素的含量。大多數(shù)有關(guān)雷公藤藥材或制劑中主要成分含量測(cè)定也較多采用中性氧化鋁柱或硅膠柱純化方法［2-4］。為有效地控制雷公藤半成品、制劑的質(zhì)量，建立了SPE-HPLC法同時(shí)測(cè)定雷公藤片中雷公藤甲素、雷公藤紅素、去甲澤拉木醛和雷公藤內(nèi)酯甲的含量，經(jīng)檢測(cè)其分離較好、檢測(cè)靈敏度高，可作為雷公藤半成品、制劑的質(zhì)量控制方法。

1 材料與方法

1.1 藥品

雷公藤半成品（干浸膏、三批）、雷公藤片（批號(hào)18080022、19010012、1910001Z）均由華潤(rùn)三九（黃石）藥業(yè)有限公司提供；雷公藤多苷片購(gòu)自浙江德恩得制藥有限公司（批號(hào)1901114B、1903126B、1903127B），江蘇美通制藥有限公司（批號(hào)190202、171201、190403），上海復(fù)旦復(fù)華藥業(yè)有限公司（批號(hào)160703、180803、190102）。

1.2 試劑

甲醇（HPLC級(jí)）、乙腈（HPLC級(jí)）、磷酸（HPLC級(jí)），德國(guó)Fisher公司；三乙胺（HPLC級(jí)），德國(guó)默克公司；雷公藤甲素（111567-201404，ID：H6RJ-8PRY）、雷公藤紅素（111946-201501，ID：YD5C-3WSR），中國(guó)食品藥品檢驗(yàn)研究院；去甲澤拉木醛（CAS：107316-88-1，Lot：AF8121402）、雷公藤內(nèi)酯甲（CAS：84104-71-2，Lot：AF8010505）標(biāo)準(zhǔn)品，成都埃法生物科技有限公司；甲醇（分析純），上海展云化工有限公司。

1.3 儀器

UltiMate3000型高效液相色譜儀（包括四元泵、全自動(dòng)進(jìn)樣儀、DAD檢測(cè)器，美國(guó)Thermo Scientific公司），NAI-FXCQY-24型固相萃取儀（上海那艾精密儀器有限公司），BRP型固相萃取柱（月旭科技（上海）股份有限公司），SB-25-12DT型超聲波清洗機(jī)（寧波新芝生物科技股份有限公司），RE-3000A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠），F(xiàn)A2204C型萬分之一電子天平（上海越平科學(xué)儀器制造有限公司），MS205DU型十萬分之一電子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）。

1.4 方法

1.4.1 色譜條件 色譜柱Kromecil C18柱，柱溫30℃，流速1 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)218、410、210 nm，流動(dòng)相見表1。

表1 雷公藤半成品、制劑使用的流動(dòng)相

1.4.2 供試品溶液的制備

1）雷公藤半成品供試液的制備。精密稱取干浸膏0.05 g，加甲醇8 mL，30℃超聲20 min使溶解，加100μL三乙胺，加甲醇溶液定容。過BRP柱［5］（預(yù)先用3 mL甲醇溶液和3 mL水活化），用10 mL乙酸乙酯∶甲醇混合液（10∶5）洗脫，洗脫液40℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干燥，甲醇溶解，于10 mL容量瓶中定容，即得供試品溶液。

2）雷公藤制劑供試液的制備。取雷公藤制劑20粒，精密稱重，研磨成細(xì)粉，取0.5 g，精密稱定，濾紙包裹，置于具塞廣口瓶中，加30 mL甲醇溶液，50 Hz超聲30 min，重復(fù)3次，合并提取液，于80℃水浴蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，并?0 mL容量瓶中，加100μL三乙胺，后同雷公藤半成品供試液的制備步驟，即得供試品溶液。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性關(guān)系結(jié)果

分別取適量4種標(biāo)準(zhǔn)品，置于4個(gè)10 mL容量瓶中，加入甲醇溶液分別制成濃度為0.099 0 mg/mL雷公藤甲素、0.995 0 mg/mL雷公藤紅素、0.214 0 mg/mL去甲澤拉木醛、0.158 0 mg/mL內(nèi)酯甲的單標(biāo)貯備液。分別取各單標(biāo)貯備液適量，梯度濃度稀釋進(jìn)樣檢測(cè)，回歸方程和線性范圍如表2。對(duì)照品及樣品的色譜圖見圖1。

圖1 4種成分對(duì)照品圖譜和樣品圖譜

表2 4種成分的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程及線性范圍

2.2 精密度試驗(yàn)結(jié)果

精密稱定雷公藤多苷片粉末0.5 g進(jìn)行色譜檢測(cè)，連續(xù)進(jìn)樣5次。結(jié)果表明，雷公藤甲素RSD為2.68%、去甲澤拉木醛RSD為1.55%、雷公藤紅素RSD為1.94%、雷公藤內(nèi)酯甲R(shí)SD為3.21%。

2.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

于0、4、8、24、48 h進(jìn)樣測(cè)定5次。結(jié)果表明，雷公藤甲素RSD為5.89%、去甲澤拉木醛RSD為4.36%、雷公藤紅素RSD為2.14%、雷公藤內(nèi)酯甲R(shí)SD為3.27%。

2.4 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

精密稱定6份雷公藤多苷片粉末各0.5 g，按照樣品中雷公藤甲素含量的80%、100%、120%加入4種成分的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（含雷公藤甲素0.100 8 mg/mL、雷公藤紅素0.194 2 mg/mL、去甲澤拉木醛0.195 2 mg/mL、雷公藤內(nèi)酯甲0.051 9 mg/mL）進(jìn)樣檢測(cè)，結(jié)果見表3。

表3 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

2.5 樣品含量測(cè)定結(jié)果

2.5.1 雷公藤半成品含量測(cè)定 精密稱定3份雷公藤干浸膏各0.05 g，進(jìn)樣檢測(cè)，結(jié)果見表4。

表4 雷公藤浸膏中4種成分含量測(cè)定結(jié)果（單位：mg/g）

2.5.2 雷公藤制劑含量測(cè)定 分別稱取3份雷公藤片、雷公藤多苷片各批號(hào)樣品，進(jìn)樣檢測(cè)，結(jié)果見表5。

表5 雷公藤制劑中4種成分含量測(cè)定結(jié)果 （單位：mg/g）

3 小結(jié)與討論

雷公藤片、雷公藤多苷片使用藥材部位不同（分別是雷公藤根、去皮根），4種成分的含量差異較大，即使是同種產(chǎn)品，不同廠家的產(chǎn)品4種成分之間也有差異。除去甲澤拉木醛毒性相對(duì)較小外［6，7］，其他3種成分都有較強(qiáng)的毒性［8，9］，制劑中僅控制雷公藤甲素的含量，不足以有效控制制劑的不良反應(yīng)。本研究利用固相萃取純化技術(shù)代替了傳統(tǒng)手工純化，重現(xiàn)性更好。省時(shí)省力，可作為雷公藤半成品、制劑的質(zhì)量控制方法。

致謝：特別感謝浙江德恩得制藥有限公司銷售經(jīng)理為本研究提供雷公藤多苷片。