丁夢祥，王俊，鄧情雨，李國棟，張晴晴

（亳州學(xué)院中藥學(xué)院，安徽亳州 236800）

靈芝孢子油是從靈芝發(fā)育后期彈射釋放出的種子即靈芝孢子粉中提取出的脂溶性物質(zhì)，其化學(xué)成分主要包括靈芝三萜類、不飽和脂肪酸、有機(jī)鍺、靈芝多糖和蛋白質(zhì)等?，F(xiàn)代藥理與臨床實(shí)踐研究表明，靈芝孢子油具有抗炎鎮(zhèn)痛、提高機(jī)體免疫力、抗氧化、抗衰老、改善睡眠質(zhì)量、抗癌抑制腫瘤以及保肝護(hù)肝等作用[1]。靈芝孢子油廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥等行業(yè)中，尤其是在保健及疾病的預(yù)防與治療方面?，F(xiàn)階段研究發(fā)現(xiàn)，靈芝孢子油具有有改善皮膚和美容方面的作用，具有明顯抗衰老、抗氧化、抗輻射等作用[2]。靈芝提取物應(yīng)用于化妝品中，可以起到護(hù)膚功效，如清除自由基、增白、保濕、改善角質(zhì)層、更新皮膚、延緩皮膚衰老、祛斑、抗炎、抗輻射以及抗過敏等。因此，在化妝品中添加適量的靈芝提取物逐漸成為化妝品開發(fā)的熱點(diǎn)[4]。本實(shí)驗(yàn)采用超臨界CO2萃取法，提取靈芝孢子粉中的靈芝孢子油，研制含有靈芝孢子油的護(hù)手霜，并對護(hù)手霜中的三萜類化合物含量進(jìn)行分析,為靈芝孢子油的廣泛應(yīng)用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

靈芝孢子粉，安徽黃山云樂靈芝有限公司；玫瑰精油，化妝品級，廣東省佛山市香菜師香薰有限公司；牡丹皮提取物（上海百雀羚日用化學(xué)有限公司第三分公司（R）），靈芝三萜對照品為齊墩果酸，中國藥品生物制品檢定所；橄欖油、甘油，化妝品級，上海百雀羚日用化學(xué)有限公司第三分公司；法國305 乳化劑，化妝品級，廣州珠峰進(jìn)出口貿(mào)易公司；實(shí)驗(yàn)所用水為純化水。

HA22050-06 型超臨界萃取裝置，江蘇南通市華安超臨界萃取有限公司；UH4150 紫外可見分光光度計(jì)，日本日立；HK-2A 型超級恒溫水浴，南京南大萬和科技有限公司。

1.2 靈芝孢子油的提取

使用超臨界CO2萃取裝置在萃取壓力26 MPa、萃取溫度42 ℃、分離壓力10 MPa、分離溫度58 ℃、萃取時間90 min 條件下[5]對靈芝孢子粉進(jìn)行提取，提取完畢后提取物裝入燒杯。

1.3 靈芝孢子油護(hù)手霜制作方法

配方由3 種組分構(gòu)成。組分1：甘油4.5 g，靈芝孢子油4.0 g，橄欖油4.0 g，玫瑰精油2 滴；組分2：純化水75 g，牡丹皮提取物1 滴；組分3：乳化劑3 05 8.5 g。

將油相（靈芝孢子油4.0 g、橄欖油4.0 g）和8.5 g乳化劑305 于同一燒杯中，于75 ℃水浴鍋中攪拌加熱至混合均勻。將組分2（水相）純化水75 g 和甘油4.5 g 混合于同一燒杯中。緩慢加入水浴鍋中裝有靈芝孢子油和乳化劑的燒杯，在加入過程中不斷攪拌，直至燒杯中混合液體完全呈白色乳狀后從水浴鍋取出，加入2 滴玫瑰精油和1 滴牡丹皮提取物再次進(jìn)行攪拌至室溫。

1.4 靈芝孢子油三萜含量的測定

精密稱取靈芝孢子油50 mg 置于100 mL 燒瓶中，加入無水乙醇約50 mL 置超聲水浴中超聲震蕩至完全溶解，冷卻至室溫，移入100 mL 容量瓶中，并用無水乙醇定容至刻度，得待測液。

吸取待測液0.20 mL 于5.00 mL 比色皿中，加入新配置的5%香草醛與冰乙酸混合溶液0.20 mL 和高氯酸0.80 mL，搖勻。先置于70 ℃水浴加熱15 min，取出，再置于冰水冷卻5min，最后置于常溫自來水中水浴調(diào)至室溫。取出后向比色皿中加入1.5 mL 冰乙酸稀釋，混勻。以空白試劑為參比，使用紫外可見分光光度計(jì)在546 nm 處測比色皿中已處理待測液的吸光度值。根據(jù)宋福江等[1]研究中的方法測得齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)曲線即可計(jì)算出靈芝孢子油總?cè)坪俊?/p>

1.5 靈芝孢子油化合物護(hù)手霜質(zhì)量考察

根據(jù)中國QB/T1857-2004 標(biāo)準(zhǔn)，對使用靈芝孢子油制備的護(hù)手霜進(jìn)行檢測（3 次平行）。檢測項(xiàng)目分別有感官指標(biāo)和理化指標(biāo)。色澤、香氣、膏體屬于感官指標(biāo)；pH 值、耐熱性、耐寒性及離心考核屬于理化指標(biāo)。

2 結(jié)果與分析

2.1 三萜類化合物的含量測定

齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為：y=11.033x+0.441，R2=0.923 1。對靈芝孢子粉提取物三萜類化合物吸光度值和含量進(jìn)行測定并計(jì)算其平均含量，其結(jié)果見表1，平均含量為1.007 3 mg/g。

表1 三萜類化合物吸光度值及其含量測定

2.2 靈芝孢子油護(hù)手霜三萜類化合物含量

根據(jù)配方可計(jì)算得到每件護(hù)手霜所含總?cè)瞥煞譃?.029 2 mg。

2.3 靈芝孢子油化合物護(hù)手霜質(zhì)量考察

靈芝孢子油護(hù)手霜的質(zhì)量考察結(jié)果見表2：該靈芝孢子油護(hù)手霜成品各項(xiàng)感官指標(biāo)、理化指標(biāo)均符合國家標(biāo)準(zhǔn)。

3 結(jié)論

以靈芝孢子粉為原材料，采用超臨界CO2萃取法提取靈芝孢子油，并用于制備靈芝孢子油護(hù)手霜，制備所得護(hù)手霜每件含三萜類化合物4.029 2 mg。該護(hù)手霜制備的工藝簡單易操作，制備的成品色澤均勻、膏體細(xì)膩，各項(xiàng)理化指標(biāo)、感官指標(biāo)均符合國家標(biāo)準(zhǔn)。

考察類別考察指標(biāo)檢查結(jié)果1檢查結(jié)果2檢查結(jié)果3色澤乳白色符合符合符合香氣符合規(guī)定香型要求符合符合符合膏體細(xì)膩、均勻一致符合符合符合pH4.0～8.55.25.25.2耐熱性（40±1）℃保存1 h、2 h、3 h，恢復(fù)至室溫后未出現(xiàn)油水分離現(xiàn)象符合符合符合耐寒性-5～-10 ℃保存1 h、2 h、3 h，恢復(fù)至室溫后未出現(xiàn)油水分離現(xiàn)象符合符合符合離心3 000 r/min 離心，未出現(xiàn)油水分離現(xiàn)象符合符合符合