鄧占釗，楊春蓮，謝文青，趙永紅，擺世林，梁小軍

（1.寧夏農(nóng)林科學(xué)院 動(dòng)物科學(xué)研究所，銀川 750002；2.彭陽(yáng)縣畜牧技術(shù)推廣服務(wù)中心，寧夏 彭陽(yáng) 756599；3.固原市畜牧技術(shù)推廣服務(wù)中心，寧夏 固原 756000；4.海原縣畜牧產(chǎn)業(yè)發(fā)展服務(wù)中心，寧夏 海原 755299；5.海原縣國(guó)有林場(chǎng)和草原建設(shè)服務(wù)中心，寧夏 海原 755299；6.寧夏向豐農(nóng)牧業(yè)開(kāi)發(fā)有限公司，寧夏 西吉 756200）

口蹄疫是由口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus，F(xiàn)MDV）引起的，發(fā)生于偶蹄動(dòng)物的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，世界動(dòng)物衛(wèi)生組織將口蹄疫列為動(dòng)物A類(lèi)烈性傳染?。?］?？谔阋卟《痉譃镺、A、C、SAT1、SAT2、SAT3、亞洲Ⅰ型7種血清型［2］，感染后病畜出現(xiàn)發(fā)熱、跛行、皮膚出現(xiàn)泡狀斑疹等癥狀，犢牛感染嚴(yán)重時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)心臟麻痹并迅速死亡的情況［3］，我國(guó)農(nóng)業(yè)部（現(xiàn)為農(nóng)業(yè)農(nóng)村部）規(guī)定牛羊口蹄疫的免疫效果達(dá)到70%為合格［2］。

布魯氏桿菌?。˙rucellosis）又稱(chēng)“波浪熱”“地中海弛張熱”，是由布魯氏桿菌引起的人畜共患的自然疫源性傳染病，是我國(guó)《傳染病防治法》規(guī)定的需要報(bào)告的二類(lèi)傳染?。?］。感染后引起人的波浪熱、妊娠動(dòng)物流產(chǎn)以及公畜生殖功能障礙等病癥［5］，布魯氏桿菌病的傳播對(duì)世界范圍內(nèi)的生命健康與社會(huì)安定造成重大威脅。

牛傳染性鼻氣管炎（infectious bovine rhinotracheitis，IBR）又稱(chēng)“壞死性鼻炎”“紅鼻病”［6］，是由Ⅰ型牛皰疹病毒（BHV-1）引起的牛呼吸道接觸性傳染?。?］，是我國(guó)《傳染病防治法》規(guī)定的需要報(bào)告的二類(lèi)傳染病。感染后病畜的臨床表現(xiàn)主要以上呼吸道癥狀和流產(chǎn)為主要特點(diǎn)［6］，該病在世界范圍內(nèi)流行，對(duì)母牛產(chǎn)奶量、公牛繁殖力及役用牛的使役力均有較大影響。

目前，我國(guó)對(duì)動(dòng)物疫病的防治采取“預(yù)防為主、防重于治”的原則，在臨床上疫苗免疫為預(yù)防疫病的首要措施［8］。為了解2018—2020年寧夏回族自治區(qū)（O型、A型）口蹄疫、布魯氏桿菌、牛傳染性鼻氣管炎免疫情況，試驗(yàn)采用ELISA檢測(cè)方法對(duì)固原市兩地區(qū)的肉母牛6 140份血清樣本進(jìn)行免疫抗體監(jiān)測(cè)，以期為規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)及時(shí)調(diào)整免疫程序和制訂疫病防控措施提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣本來(lái)源

2018—2020年，從寧夏回族自治區(qū)固原市西吉縣馬溝村（A地區(qū)）、楊坪村（B地區(qū)）兩地區(qū)共采集基礎(chǔ)母牛血清樣本6 140份，A、B兩地肉?；A(chǔ)母牛品種均為西門(mén)塔爾。采用真空抗凝采血管通過(guò)基礎(chǔ)母牛尾靜脈采集血液。A地區(qū)2018年采集血樣900份，2019年1 140份，2020年1 500份；B地區(qū)2018年采集血樣700份，2019年900份，2020年1 000份。

1.2 血液的處理

血樣采用離心機(jī)在3 000 r／min離心15 min分離血清，所有血清于-80℃保存。

1.3 主要試劑儀器與試劑

移液器（Eppendorf plus）、Eppendorf Centrifuge（5418）離心機(jī)，Eppendorf公司產(chǎn)品；MULTISJKAN酶標(biāo)儀（MK3），Thermo公司產(chǎn)品。所有試驗(yàn)儀器均來(lái)源于寧夏農(nóng)林科學(xué)院動(dòng)物科學(xué)研究所動(dòng)物疫病實(shí)驗(yàn)室。

O型口蹄疫抗體阻斷ELISA檢測(cè)試劑盒（E310306）、A型口蹄疫抗體阻斷ELISA檢測(cè)試劑盒（E310307），購(gòu)自深圳芬德生物技術(shù)有限公司；布魯氏桿菌ELISA檢測(cè)試劑盒（P04130-10）、牛傳染性鼻氣管炎ELISA檢測(cè)試劑盒（99-41459），購(gòu)自美國(guó)愛(ài)德士（IDEXX）生物科技股份有限公司。

1.4 檢測(cè)項(xiàng)目和方法

在寧夏農(nóng)林科學(xué)院動(dòng)物科學(xué)研究所動(dòng)物疫病實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展病原抗體ELISA檢測(cè)。嚴(yán)格按照O型口蹄疫抗體阻斷ELISA檢測(cè)試劑盒、A型口蹄疫抗體阻斷ELISA檢測(cè)試劑盒、布魯氏菌抗體檢測(cè)試劑盒、牛傳染性鼻氣管炎ELISA檢測(cè)試劑盒的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行血清樣本抗體檢測(cè)。試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用北京愛(ài)德士元亨生物科技有限公司提供的數(shù)據(jù)分析軟件（xChek）計(jì)算平均值，并結(jié)合說(shuō)明書(shū)中的陰性和陽(yáng)性結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行樣品陰陽(yáng)性判斷。

2 結(jié)果

2.1 A地區(qū)

抗體檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 2018—2020年固原市A地區(qū)疫病抗體檢測(cè)結(jié)果

由表1可以看出：2018—2020年間，O型口蹄疫、A型口蹄疫、布魯氏桿菌病、牛傳染性鼻氣管炎的總體陽(yáng)性率分別為92.75%、93.64%、97.78%；其中O型口蹄疫抗體陽(yáng)性率分別為95.00%、94.91%、99.27%；A型口蹄疫抗體陽(yáng)性率分別為92.44%、91.23%、94.13%，布魯氏桿菌抗體陽(yáng)性率分別為93.78%、98.77%、100%，牛傳染性鼻氣管炎抗體陽(yáng)性率為89.78%、89.65%、97.73%。

2.2 B地區(qū)

抗體檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2。

由表2可以看出：O型口蹄疫、A型口蹄疫、布魯氏桿菌病、牛傳染性鼻氣管炎的總體陽(yáng)性率分別為93.96%、95.19%、96.33%，其中O型口蹄疫抗體陽(yáng)性率分別為95.29%、98.89%、98.90%，A型口蹄疫抗體陽(yáng)性率分別為92.57%、92.44%、96.00%，布魯氏桿菌抗體陽(yáng)性率分別為97.14%、99.22%、99.00%，牛傳染性鼻氣管炎抗體陽(yáng)性率為90.86%、90.22%、91.40%。

表2 2018—2020年固原市B地區(qū)疫病抗體檢測(cè)結(jié)果

3 討論與建議

2018—2020年免疫抗體檢測(cè)結(jié)果顯示，固原市兩地區(qū)肉牛O型口蹄疫、A型口蹄疫、布魯氏桿菌病、牛傳染性鼻氣管炎的整體抗體陽(yáng)性率均在92%以上，呈逐年增長(zhǎng)的趨勢(shì)。說(shuō)明這兩地區(qū)的基層動(dòng)物防疫工作職責(zé)落實(shí)到位，制定的肉牛免疫程序正確有效。A、B地區(qū)整體抗體陽(yáng)性率有一定的差異，分析原因可能有以下幾點(diǎn)：一是肉牛個(gè)體間存在差異；二是防疫人員技術(shù)水平不一，不同類(lèi)型抗體疫苗及疫苗注射方式也會(huì)影響疫苗免疫效果［9］；三是各地采集方式和保存血清條件不一致，不同運(yùn)輸條件和時(shí)長(zhǎng)都會(huì)對(duì)血清抗體有不同程度的影響［10］。

寧夏回族自治區(qū)家畜養(yǎng)殖規(guī)模逐年擴(kuò)大，為鞏固當(dāng)前動(dòng)物疫病防控工作成效，建議在今后的防疫工作中注意以下幾點(diǎn)：一是加強(qiáng)基層獸醫(yī)隊(duì)伍建設(shè)，定期對(duì)基層技術(shù)人員進(jìn)行培訓(xùn)，提高基層技術(shù)人員的理論知識(shí)和實(shí)際操作能力；二是養(yǎng)殖場(chǎng)需建立更加全面合理的免疫程序機(jī)制，提高動(dòng)物對(duì)重大疫病的抵抗力；三是持續(xù)做好重大疫病的抗體監(jiān)測(cè)工作，定期抽檢，發(fā)現(xiàn)問(wèn)題及時(shí)補(bǔ)免，確保免疫到位；四是在進(jìn)行動(dòng)物免疫時(shí)，免疫劑量、免疫部位及免疫注射部位等要求一定要按照規(guī)范的免疫程序進(jìn)行；五是規(guī)范樣品的采集及運(yùn)輸條件，避免因運(yùn)輸條件不當(dāng)影響血清抗體效價(jià)。