王曉娟，孟 菲，王愛青

（1.洛陽市中醫(yī)院藥學(xué)部，河南 洛陽 471003；2.河南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)部臨床藥學(xué)室，河南 鄭州 450012；3.洛陽市藥檢所，河南 洛陽 471003）

參芪血脈通丸具有行氣活血，化瘀通脈的功效，是洛陽市中醫(yī)院（澗西院區(qū)）自發(fā)研制、使用了20年的口服丸劑，臨床多用于治療氣滯血瘀、風(fēng)寒濕痹。臨床多用于治療手足麻木，中風(fēng)，脈管炎，頸肩腰腿疼痛?？紤]到配方中有草烏（制）、川烏（制）、斑蝥（炒）等含毒性成分的中藥，有必要開展有關(guān)毒理研究。我院前期對制劑的化學(xué)成分、制劑工藝、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和藥理藥效等進(jìn)行了研究，基本明確了參芪血脈通丸的作用機(jī)理［4］。但是，有關(guān)參芪血脈通丸毒副作用的研究工作尚未展開。本研究用灌胃給藥的方式考察了參芪血脈通丸單次給藥的急性毒性反應(yīng)，報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)藥物

參芪血脈通丸制劑（洛陽市中醫(yī)院自制，批號(hào)20200302），醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑注冊標(biāo)準(zhǔn)。按參芪血脈通丸復(fù)方比例稱取黃芪、銀花藤、黨參、制草烏、甘草、制川烏等，加水煎煮2次，第1次2h，第2次1.5h，過濾，收集濾液并濃縮。將斑蝥布包，與黑豆共煎煮，棄去斑蝥，黑豆與其余藥材共干燥粉碎成細(xì)粉，過篩，混勻，以濃縮液為黏合劑，泛丸，打光，制成1000g水丸。

預(yù)試驗(yàn)分別以參芪血脈通丸16g/kg（最大給藥量）、8g/kg、4g/kg、2g/kg劑量單次灌胃給予ICR小鼠參芪血脈通丸。給予受試物后，動(dòng)物出現(xiàn)活動(dòng)減少、俯臥不動(dòng)、呼吸加快急促、步履不穩(wěn)、翻正反射消失、抽搐等毒性反應(yīng)癥狀。參芪血脈通丸16g/kg劑量組、8g/kg劑量組8/8例動(dòng)物死亡，4g/kg劑量組3/8例動(dòng)物死亡，2g/kg劑量組給藥后未見動(dòng)物死亡。據(jù)此，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)參芪血脈通丸各組給藥劑量分別為8g/kg、6g/kg、4.5g/kg、3.4g/kg、2.6g/kg、2.0g/kg，組間比為0.75。試驗(yàn)用藥配制方法為：將參芪血脈通丸分別配置成含原藥材0.4g/mL、0.3g/mL、0.225g/mL、0.17g/mL、0.13g/mL、0.1g/mL的藥液，供動(dòng)物試驗(yàn)用。

1.2 動(dòng)物

SPF級ICR小鼠60只，體質(zhì)量15～20g，雌雄各30只，購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，許可證號(hào)SCXK（京）2016-0011。

1.3 方法

將ICR小鼠按體質(zhì)量和性別隨機(jī)均衡分為6組，分別為參芪血脈通丸8g/kg劑量組、6g/kg劑量組、4.5g/kg劑量組、3.4g/kg劑量組、2.6g/kg劑量組、2.0g/kg劑量組，每組10只，雌雄各5只。各組均以20mL/kg灌胃給藥，給藥前禁食14～16 h，給藥后觀察6 h，以后每天觀察1次，持續(xù)觀察14天。

一般狀況觀察：包括飲食、外觀、行為、分泌物、排泄物等。記錄所有動(dòng)物的死亡情況、中毒癥狀及中毒反應(yīng)的起始時(shí)間、嚴(yán)重程度、持續(xù)時(shí)間、是否可逆等。

體質(zhì)量測量：分別于給藥前及給藥后第2、3、5、7、11、14天測定動(dòng)物體質(zhì)量。瀕死或死亡動(dòng)物也進(jìn)行稱重。

臟器檢查：中毒死亡或?yàn)l死動(dòng)物及時(shí)進(jìn)行大體解剖，其它動(dòng)物在觀察期結(jié)束后頸椎脫臼處死進(jìn)行大體解剖。大體解剖發(fā)現(xiàn)器官出現(xiàn)體積、顏色、質(zhì)地等改變時(shí)，用10%中性福爾馬林固定異常臟器并進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。大體解剖檢查臟器包括氣管、食道、胸腺、腎上腺、胰腺、胃、腸（十二指腸、空腸、回腸、結(jié)腸、直腸）、心、肺、肝臟、脾、腎、腦、淋巴結(jié)、膀胱、前列腺、睪丸（連附睪）、子宮、卵巢。

統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：根據(jù)動(dòng)物死亡數(shù)量計(jì)算LD50。計(jì)算動(dòng)物體質(zhì)量的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差，以（±s）表示。

2 結(jié) 果

2.1 一般狀況觀察

8g/kg劑量組：給藥20min后8/10例動(dòng)物（5♂，3♀）先后出現(xiàn)活動(dòng)減少、呼吸加快或急促、步履不穩(wěn)、低伏、俯臥不動(dòng)、翻正反射消失、呼吸減慢或加深、抽搐、尿失禁中的多種狀態(tài)，并于給藥后4h內(nèi)死亡。2/10例動(dòng)物（♀）出現(xiàn)活動(dòng)減少或俯臥不動(dòng)的狀態(tài)，但在3h內(nèi)恢復(fù)，且在后續(xù)一般狀態(tài)觀察中未見異常。

6g/kg劑量組：給藥57min后5/10例動(dòng)物（2♂，3♀）先后出現(xiàn)活動(dòng)減少、排稀便、步履不穩(wěn)、低伏、俯臥不動(dòng)、翻正反射消失、抽搐、尿失禁中的多種狀態(tài)，并于給藥后6h內(nèi)死亡。3/10例動(dòng)物（♂）給藥后1h內(nèi)先后出現(xiàn)活動(dòng)減少，但于2h內(nèi)恢復(fù)，且在后續(xù)一般狀態(tài)觀察中未見異常。2/10例動(dòng)物（♂）狀況無明顯變化。

4.5g/kg劑量組：給藥70min后2/10例動(dòng)物（1♂，1♀）先后出現(xiàn)活動(dòng)減少、排稀便、步履不穩(wěn)、俯臥不動(dòng)、低伏、呼吸減慢或加深、翻正反射消失、尿失禁中的多種狀態(tài)，并于給藥后6h內(nèi)死亡。1/10例動(dòng)物（♂）給藥35 min后出現(xiàn)活動(dòng)減少，并于5h內(nèi)恢復(fù)。3/10例動(dòng)物（1♂，2♀）在給藥3 h后先后出現(xiàn)排稀便，但在給藥后第2～14天一般狀態(tài)觀察未見異常。4/10例動(dòng)物（3♂，1♀）狀況無明顯變化。

3.4g/kg劑量組：給藥后1h內(nèi)5/10例動(dòng)物（2♂，3♀）先后出現(xiàn)活動(dòng)減少的狀態(tài)，但均于2h恢復(fù)，且在后續(xù)一般狀態(tài)觀察中未見異常。5/10例動(dòng)物（2♂，3♀）狀況無明顯變化。

2.6g/kg劑量組：給藥當(dāng)天及給藥后第2～14天動(dòng)物一般狀態(tài)觀察未見異常。

2.0g/kg劑量組：給藥當(dāng)天及給藥后第2～14天動(dòng)物一般狀態(tài)觀察未見異常。

表1 ICR小鼠死亡情況結(jié)果 （n=10）

由上可知，參芪血脈通丸8.0g/kg可引起8/10例動(dòng)物死亡，6.0g/kg劑量可引起5/10例動(dòng)物死亡，4.5g/kg劑量可引起2/10例動(dòng)物死亡，3.4g/kg、2.6g/kg和2.0g/kg劑量未引起動(dòng)物死亡。據(jù)此，經(jīng)計(jì)算參芪血脈通丸的LD50為6.2g/kg。

2.2 體質(zhì)量測量

8.0g/kg劑量組：給藥當(dāng)天雄性動(dòng)物全部死亡，未進(jìn)行后續(xù)稱重。雌性動(dòng)物（2只）在觀察期14天內(nèi)體質(zhì)量保持增長。

6.0g/kg劑量組：雄性動(dòng)物（3只）及雌性動(dòng)物（2只）在觀察期14天內(nèi)體質(zhì)量均保持增長。

4.5g/kg劑量組：雄性動(dòng)物（4只）及雌性動(dòng)物（4只）在觀察期14天內(nèi)體質(zhì)量均保持增長。

3.4g/kg劑量組：雌雄動(dòng)物在觀察期14天內(nèi)體質(zhì)量均保持增長。

2.6g/kg劑量組：雌雄動(dòng)物在觀察期14天內(nèi)體質(zhì)量均保持增長。

2.0g/kg劑量組：雌雄動(dòng)物在觀察期14天內(nèi)體質(zhì)量均保持增長。

表2 ICR雄性小鼠平均體質(zhì)量情況 （g，±s）

表2 ICR雄性小鼠平均體質(zhì)量情況 （g，±s）

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表3 ICR雌性小鼠平均體質(zhì)量情況 （g，±s ）

表3 ICR雌性小鼠平均體質(zhì)量情況 （g，±s ）

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2.3 臟器檢查

各組動(dòng)物大體解剖肉眼觀察均未見異常變化。

3 討 論

參芪血脈通丸為口服制劑，在臨床使用中未發(fā)現(xiàn)有不良反應(yīng)。但是，考慮到該藥配方中含有川烏、草烏、斑蝥等毒性中藥飲片，雖經(jīng)過炮制使用，安全性有一定保障，但仍應(yīng)進(jìn)行口服給藥的毒理學(xué)研究，充分暴露潛在的毒副作用，保證臨床安全用藥。ICR小鼠是急性毒性試驗(yàn)常用的嚙齒類動(dòng)物之一，根據(jù)我國《藥物單次給藥毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》（2014年5月），結(jié)合本試驗(yàn)特點(diǎn)選擇使用該種動(dòng)物。該動(dòng)物背景資料豐富，通過試驗(yàn)所得的結(jié)果易于和同類藥物比較。本試驗(yàn)動(dòng)物使用的動(dòng)物數(shù)量根據(jù)《藥物單次給藥毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》要求確定，能滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)的要求。

文獻(xiàn)報(bào)道，參芪血脈通丸所含的川烏、草烏水煎液灌胃小鼠后，會(huì)出現(xiàn)流涎、惡心、嘔吐、腹瀉、呼吸困難、手足抽搐、大小便失禁的情況，甚至出現(xiàn)呼吸衰竭、死亡的情況，主要的靶器官為心、肝、脾、肺、腎［1-2］。所含的斑蝥毒性成分主要為斑蝥素、斑蝥酸鈉，中毒癥狀主要表現(xiàn)為消化系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)及中樞神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，無論灌胃或腹腔注射給藥，均可引起小鼠吞咽困難、氣喘、惡心、嘔吐甚至休克死亡［2-4］。含有金銀花燈苦寒類中藥，容易引起引起稀便甚至腹瀉［5-6］。研究結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致，參芪血脈通丸口服可以造成ICR小鼠活動(dòng)減少、呼吸加快或急促、步履不穩(wěn)、低伏、俯臥不動(dòng)、翻正反射消失、呼吸減慢或加深、抽搐、尿失禁中的一種或多種狀態(tài)，易引起胃腸道反應(yīng)，且與給藥劑量成正相關(guān)。