丁樹華，崔恩勝

（1.上海交通大學(xué)農(nóng)業(yè)與生物學(xué)院，上海 200240；2.上海醫(yī)藥集團(tuán)中央研究院，上海 200120）

疲勞是在特殊環(huán)境下因長時(shí)間體力勞動、腦力勞動、乳酸或者代謝物堆積引起身體或心理透支、能量消耗、運(yùn)動耐久性降低和工作效率下降的生理心理現(xiàn)象。疲勞的發(fā)生是由多種因素產(chǎn)生的[1]：（1）當(dāng)出現(xiàn)劇烈運(yùn)動后，機(jī)體釋放能量的同時(shí)會使乳酸水平升高，H+濃度增高，改變機(jī)體酸堿值；（2）機(jī)體參與高強(qiáng)度體力活動時(shí)，消耗大量機(jī)體能量，伴隨低血糖；（3）正常機(jī)體運(yùn)轉(zhuǎn)時(shí)，機(jī)體內(nèi)環(huán)境相對穩(wěn)定，當(dāng)機(jī)體長時(shí)間運(yùn)動后會消耗大量水分，體內(nèi)滲透壓失衡，運(yùn)動頻率降低。因此，提高運(yùn)動耐受力是驗(yàn)證抗疲勞最直接和最客觀的指標(biāo)[2]。

缺氧是指機(jī)體供養(yǎng)不足，導(dǎo)致機(jī)體代謝發(fā)生異常的病理變化。人體中心臟和大腦所需的氧量較高，其中大腦的需氧量占到整個人體需氧量的25%，當(dāng)大腦氧氣供給不足時(shí)，會導(dǎo)致動脈血氧含量降低和線粒體氧氣供應(yīng)不足，從而影響機(jī)體能量代謝[3]，對大腦造成不可逆的傷害，嚴(yán)重時(shí)會導(dǎo)致死亡。

活性肽是指蛋白質(zhì)中20 個天然氨基酸以特定順序和結(jié)構(gòu)序列組成的特定區(qū)域，具有一定的生物學(xué)或生理作用。氨基酸的不同類型和順序決定了他們的廣泛功能?；钚噪牡膩碓礃O為豐富，可以從動物或植物蛋白中獲得，如小麥、大米、大豆、蛋、魚等?；钚噪耐ǔＲ云涑煞诸愋兔?，如大豆肽、米糠肽、花生肽、海參肽和牡蠣肽等。生物活性肽按照原料來源可以分為海洋生物肽和陸地生物肽[4]，以往的研究表明，活性肽具有多種生物學(xué)活性，包括促進(jìn)生長、免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、抗高血壓、抗血栓形成、抗脂肪形成、抗微生物、抗炎以及免疫調(diào)節(jié)作用。此外，活性肽已被廣泛用作功能性食品和飼料添加劑。目前，對生物活性肽的研究重點(diǎn)都聚集在抗腫瘤或體外研究上，關(guān)于耐缺氧和抗疲勞的研究較少，本實(shí)驗(yàn)通過急性耐缺氧實(shí)驗(yàn)和抗疲勞負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)，觀察復(fù)合活性肽（Complex Active Peptide，CAP）CAP-A、CAP-D 和CAP-E 的耐缺氧和抗疲勞效果，為研究生物活性肽的功能性食品開發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料

CAP-A、CAP-D、CAP-E 由上海蜂妮醫(yī)藥科技有限公司提供。3 種多肽劑型均為膠囊，每粒膠囊為0.5 g/粒。CAP-A 具有促進(jìn)細(xì)胞自我修復(fù)的功能，生物活性肽分子量在350～700 Da，主要由海參肽、牡蠣肽、牛初乳粉、大豆肽、人參肽、蛹蟲草、海洋魚低聚肽、淀粉、葡萄糖等成分組成；CAP-D 分子量小，易被體內(nèi)吸收，主要由紅曲、納豆、海參、富鉻酵母黃金組合組成；CAP-E 由純動植物肽組成，含有60%乳清蛋白和40%大豆分離蛋白。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)動物

雄性SPF 級ICR 小鼠50 只，購買自上海吉輝實(shí)驗(yàn)動物有限公司，動物合格證號為：SCXK(滬）2017-0012 20170012007558，動物接受體重為17～19 g，周齡為6～8 周，動物接收后標(biāo)記籠牌，適應(yīng)期3～7 d，動物房溫度為20～24 ℃，濕度為40%～70%，光照和黑暗時(shí)間為12 小時(shí)交替，自由采食飲水。

1.1.3 儀器與試劑

TX-142型天平秤，日本島津；3365025型渦旋儀、3582225 型磁力攪拌儀，IKA；12#灌胃針，蘇杭科技；WB388型計(jì)時(shí)器，歐西亞；1 mL注射器，康德萊；RD1137 游泳箱，上海移數(shù)；鉛塊；悠米牌塑封膜。干冰：上海振信氣體有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 動物分組及給藥

取40 只雄性ICR 實(shí)驗(yàn)小鼠分為空白對照組、CAP-A組、CAP-D組和CAP-E組，每組10只ICR小鼠。其中對照組小鼠連續(xù)28 d 口服灌胃水，其余3 組以劑量為1 g/kg 連續(xù)28 d 對小鼠口服灌胃。在末次給藥0.5 h 和1.0 h 后進(jìn)行抗疲勞實(shí)驗(yàn)和耐缺氧實(shí)驗(yàn)。

1.2.2 小鼠抗疲勞負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)

末次給藥0.5 h 后，從每組中取5 只小鼠，將小鼠尾根部系上5%體重的鉛塊，依次放置在游泳箱中游泳。游泳箱水深30 cm 左右，水溫（25±1.0）℃，記錄小鼠自游泳開始至沉入箱底不能浮至水面時(shí)間為小鼠負(fù)重游泳時(shí)間。

1.2.3 小鼠急性耐缺氧實(shí)驗(yàn)

末次給藥1.0 h 后，將每組剩下的5 只小鼠分別放置含有3 g 干冰的500 mL 磨口瓶中，每個瓶子用塑封膜封住瓶口，封閉后立即計(jì)時(shí)，以呼吸停止為指標(biāo)，記錄小鼠因缺氧死亡時(shí)間[5]。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用SPSS Statistics 17.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，所有數(shù)據(jù)均以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 復(fù)合活性肽對小鼠體重及負(fù)重游泳時(shí)間的影響

如表1 所示，4 組動物在實(shí)驗(yàn)期間體重?zé)o顯著差異（P＜0.05）；負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)中，CAP-A、CAP-D、CAP-E 組的負(fù)重游泳時(shí)間均高于空白對照組，且CAP-E 與對照組相比具有顯著性差異（P＜0.05）。CAP-A、CAP-D 和CAP-E 三組小鼠負(fù)重游泳時(shí)間差異均無顯著性（P＞0.05）。

2.2 復(fù)合活性肽對小鼠體重及耐缺氧實(shí)驗(yàn)的影響

如表2 所示，4 組動物在實(shí)驗(yàn)期間體重均無顯著性差異（P＜0.05），3 組復(fù)合活性肽之間比較均無顯著性差異（P＜0.05）；耐缺氧實(shí)驗(yàn)中，空白對照組耐缺氧時(shí)間高于CAP-A、CAP-D 兩組，CAP-E耐缺氧時(shí)間高于空白對照組時(shí)間。4 組耐缺氧時(shí)間比較，CAP-E組耐缺氧時(shí)間顯著高于對照組（P＜0.05），CAP-A 組耐缺氧時(shí)間顯著低于對照組（P＜0.05），所以CAP-E 可以延長耐缺氧時(shí)間。

表1 小鼠抗疲勞實(shí)驗(yàn)中小鼠體重和負(fù)重游泳時(shí)間

表2 小鼠耐缺氧實(shí)驗(yàn)中小鼠體重和耐缺氧時(shí)間

3 結(jié)論

所有小鼠在口服給藥活性肽期間體重均有增長，正常采食和飲水，活動量正常，并無任何臨床癥狀；經(jīng)過28 d 不同復(fù)合活性肽（CAP-A、CAP-D、CAP-E）口服之后，活性肽組的負(fù)重游泳時(shí)間均高于空白對照組，且CAP-E 效果優(yōu)于CAP-A、CAP-D；CAP-A、CAP-D 可縮短耐缺氧時(shí)間，而CAP-E 可延長耐缺氧時(shí)間。