林莉香

在全球女性癌癥患者中，宮頸癌的發(fā)病率及病死率均排名第四[1]，而其在發(fā)展中國家是僅次于乳腺癌的第二大最常見的癌癥[2]。隨著宮頸癌篩查的普及，盡早接受根治性切除術(shù)可極大地改善早期宮頸癌患者的預(yù)后，但中晚期患者接受治療后的生存期仍不理想[3]。因此，有必要鑒定新的生物標記物以改善宮頸癌的診斷和預(yù)后。

SHCBP1（SHC SH2 結(jié)構(gòu)域結(jié)合蛋白1）是一種最早在活化的淋巴細胞中被鑒定的蛋白質(zhì)，可與銜接蛋白SHC 的SH2 結(jié)構(gòu)域相互結(jié)合，可能在調(diào)控細胞周期進程的信號通路中發(fā)揮作用[4]。近年來，越來越多的證據(jù)揭示了SHCBP1 在癌癥進展中的關(guān)鍵作用。例如，SHCBP1 被證實可促進胃癌的生長及侵襲[5]。此外，神經(jīng)膠質(zhì)瘤中SHCBP1 的高表達與患者較差的預(yù)后有關(guān)[6]。然而，尚未有研究報道SHCBP1在宮頸癌中的功能作用。本研究旨在揭示SHCBP1表達與宮頸癌患者預(yù)后的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 臨床病例資料 選取2013 年3 月～2015 年10 月期間于中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院附屬?？卺t(yī)院婦產(chǎn)科行手術(shù)治療，且病理診斷為宮頸癌的病例61例（表1），收集所有病例的癌及癌旁組織樣本并儲存于液氮罐中，所有病例均簽署患者知情同意書。所有病例入院后接受常規(guī)手術(shù)或以手術(shù)為主的綜合治療，術(shù)前均未接受過宮頸癌相關(guān)的手術(shù)治療及放、化療，出院后以電話、短信或查閱病案資料等進行定期隨訪調(diào)查，隨訪截止日期為2020 年10 月。

1.2 總RNA 提取及定量PCR 實驗 將癌與癌旁組織樣本在組織研磨儀（武漢賽維爾生物科技公司）中充分研磨后，利用總RNA 提取試劑盒（北京索萊寶科技公司）提取總RNA。應(yīng)用核酸濃度測定儀（美國Bio-rad 公司）測定RNA 濃度后，再利用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（德國Qiagen 公司）合成cDNA。按比例配制PCR 反應(yīng)體系，置于熒光定量PCR 儀（美國ABI 公司）中擴增40 個循環(huán)。將GAPDH 的mRNA表達水平用于進行標準化，利用2-ΔΔCT法計算相較于癌旁組織，宮頸癌組織中SHCBP1 的mRNA 表達量的相對倍數(shù)。將上述相對倍數(shù)的中位值作為區(qū)分癌組織中SHCBP1 高表達或低表達的界定值。引物由南京金斯瑞生物科技公司合成，具體序列如下：SHCBP1，上游：5′-GCTACCGTGATAAACCAGGTTC-3′，下游：5′-AGGCTCTGAATCGCTCATAGA-3′，GAPDH，上游：5′-TGGAGAAACCTGCCAAGTATG-3′，下游：5′-GGAGACAACCTGGTCCTCAG-3′。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用非參數(shù)檢驗分析兩個獨立組或多個組之間SHCBP1 表達的差異。SHCBP1 表達與臨床病理特征的相關(guān)性采用χ2檢驗。根據(jù)Kaplan-Meier法，并利用GraphPad Prism 7.0 軟件構(gòu)建生存曲線，應(yīng)用Log-rank檢驗進行比較。應(yīng)用Cox回歸分析評估宮頸癌患者預(yù)后因素。統(tǒng)計學(xué)分析均使用SPSS 22.0 軟件進行。P<0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 宮頸癌組織中SHCBP1 的表達情況 結(jié)果顯示與癌旁組織相比，處于不同臨床分期（Ⅰ～Ⅳ期）的宮頸癌組織樣本中，SHCBP1 的mRNA 表達量均顯著增加（P<0.01），并且隨患者臨床分期的增加而增加（圖1A）。此外，相較于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，SHCBP1 在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌患者樣本中的mRNA 表達量顯著增加（P<0.01）（圖1B）。

圖1 宮頸癌組織中SHCBP1 的表達情況

2.2 SHCBP1 表達與臨床病理特征的相關(guān)性 結(jié)果顯示與SHCBP1 表達顯著相關(guān)的包括：組織分化程度（P=0.018）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)（P=0.002）以及臨床分期（P=0.004），而無顯著相關(guān)性的包括：組織學(xué)類型（P=0.612）、年齡（P=0.124）以及腫瘤大?。≒=0.198），詳見表1。

表1 SHCBP1 表達與臨床病理特征的相關(guān)性

2.3 宮頸癌組織中SHCBP1 表達與患者生存期的相關(guān)性 結(jié)果顯示SHCBP1 高表達組的宮頸癌患者的總生存期顯著短于SHCBP1 低表達組（P=0.006），其中位生存期為46 個月（圖2A）。此外，SHCBP1 高表達組的宮頸癌患者的無瘤生存期同樣顯著短于SHCBP1 低表達組（P=0.005），其中位生存期為40個月（圖2B）。

圖2 基于SHCBP1 表達的宮頸癌患者生存分析

2.4 宮頸癌患者預(yù)后因素分析 單因素Cox 回歸分析結(jié)果顯示，顯著影響宮頸癌患者預(yù)后的因素包括：組織分化程度（HR=0.143，P<0.001）、SHCBP1表達水平（HR=2.808，P=0.009）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)（HR=7.350，P<0.001）以及臨床分期（HR=6.434，P<0.001），而無顯著影響的因素包括：腫瘤大?。℉R=0.746，P=0.434）、組織類型（HR=0.459，P=0.445）及年齡（HR=0.566，P=0.146）。進一步的多因素分析結(jié)果顯示，宮頸癌患者預(yù)后的危險因素包括：SHCBP1表達水平（HR=3.325，P=0.027）及臨床分期（HR=5.683，P<0.001），保護因素包括組織分化程度（HR=0.186，P<0.001），而無顯著影響的因素包括淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)（HR=2.135，P=0.107），詳見表2。

表2 Cox 回歸分析宮頸癌患者的預(yù)后因素

3 討論

SHC 是一種細胞表面受體銜接蛋白，可以參與多種因子（如生長因子、細胞因子和整合素等）介導(dǎo)的信號通路，進而可參與調(diào)控細胞的存活、增殖、分化和遷移，并在血管生成和腫瘤發(fā)生中發(fā)揮作用[7]。SHCBP1 可通過與SHC 的SH2 結(jié)構(gòu)域相互結(jié)合而發(fā)揮其生物學(xué)作用[8]。SHCBP1 在胚胎組織中及增殖旺盛的睪丸組織中強烈表達，而在心臟和骨骼肌等靜止組織中呈低表達或不表達，這個結(jié)果提示SHCBP1 可能在細胞增殖的調(diào)控中發(fā)揮關(guān)鍵作用[4]。至今，越來越多的研究結(jié)果表明SHCBP1 在多種癌癥組織（包括食管癌、陰莖癌、肺癌等）中呈現(xiàn)高表達的模式[9-11]。與這些研究結(jié)果一致的是，本研究中我們同樣發(fā)現(xiàn)宮頸癌組織中SHCBP1 的表達顯著上調(diào)。此外，本研究發(fā)現(xiàn)SHCBP1 在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌患者樣本中的表達量同樣顯著增加。并且

在進一步的統(tǒng)計學(xué)分析中，宮頸癌中SHCBP1 表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)之間也被證實呈顯著相關(guān)，這些結(jié)果提示擁有高表達SHCBP1 的宮頸癌患者更容易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。在前期關(guān)于陰莖癌及乳腺癌的研究報道中，SHCBP1 的表達被證實與患者的臨床分期、組織分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)等因素之間顯著相關(guān)[12-13]。此外，與這些結(jié)果一致的是，本研究結(jié)果顯示與宮頸癌中SHCBP1 表達顯著相關(guān)的因素還包括組織分化程度和臨床分期，而不包括組織病理類型、年齡以及腫瘤大小這些因素。然而，在前期關(guān)于甲狀腺乳頭狀癌的研究報道中，SHCBP1 的表達被證實與患者的臨床分期之間無相關(guān)性，而與患者的年齡顯著相關(guān)[14]。這個結(jié)果差異提示在不同種類的癌癥中SHCBP1 的表達模式并不一樣，然而筆者也推測這個結(jié)果差異可能是由于不同研究的偏倚造成的。

前期研究報道SHCBP1 可通過靶向TGF-β1/Smad 信號通路而促進滑膜肉瘤細胞轉(zhuǎn)移，并與患者的預(yù)后不良相關(guān)[15]。此外，SHCBP1 的表達水平還被證實與肺癌、胰腺癌及前列腺癌患者的生存期呈顯著的負相關(guān)[16-18]，提示高表達水平的SHCBP1 可預(yù)示患者預(yù)后不良。在本研究中，生存分析結(jié)果顯示高表達水平的SHCBP1 可顯著縮短宮頸癌患者的總生存期及無瘤生存期，提示SHCBP1 是一個潛在的宮頸癌預(yù)后指標。與單純的對數(shù)秩檢驗相比，Cox回歸分析可用于分析生存時間與多個危險因素的回歸關(guān)系。因此，本研究采用Cox回歸分析進一步評估分析宮頸癌患者的預(yù)后因素。我們的結(jié)果顯示不管是單因素還是多因素分析，SHCBP1 的表達水平及臨床分期均是宮頸癌患者預(yù)后的危險因素，而組織分化程度是其保護因素。這個結(jié)果可為SHCBP1作為一個潛在的宮頸癌預(yù)后指標提供進一步佐證。而我們的結(jié)果同樣顯示，在單因素Cox回歸分析時淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)的風(fēng)險比為7.350，在多因素Cox回歸分析時其風(fēng)險比是2.135，前者具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義，然而后者差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義，提示其可能不是危害宮頸癌患者預(yù)后的因素。然而筆者推測這個結(jié)果可能受到本研究的樣本量較小這個因素的影響。同時，本研究認為樣本量較小是本研究的局限性。

綜上所述，本研究結(jié)果顯示宮頸癌組織中SHCBP1 的表達顯著上調(diào)，且SHCBP1 的表達水平與宮頸癌患者生存期呈顯著的負相關(guān)，提示SHCBP1 是一個潛在的宮頸癌預(yù)后指標。但是，SHCBP1 對宮頸癌細胞增殖等特性的作用及其可能的分子機制尚需進一步的研究。