彭星華，王芳，史帥，秦曉輝，霍艷兵

（河北省邯鄲市第一醫(yī)院 1.普外一科 2.麻醉科，河北 邯鄲 056000）

三陰性乳腺癌（triple-negativebreast cancer,TNBC）占乳腺癌的 15%～20%，是指雌激素受體、孕激素受體和人表皮生長因子受體2均為陰性的乳腺癌[1]。研究[2-3]表明，TNBC較其他類型乳腺癌更易發(fā)生在年輕絕經前女性中，其5年生存率明顯低于非三陰性乳腺癌患者且具有更早出現耐藥、侵襲轉移率高、復發(fā)率高及預后差的特點。

核轉運蛋白karyopherin α2（nuclear transporter karyophenin 2，KPNA2）屬于核運輸信號超家族，是協(xié)助轉錄因子、mRNA、DNA和RNA聚合酶等進出細胞核的重要運載工具，因而在細胞的分化、增殖、凋亡、發(fā)育、遷移及DNA應答和損傷修復過程可發(fā)揮重要作用，但關于三陰乳腺癌的相關研究資料較少[4-5]。本研究探討KPNA2在三陰性乳腺癌患者中的表達特點及與患者遠期預后的關系，旨在為臨床三陰乳腺癌的治療靶點和預后提供數據參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年1月—2020年2月我院保存的三陰性乳腺癌標本60 例以及非三陰性乳腺癌標本59例，同時選取正常乳腺組織50例作為對照（距離腫瘤邊緣≥5 cm），納入標準：⑴均經病理學確診；⑵研究前未行放化療等治療；⑶女性患者；⑷臨床病理資料完整。排除標準：⑴合并有其他系統(tǒng)惡性腫瘤；⑵合并有內分泌疾病等其他嚴重疾病。各組織患者一般資料比較見表1。本次研究獲得醫(yī)院倫理委員會批準，患者知情同意。

表1 各組一般資料比較

1.2 實驗方法

采用免疫組化染色法檢測KPNA2表達：取適量乳腺組織，將中性福爾馬林固定脫水后的石蠟包埋組織連續(xù)切取厚度為3～4 μm的病理切片，晾干后置于75°C烤臺，烘烤20 min，依次經二甲苯脫蠟20 min、無水乙醇X2、95%乙醇X2、85%乙醇X2處理，去離子水清洗后利用檸檬酸高壓修復抗原過氧化氫（3%）阻斷內源化過氧化物酶活性，KPNA2蛋白一抗加入后反應過夜（4℃），二抗30 min孵育（37℃），DAB顯色，蘇木精復染，PBS代替一抗為陰性對照并設立陽性對照。采用雙盲法由2名經驗豐富的臨床病理專家分別進行單獨判斷，KP-NA2指標每張切片共觀察5個視野，每個視野計數200個腫瘤細胞，共計數1000個細胞。計算陽性細胞的占比情況，陽性細胞數≤5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，>50%為3分；＞20%為陽性[6]（圖1）。

圖1 免疫組化染色圖（×400） A：三陰性乳腺癌組織KPNA2 陽性表達；B：非三陰性乳腺癌組織KPNA2 陽性表達；C：正常乳腺組織KPNA2 陰性表達

1.3 隨訪方式

所有三陰性乳腺癌患者采用電話隨訪和門診復診的方式進行隨訪，隨訪時間為3～59個月。

1.4 統(tǒng)計學處理

采用SPSS22.0 軟件，年齡、體質量指數等數據采用均數±標準差的形式表達，KPNA2陽性表達率等數據采用頻數（百分比）形式表達，t檢驗、F檢驗或χ2檢驗分析組間差異；預后曲線采用Kaplan-Meier法描繪，采用Log-rand比較差異；預后多因素分析采用Cox比例風險回歸分析。α=0.05。

2 結果

2.1 各組織KPNA2 表達比較

三陰性乳腺癌組織KPNA陽性表達率明顯高于正常乳腺組織（χ2=23.489，P=0.000<0.05）;與非三陰性乳腺癌組織比較,差異無統(tǒng)計學意義（χ2=0.416，P=0.519＞0.05）（表2）。

表2 各組織KPNA2 表達比較[n（%）]

2.2 KPNA2 表達與三陰性乳腺癌臨床病理特征關系

在三陰性乳腺癌組織中，中低分化、有淋巴結轉移組織KPNA2陽性表達率明顯高于高分化、無淋巴結轉移組織（P<0.05）（表3）。

表3 KPNA2表達與三陰性乳腺癌臨床病理特征關系[n（%）]

2.3 KPNA2 表達與非三陰性乳腺癌臨床病理特征關系

不同非三陰性乳腺癌組織中KPNA2陽性表達率比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）（表4）。

表4 KPNA2表達與非三陰性乳腺癌臨床病理特征關系[n（%）]

2.4 KPNA2 表達與三陰性乳腺癌患者CA125、CEA 關系

KPNA2陽性和陰性表達的三陰性乳腺癌患者血清CA125、CEA比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）（表5）。

表5 KPNA2 表達與三陰性乳腺癌患者CA125、CEA 關系(±s)

表5 KPNA2 表達與三陰性乳腺癌患者CA125、CEA 關系(±s)

KPNA2 表達nCA125（U/mL）CEA（ng/mL）陽性4176.29±24.4932.20±11.12陰性1971.02±30.2235.50±15.50 t 0.719 -0.941 P 0.4750.351

2.5 三陰性乳腺癌組織KPNA2 表達與預后的關系

在三陰性乳腺癌患者中，KPNA2陽性表達患者中位生存總時間為23 個月（95%CI：29.29～32.71），明顯短于KPNA2陰性表達患者31.00個月（95%CI：29.29～32.71），差異有統(tǒng)計學意義（χ2=5.386，P=0.020<0.05）（圖1）。

圖1 KPNA2 陽性及陰性表達者生存曲線圖

2.6 三陰性乳腺癌預后多因素分析

將患者年齡、腫瘤大小、脈管內癌栓、TNM分期、分化程度、淋巴結轉移及KPNA2作為自變量進行Cox比例風險回歸分析顯示：TNM分期、分化程度、淋巴結轉移及KPNA2表達是預后的影響因素（RR=1.863、1.650、1.706和1.508，P<0.05）（表6）。

表6 三陰性乳腺癌預后多因素分析

3 討論

臨床上將HER-2、ER及PR均表達陰性的乳腺癌歸為三陰乳腺癌，與常規(guī)的乳腺癌相比，其具有侵襲能力器及預后較差等特點，患者治療后極易出現遠處轉移和腫瘤復發(fā)，以肝轉移和肺轉移較為多見，而腦轉移是屬于三陰乳腺癌的特征性轉移部位[7-9]。現階段臨床對三陰乳腺癌患者采取的常規(guī)乳腺癌的蒽環(huán)類化療方法療效不佳，且靶向治療和生物內分泌治療也基本無效，這也是導致三陰乳腺癌的臨床預后較差的主要原因[10-12]。

KPNA2一種參與細胞增殖凋亡、分化、免疫反應、轉錄調節(jié)及病毒感染等多種生命活動的核內運輸蛋白[13-14]。多項研究已經證實KPNA2能夠通過調節(jié)腫瘤相關蛋白核轉位參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程[15-16]。本研究發(fā)現三陰性乳腺癌組織KPNA陽性表達率明顯高于正常乳腺組織。上述結果提示三陰性乳腺癌患者存在KPNA2的異常表達。為保證細胞能夠準確開展各項功能工作，決定細胞命運和功能的轉錄因子和mRNA等大分子物質空間定位均需要得到精細調控。而KPNA2作為重要的和運輸蛋白能夠通過識別大分子的核定位信號，參與乳腺癌細胞的增殖和分化過程[17]。

結果顯示，在三陰性乳腺癌組織中，中低分化、有淋巴結轉移組織KPNA2陽性表達率明顯高于高分化、無淋巴結轉移組織。該結果說明KPNA2參與了三陰乳腺癌的轉移過程。相關研究[18]提示KPNA2可參與c-myc、E2F1等多種腫瘤相關因子的核轉運進程而促進腫瘤細胞的侵襲和惡性增殖；另外，KPNA2還可能通過定位和運輸p53的胞漿促進細胞增殖基因表達，進而促進乳腺癌的惡性增殖和侵襲。

大量研究[19-20]提示胃癌、結腸癌、肝細胞癌等多種惡性腫瘤均發(fā)現KPNA2的過度表達，并證實過度表達的KPNA2可能與腫瘤的不良預后存在相關性，可以作為一種患者預后的預測指標，指導治療方案得到選擇。有研究[21]發(fā)現，乳腺癌基因高表達可能與高Ki-67指數、腫瘤分期、淋巴結轉化等有關。進一步預后分析結果顯示三陰性乳腺癌患者中KPNA2陽性表達患者中位生存總時間較KPNA2陰性表達患者明顯縮短。導致上述結果的可能因為KPNA2具有介導RAC-1等多種轉錄因子核轉位過程的能力，而RAC-1可參與細胞黏附、細胞周期及遷移功能進而腫瘤的發(fā)展過程并影響患者預后。

多因素分析結果顯示TNM分期、分化程度、淋巴結轉移及KPNA2表達是三陰性乳腺癌患者預后的影響因素。故而，三陰乳腺癌患者需要特別注意分期、淋巴轉移及KPNA2表達，改善患者的預后。文獻[22]提示人乳腺癌病灶組織較癌旁正常組織KPNA2表達上調30%作用且KPNA2表達水平與腫瘤分期、轉移浸潤正相關，與患者生存率負相關；也有國外研究[18]提示良性乳腺細胞株過表達KPNA2能夠可誘導多種惡性細胞增殖分化，但siRNA沉默KPNA2可顯著抑制乳腺癌細胞增殖。

本研究的創(chuàng)新在于較系統(tǒng)地對三陰性乳腺癌患者KPNA2表達進行了分析，并證實了其與分化程度、淋巴結轉移有一定關系，且與患者預后有關，可以為臨床三陰乳腺癌的治療和預后提供數據參考。