劉怡 譚靜雅 卿紅梅 周彬

作者單位：1.成都市溫江區(qū)人民醫(yī)院風(fēng)濕免疫科，四川，成都611130

2.四川省人民醫(yī)院風(fēng)濕免疫科，四川，成都610072

系統(tǒng)性紅斑狼瘡是一種累及多臟器的自身免疫性炎癥性結(jié)締組織病，多發(fā)于青年女性［1］，病因、機(jī)制尚不明確，目前大部分學(xué)者認(rèn)為與遺傳、內(nèi)分泌、感染、免疫異常等因素有關(guān)［2?3］。本病發(fā)病機(jī)制為T 淋巴細(xì)胞數(shù)量、功能降低、B 細(xì)胞增生，產(chǎn)生大量自身抗體［4］，與抗原結(jié)合沉積在皮膚、關(guān)節(jié)、小血管、腎小球等部位［5］，從而導(dǎo)致一系列的臨床癥狀。其中外周血T 淋巴細(xì)胞亞群和親環(huán)素A（Cyclophilin，CyP A）可介導(dǎo)發(fā)揮免疫抑制作用［6］，在本病發(fā)生發(fā)展過程中有不可忽視的作用。為此，本研究選取了2016年6月至2019年1月本院收治的系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者52 例及健康體檢者34 例，旨在探討系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血T 淋巴細(xì)胞亞群和親環(huán)素A 的表達(dá)及臨床意義?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料

選取2016年6月至2019年1月本院收治的系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者52 例作為觀察組，健康體檢者34 例作為對照組，分別檢測其外周血T 淋巴細(xì)胞亞群和CyP A 表達(dá)水平。其中對照組男3 例，女31 例，年齡19～47 歲，平均年齡（33.95±5.71）歲；觀察組男7 例，女45 例，年齡20～46，平均年齡（33.75±5.52）歲。后者根據(jù)系統(tǒng)性紅斑狼瘡疾病活動(dòng)度評分（systemic lupus erythematosus' Disease activity score，SLEDAI）［7］分為活動(dòng)組（n=30）和非活動(dòng)組（n=22），活動(dòng)組男4 例，女26 例，平均年齡（32.81±5.49）歲，非活動(dòng)組男3 例，女19 例，平均年齡（34.74±5.79）歲；根據(jù)是否有狼瘡性腎炎分為狼瘡性腎炎組（n=28）和無狼瘡性腎炎組（n=24），狼瘡性腎炎組男4 例，女24 例，平均年齡（33.06±5.61）歲，無狼瘡性腎炎組男3 例，女21 例，平均年齡（34.69±5.37）歲。觀察組與對照組、活動(dòng)組與非活動(dòng)組、狼瘡性腎炎組與無狼瘡性腎炎組分別在性別、年齡等方面的比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

1.2 納入排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①研究組臨床癥狀、體征、實(shí)驗(yàn)室檢查等均符合2012年系統(tǒng)性紅斑狼瘡國際臨床協(xié)作組公布的診斷標(biāo)準(zhǔn)［8］，均為初發(fā)病例；②系統(tǒng)性紅斑狼瘡活動(dòng)性判斷參照Bombardier 法［9］計(jì)算，累計(jì)積分＞9 的患者歸為活動(dòng)組，≤9 的患者為非活動(dòng)組；③狼瘡性腎炎的患者排除原發(fā)性腎炎及其他繼發(fā)性腎臟疾?。虎軣o過敏史，婦女非哺乳期或妊娠期；⑤所有納入研究者及（或）家屬均簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并慢性腎小球腎炎、腎病綜合征等其他腎內(nèi)科疾病患者；②合并其他重要臟器疾病、血液系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)疾病患者；③長期應(yīng)用免疫抑制劑或糖皮質(zhì)激素患者。

1.3 指標(biāo)檢測方法

1.3.1 試劑/儀器

外周血T 淋巴細(xì)胞亞群檢測：試劑采用CD3、CD4、CD8單克隆抗體（由天津中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物醫(yī)學(xué)工程研究所提供），F(xiàn)AC?SCalibur 型流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測。CyP A 檢測：試劑為兔抗CyP（由天津市血液研究所提供），DG?3022 A 型酶聯(lián)免疫檢測儀檢測?？笴yPA 自身抗體檢測：試劑為羊抗人過氧化物酶抗體（由北京中山生物技術(shù)有限公司提供）。

1.3.2 方法

外周血T 淋巴細(xì)胞亞群檢測：采集空腹靜脈外周血標(biāo)本6 mL，離心，血細(xì)胞稀釋，調(diào)整細(xì)胞濃度為2×107懸液，取樣50 μL，加入異硫氰酸熒光素標(biāo)記的CD3、CD4、CD8單克隆抗體20 μL，孵育30 min，用FITC?IgG1 標(biāo)記抗體作陰性對照［10］。每個(gè)樣本10 000 個(gè)細(xì)胞，結(jié)果以陽性細(xì)胞的百分率表示。

CyP A 檢測：采集空腹靜脈外周血標(biāo)本6 mL，離心，取血漿標(biāo)本6 mL，離心，取上清100 μL，過夜加入稀釋后的rhCyP A 100 μL，加入酶標(biāo)記兔抗CyP 100 μL，37℃孵育1 h，避光顯色20 min，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme?linked immuno sor?bent assay，ELISA）檢測450 nm 吸光度。

抗CyPA 自身抗體檢測：采用間接ELISA 法，避光顯色，讀取450 nm 吸光度，以正常對照組吸光度的平均值加2 倍標(biāo)準(zhǔn)差為正常上限。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 18.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料采用（）描述，采用t檢驗(yàn)，以P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 研究組與對照組T 淋巴細(xì)胞亞群指標(biāo)和CyP A 表達(dá)水平比較

研究組患者T 淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均低于對照組，CD8+和CyP A 高于對照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

表1 兩組T 淋巴細(xì)胞亞群指標(biāo)和CyP A 水平比較（±s）Table 1 Comparison of T lymphocyte subsets and CyP A expression levels between 2 groups（±s）

表1 兩組T 淋巴細(xì)胞亞群指標(biāo)和CyP A 水平比較（±s）Table 1 Comparison of T lymphocyte subsets and CyP A expression levels between 2 groups（±s）

組別研究組對照組t 值P 值n 52 34 CD3+（%）63.24±2.37 72.07±3.15 14.810<0.001 CD4+（%）30.84±3.29 42.04±3.35 15.325<0.001 CD8+（%）36.17±2.94 31.32±2.75 7.671<0.001 CD4+/CD8+0.82±0.06 1.54±0.07 50.917<0.001 CyP A（μg/L）320.70±81.51 160.94±75.04 9.166<0.001

2.2 活動(dòng)組和非活動(dòng)組CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+和CyP A 表達(dá)水平比較

活動(dòng)組患者T 淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均低于非活動(dòng)組，CD8+和CyP A 高于非活動(dòng)組（P<0.05）。見表2。

表2 活動(dòng)組和非活動(dòng)組CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+和CyP A 表達(dá)水平比較（±s）Table 2 Comparison of CD3+，CD4+，CD8+，CD4+/CD8+and CyPA expression levels between active and inactive groups（±s）

表2 活動(dòng)組和非活動(dòng)組CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+和CyP A 表達(dá)水平比較（±s）Table 2 Comparison of CD3+，CD4+，CD8+，CD4+/CD8+and CyPA expression levels between active and inactive groups（±s）

組別活動(dòng)組非活動(dòng)組t 值P 值n 30 22 CD3+（%）60.96±2.21 66.04±2.39 7.912<0.001 CD4+（%）27.95±3.09 34.48±3.60 7.020<0.001 CD8+（%）39.35±3.14 34.92±2.15 5.702<0.001 CD4+/CD8+0.70±0.07 0.97±0.11 10.806<0.001 CyP A（μg/L）398.62±82.80 187.45±80.16 9.208<0.001

2.3 狼瘡性腎炎組與無狼瘡性腎炎組患者T 淋巴細(xì)胞亞群指標(biāo)和CyP A 表達(dá)水平比較

狼瘡性腎炎組患者T 淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均低于對照組，CD8+和CyP A 高于無狼瘡性腎炎組（P<0.05）。見表3。

表3 狼瘡性腎炎組與無狼瘡性腎炎組患者T 淋巴細(xì)胞亞群指標(biāo)和CyP A 表達(dá)水平比較（±s）Table 3 Comparison of T lymphocyte subsets and CyP A expression levels between patients with lupus nephritis and those without lupus nephritis（±s）

表3 狼瘡性腎炎組與無狼瘡性腎炎組患者T 淋巴細(xì)胞亞群指標(biāo)和CyP A 表達(dá)水平比較（±s）Table 3 Comparison of T lymphocyte subsets and CyP A expression levels between patients with lupus nephritis and those without lupus nephritis（±s）

組別狼瘡性腎炎組無狼瘡性腎炎組t 值P 值n 28 24 CD3+（%）61.85±2.26 65.71±2.44 5.884<0.001 CD4+（%）28.08±3.15 34.16±3.57 6.499<0.001 CD8+（%）37.83±3.04 35.16±2.83 3.221 0.002 CD4+/CD8+0.71±0.05 0.94±0.10 10.901<0.001 CyP A（μg/L）394.41±82.43 189.16±80.46 8.960<0.001

2.4 抗CyP A 抗體在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者中的表達(dá)

34 例健康體檢者的中有1 例抗CyP A 抗體陽性，陽性率為2.94%，52 例系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者中有24 例抗CyP A 抗體陽性，陽性率為46.15%，高于前者（P<0.05），3 類抗體IgG、IgA、IgM 的陽性率分別為36.54%（19/52）、19.23%（10/52）、13.46%（7/52）?？笴yP A 抗體在出現(xiàn)皮膚黏膜損害、關(guān)節(jié)痛、發(fā)熱、白細(xì)胞減少等臨床表現(xiàn)的患者中的陽性率較高。見表4。

表4 研究組患者臨床特征與抗CyP A 抗體的關(guān)系［n（%）］Table 4 The relationship between clinical features and anti?CyP A antibodies in the study group［n（%）］

3 討論

系統(tǒng)性紅斑狼瘡是一種以多系統(tǒng)損害且伴有多種自身抗體為特征的免疫性疾病，其臨床表現(xiàn)復(fù)雜，病情遷延［11?12］，難以治愈，部分患者可自行緩解，或呈“一過性”發(fā)作后病癥完全消失。大多數(shù)患者可出現(xiàn)不同程度的皮膚和粘膜損害，骨骼、心臟、呼吸系統(tǒng)、腎臟、神經(jīng)系統(tǒng)、血液系統(tǒng)等受累，嚴(yán)重者可致充血性心力衰竭、肺栓塞等［13］。本病病因至今尚未肯定，大部分學(xué)者認(rèn)為與T 細(xì)胞免疫功能異常及CyPA 表達(dá)有密切聯(lián)系［14?15］。

親環(huán)素（Cyclophilin，CyP）即環(huán)孢素A 結(jié)合蛋白［16］，是指一類與環(huán)孢素A 有高親和力、能與其結(jié)合的蛋白質(zhì)，其最主要的一種即為CyP A。CyP A在生物界存在廣泛，結(jié)構(gòu)具有高度保守性，在細(xì)胞的生命過程中有重要作用。CyP A 對中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞等炎性細(xì)胞有較強(qiáng)的趨化作用，介導(dǎo)環(huán)孢素A 抑制免疫反應(yīng)［17］，因而可作為炎癥和免疫刺激反應(yīng)的代表性因子，參與、推動(dòng)自身免疫系統(tǒng)疾病、感染性疾病、心血管疾病、腫瘤等疾病的發(fā)生發(fā)展。研究發(fā)現(xiàn)，全身性紅斑狼瘡患者體內(nèi)CyP A 的表達(dá)水平顯著升高，同時(shí)引起抗親環(huán)素自身抗體的產(chǎn)生，而且與疾病的活動(dòng)性有關(guān)［18］。本組研究表明，系統(tǒng)性紅斑狼瘡的患者CyP A 水平及其抗體陽性率（46.15%）高于正常體檢者（2.94%），處于活動(dòng)期或狼瘡性腎炎的患者CyP A 水平高于非活動(dòng)期、無狼瘡性腎炎的患者。由此表明，本研究結(jié)果與上述研究結(jié)論具有一致性，CyP A 與系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者的發(fā)病和病情有相關(guān)性，可以通過檢測患者外周血中CyP A 的水平變化來監(jiān)測患者病情變化，區(qū)別患者處于活動(dòng)期或非活動(dòng)期、有無狼瘡性腎炎，從而指導(dǎo)臨床治療。

有研究表明，在系統(tǒng)性紅斑狼瘡的發(fā)生發(fā)展過程中，T 淋巴細(xì)胞亞群的紊亂亦扮演著重要的角色，B 細(xì)胞的高度活化、過度增殖是以T 細(xì)胞異常為基礎(chǔ)且在其誘導(dǎo)下產(chǎn)生的［19］。T 細(xì)胞亞群中的CD4+和CD8+T 細(xì)胞的相互制約及平衡具有調(diào)節(jié)機(jī)體免疫應(yīng)答的重要作用［20］，其數(shù)量異常體現(xiàn)了T細(xì)胞免疫功能的異常。一項(xiàng)大樣本研究納入了100 例高加索白種人系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者，發(fā)現(xiàn)CD4+與系統(tǒng)性紅斑狼瘡呈負(fù)相關(guān)［21］。Bengtsson等［22］發(fā)現(xiàn)即使系統(tǒng)性紅斑狼瘡處于緩解狀態(tài)，T 細(xì)胞平衡亦未達(dá)到正常水平。在本組研究結(jié)果中，系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者尤其是處于活動(dòng)期、狼瘡性腎炎患者T 淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD4+/CD8+的表達(dá)水平均偏低，CD8+較高，由此表明系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者存在T 淋巴細(xì)胞紊亂，尤其在狼瘡性腎炎患者中表現(xiàn)明顯。T 細(xì)胞功能紊亂可致免疫功能缺陷，在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者中表現(xiàn)為抵抗力低下，易出現(xiàn)呼吸道、泌尿道、消化道感染等并發(fā)癥。

綜上所述，系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者活動(dòng)期、出現(xiàn)狼瘡性腎炎時(shí)其外周T 淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD4+/CD8+的表達(dá)水平低于非活動(dòng)期、無狼瘡性腎炎的患者，CD8+和CyP A 高于非活動(dòng)期、無狼瘡性腎炎的患者，由此表明，外周T 淋巴細(xì)胞亞群和CyP A 的表達(dá)水平與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的發(fā)生發(fā)展、病情程度及預(yù)后轉(zhuǎn)歸有密切聯(lián)系。