復旦大學附屬腫瘤醫(yī)院病理科 趙 靚 呂 泓

組織病理診斷在腫瘤治療的過程當中起到了至關重要的作用，它被稱之為診斷的“金標準”，不論是術前的手術方式、術中的手術范圍還是術后的后續(xù)治療決策都與組織病理診斷結(jié)果息息相關。而常規(guī)的組織病理診斷是通過病理切片來實現(xiàn)的。我們常見的病理切片分別是石蠟切片和冰凍切片。

一、什么是冰凍切片？

冰凍切片病理診斷是組織病理診斷的一種形式，是在外科手術過程中，手術醫(yī)生送檢組織標本，病理醫(yī)生通過組織標本的快速冰凍切片來診斷送檢標本的良、惡性或手術切緣是否干凈，從而協(xié)助臨床醫(yī)生作出下一步治療的決策。

冰凍切片是一種在低溫條件下使組織冷卻到一定硬度，然后進行切片的方法因其制作過程較石蠟切片快捷、簡便，而多應用于手術中的快速病理診斷。

圖1 冰凍切片機

二、冰凍切片是怎么制成的？

1.取材：外科醫(yī)生切下來的人體組織送到病理科，首先要進行取材，一般取材不能取得太厚，理想厚度為1～2 mm，一般不超過3 mm，通常取幾塊具有代表性的組織進行制片。組織取材好后，要和病理號放置在一起。

2.包埋：為了防止切片的邊緣卷起或者產(chǎn)生皺褶，冰凍載物頭上先加入少量OCT（冰凍包埋劑），然后放上組織，將組織完全置入OCT內(nèi)。

3.組織冰凍時間：一般建議當OCT最表面凍到發(fā)白或組織表面凝固后就進行修片。建議根據(jù)組織性質(zhì)，組織大小，厚度，機器溫度來確定冰凍時間。比如：腦，-15 ℃；腎、肝、脾，-16 ℃；淋巴結(jié)，-16 ℃；甲狀腺，-18 ℃；卵巢，-18 ℃；乳腺，-20 ℃；子宮，-20 ℃；脂肪，-35 ℃。

4.切片：一般厚度為6～8μm，原則上是細胞密集的薄切，纖維多細胞稀的可稍厚切。而且在修片時應調(diào)好角度，切除病灶的最大面。

5.固定：要及時將切好的片子放入冰凍固定液中，避免在空氣中放置時間過長。

6.染色：固定數(shù)秒→水洗→染蘇木30～60秒→水洗→1%鹽酸酒精分化→水洗→溫水中返藍→伊紅染色10～20秒→脫水→透明→中性樹膠封固或者酒精脫水后吹風機吹干→封片。

最后當技術人員做好切片之后，由經(jīng)驗豐富的病理診斷醫(yī)生快速閱片，出具冰凍診斷報告。

但是由于術中冰凍所取的是具有代表性的組織，因此術中冰凍切片的局限性無法避免，但是它對于一些患者的手術術式和范圍選擇又起到了決定性作用。做完冰凍剩下的組織將用10%福爾馬林固定，然后做成常規(guī)石蠟切片，成為“冰?！鼻衅τ谧鲞^冰凍的那幾塊組織也會制作成石蠟切片，稱為“冰對”切片。

三、那什么是石蠟切片呢？

石蠟切片組織學常規(guī)制片技術中最為廣泛應用的方法。石蠟切片不僅用于觀察正常細胞組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)，也是病理學和法醫(yī)學等學科用以研究、觀察及判斷細胞組織的形態(tài)變化的主要方法。

四、那石蠟切片又是怎么制成的呢？

1.取材：用10%福爾馬林將送來的標本固定6～12 h以上就會進行取材，取材時還需要再次核對送檢者姓名、年齡、性別、送檢部位等，病理醫(yī)生拿著尺子、刀子、鑷子、剪子、大頭針等在大菜板上研究這些被福爾馬林浸泡過的各種標本，描述病變、測量大小、切取組織……為了防止病變漏診。

圖2 脫水機

2.脫水、透明、浸蠟：取好標本放入與患者編號的相對應的包埋盒中，包埋盒按順序放入特殊材質(zhì)的脫水籃后進入脫水機，經(jīng)過梯度酒精脫水、二甲苯透明、浸蠟等步驟，需要花上1個晚上的時間。

3.包埋：就是把從脫水機里取出的標本，放在包埋模具中讓石蠟充分包裹著組織，之后將其放在冷臺上等到凝固，然后在冰箱里凍上一會，就制成了蠟塊。

圖3 未包埋的組織

圖4 已包埋好的蠟塊

4.切片：在切片機上切出3 μm厚薄左右組織蠟片，放入水中，再用載玻璃切片將組織從水中撈出，并貼上與之相對應的病理號標簽。

5.烤片：把剛剛切好的切片放在60 ℃的烤箱中烘烤半小時，讓組織牢牢地固定在玻璃切片上。

6.染色：把剛剛烤好的片子放入有二甲苯、酒精、蘇木素，伊紅試劑的染色機中浸泡上色。

7.封片：在剛剛?cè)就甑牟Ａ衅系紊蠘淠z，蓋上蓋玻片。此步驟應避免產(chǎn)生氣泡。

此時，石蠟切片就制作完成了。病理醫(yī)生就能在顯微鏡下看到切片中不同顏色的組織，通過不同放大倍數(shù)的鏡頭放大組織，來觀察組織的不同形態(tài)，最后得出精確的診斷結(jié)果。

也正是由于組織經(jīng)過這么多道程序的處理，才使組織能以病理切片的形式長期保存。

圖5 石蠟切片機

五、哪些組織不適用做冰凍呢？

1.疑為惡性淋巴瘤的病例；

2.過小的標本 (＜0.2 cm)；

3.術前經(jīng)過活檢仍難以明確診斷者；

4.脂肪組織、骨組織和鈣化組織；

5.需要依據(jù)核分裂相計數(shù)判斷良、惡性的軟組織腫瘤；

6.主要根據(jù)腫瘤生物學行為特征而不能依據(jù)組織形態(tài)判斷良、惡性的腫瘤；

7.已知具有傳染性的標本(如結(jié)核、病毒性肝炎、艾滋病等)。

images/BZ_31_328_1172_2116_1245.png石蠟切片 冷凍切片應用對象 廣泛應用常規(guī)制片 手術中的快速病理診斷包埋液 石蠟 OCT保持時間 持久保存 保存時間較短優(yōu)點1.細胞定位準確2.組織細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)保存完好3.保存時可放在室溫下保存1.簡便、快速、用時短2.組織變化不大3.較好的保存抗原活性及酶類4.能很好的保存脂肪、類脂等成分缺點 步驟繁多，制片中抗原活性有所降低 1.不易做連續(xù)切片2.切取的組織不能過大

總之，手術中，病理醫(yī)生通過冰凍切片對組織進行定性診斷，手術醫(yī)生根據(jù)這個診斷做出手術方案的選擇。手術后，病理醫(yī)生對石蠟切片進行細致觀察，做出更細致的診斷。由于快速冰凍的局限性，往往只應用于手術方式和手術范圍的決策，而石蠟切片則可以提供更細致更準確的診斷信息，例如病變的具體類型、神經(jīng)脈管侵犯情況等其他信息，從而判斷患者的預后、指導術后的輔助治療等等。

圖6 冰凍和石蠟切片的同塊組織對比