董飚,顧文婕,王健，2*,李小芬,張玲

(1.江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院，江蘇 泰州 225300；2.國(guó)家級(jí)水禽基因庫(kù)，江蘇 泰州 225300)

鵝是一種草食性家禽，具有耐粗飼、抗病易養(yǎng)等特點(diǎn)，養(yǎng)殖投資少、經(jīng)濟(jì)效益高。傳統(tǒng)的種草養(yǎng)鵝、自配料等養(yǎng)鵝方式無法滿足集約化的需求，集約化養(yǎng)殖勢(shì)在必行。我國(guó)目前尚未建立鵝的飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)，飼料生產(chǎn)配方設(shè)計(jì)多根據(jù)經(jīng)驗(yàn)或參考其他家禽標(biāo)準(zhǔn)，缺乏科學(xué)性。國(guó)內(nèi)不少學(xué)者已經(jīng)開展了鵝粗蛋白營(yíng)養(yǎng)需要量的研究工作。王信喜等[1]采用的3個(gè)能量蛋白質(zhì)水平日糧對(duì)揚(yáng)州鵝第6、8、10周齡體重沒有顯著影響，但是賴氨酸水平會(huì)顯著影響此時(shí)間段揚(yáng)州鵝的體重。章雙杰等[2-3]報(bào)道了揚(yáng)州鵝、太湖鵝在育雛期、育肥期適宜的粗蛋白、代謝能和粗纖維使用量。宋政等[4]建議太湖鵝0～3、4～6、7～10周齡日糧中適宜的粗蛋白含量分別為20%、16%、15%。李琴等[5-7]報(bào)道1～3、4～8周齡的四川白鵝日糧中適宜粗蛋白含量、代謝能為20%、11.43 MJ/kg和15%、12.13 MJ/kg。孫利亞等[8]研究結(jié)果表明0～4周齡四川白鵝日糧中最佳粗蛋白含量、能量水平為19%～20%、12.50 MJ/kg。鵝日糧中粗蛋白的需要量受日齡、品種等因素的影響，導(dǎo)致研究數(shù)據(jù)無法照搬硬套，給生產(chǎn)上應(yīng)用帶來了困難。

生長(zhǎng)激素(growth hormone，GH)是一種單鏈蛋白類激素，可調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)、脂肪的代謝，通過促進(jìn)動(dòng)物肌肉及其他組織分裂增殖、蛋白質(zhì)合成增加，進(jìn)而促進(jìn)動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育。有關(guān)鵝GH基因的研究主要集中在基因克隆、原核表達(dá)、不同品種多態(tài)性差異以及多態(tài)性與生產(chǎn)性能關(guān)聯(lián)性等方面[9-11]，而將鵝日糧營(yíng)養(yǎng)作為影響功能基因mRNA表達(dá)因素的研究較少。

為此，本試驗(yàn)以豁眼鵝為素材，開展不同蛋白水平日糧對(duì)豁眼鵝早期生長(zhǎng)性能、屠宰性能以及肌肉中GH基因mRNA表達(dá)的影響，為制定鵝營(yíng)養(yǎng)需要和基因功能研究提供參考資料。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選擇健康豁眼鵝雛鵝144只，隨機(jī)分為3個(gè)組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)16只鵝(公母各8只)。0～4周齡采取地面平養(yǎng)方式進(jìn)行育雛，飼喂同樣的育雛料；從第5周開始進(jìn)行不同蛋白水平日糧試驗(yàn)。試驗(yàn)設(shè)定高、中、低3個(gè)層次蛋白水平的日糧，粗蛋白含量分別為15.50%、14.50%、13.50%。日糧配方見表1。

1.2 生產(chǎn)性能數(shù)據(jù)采集

1.2.1 體重測(cè)定

分別在鵝第4、6、8、10周齡時(shí)對(duì)所有個(gè)體進(jìn)行稱重，每次稱重前禁食12 h，以確保鵝空腹。

表1 日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平

1.2.2 屠宰性能測(cè)定

在10周齡時(shí)，每組隨機(jī)抽取試驗(yàn)鵝24只進(jìn)行屠宰性能測(cè)定，公母各半。測(cè)定指標(biāo)為活重、屠體重、半凈膛重、全凈膛重、胸肌重、腿肌重，并計(jì)算所占比例，測(cè)定方法和比例計(jì)算參照標(biāo)準(zhǔn)NY/T823—2004的要求。

1.3 GH基因組織表達(dá)

1.3.1 樣品采集及cDNA合成

在8周齡、10周齡時(shí)，每個(gè)組隨機(jī)選擇12只鵝(每個(gè)重復(fù)4只，公母各半)進(jìn)行屠宰，采集少量胸肌和腿肌組織置液氮速凍，-80 ℃凍存別用。采用TRIzol法提取胸肌、腿肌組織中總RNA，檢測(cè)完濃度和純度后按照TaKaRa逆轉(zhuǎn)錄試劑盒操作說明書進(jìn)行cDNA合成。

1.3.2 引物的設(shè)計(jì)

根據(jù)GenBank中公布的鵝GH、β-actin基因序列，各設(shè)計(jì)了1對(duì)引物，引物由上海桑尼生物技術(shù)有限公司合成。GH基因擴(kuò)增所用引物為F1:5′-TGGCACCTCAGACAGAGTGT-3′，R1：5′-CCGGCACTTCATCACCTTCA-3′，擴(kuò)增長(zhǎng)度為238 bp；β-actin基因擴(kuò)增所用引物為F2:5′-TGGACTTCGAGCAG-GAGATG-3′，R2：5′-AAAGATGGCTGGAAGAGGGC-3′，擴(kuò)增長(zhǎng)度為136 bp。

1.3.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)

按照LC-480熒光定量PCR儀說明書進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作，用UltraSYBR Mixture(with Rox)進(jìn)行擴(kuò)增，程序?yàn)椋?5 ℃ 10 min；95 ℃ 15 s,60 ℃ 60 s，40個(gè)循環(huán)。RealTime反應(yīng)體系為：UltraSYBR Mixture (2×) 10 μL，上游引物(10 μmol/L) 0.4 μL，下游引物(10 μmol/L)0.4 μL，模板 2 μL，加入滅菌蒸餾水至20 μL。結(jié)果采用2-ΔΔCt法計(jì)算目的基因的相對(duì)表達(dá)量。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

用軟件SPSS 13.0中的單因素方差分析檢驗(yàn)各性能指標(biāo)、GH基因在肌肉組織中的表達(dá)量在不同組之間差異是否達(dá)到顯著性水平(P<0.05)，統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)表示方式為“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”。

2 結(jié)果與分析

2.1 對(duì)體重的影響

試驗(yàn)鵝在4周齡時(shí)進(jìn)行稱重分組，同性別鵝在不同組別之間并無顯著性差異。經(jīng)過不同蛋白質(zhì)水平日糧的飼喂發(fā)現(xiàn)，在第8、10周齡時(shí)，高蛋白組母鵝的體重顯著性高于低蛋白組母鵝的體重(P<0.05)，而高蛋白組和中蛋白組、中蛋白組和低蛋白組之間無顯著性差異。公鵝不同蛋白組之間體重?zé)o顯著性差異。見表2。

表2 不同蛋白水平日糧對(duì)鵝體重的影響 g

2.2 對(duì)屠宰性能的影響

受活重影響，高蛋白組母鵝屠宰重、半凈膛重、全凈膛重顯著性高于低蛋白組母鵝(P<0.05)；高、中蛋白組胸肌重顯著性高于低蛋白組(P<0.05)，中蛋白組胸肌率顯著性高于低蛋白組(P<0.05)；其他指標(biāo)在母鵝不同蛋白組之間無顯著性差異。所有指標(biāo)在公鵝不同蛋白組之間均無顯著性差異。見表3。

表3 不同蛋白水平日糧對(duì)10周齡鵝屠宰性能的影響

2.3 對(duì)GH基因在肌肉組織中表達(dá)的影響

分別測(cè)定了GH基因在8周齡、10周齡鵝肌肉組織中mRNA表達(dá)水平，結(jié)果表明在相同組織、相同周齡時(shí)，GH基因在不同性別、不同蛋白組之間mRNA表達(dá)無顯著性差異。相同時(shí)間時(shí)，GH基因在胸肌中表達(dá)量要顯著性高于腿肌(P<0.05)。8周齡的肌肉組織中GH基因mRNA表達(dá)量要顯著性高于10周齡相同肌肉組織中的表達(dá)量(P<0.05)。見表4。

表4 不同蛋白水平日糧對(duì)GH基因在肌肉組織中表達(dá)的影響

3 討論

蛋白質(zhì)是機(jī)體肌肉、內(nèi)臟器官、神經(jīng)等組織細(xì)胞的原料，也是機(jī)體內(nèi)各種酶、激素的主要成分。鵝對(duì)蛋白質(zhì)的需求量和利用效率一直是動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)的研究重點(diǎn)，適宜的蛋白可以確保鵝的正常生長(zhǎng)發(fā)育，但是日糧蛋白質(zhì)含量過高會(huì)引起鵝痛風(fēng)和其他一些疾病的并發(fā)癥，增加飼養(yǎng)成本[12-13]。試驗(yàn)數(shù)據(jù)分析顯示第5～10周齡期間，豁眼鵝公鵝采用3種蛋白水平日糧進(jìn)行飼喂，不同組之間體重?zé)o顯著差異，所以此階段公鵝飼喂蛋白含量為13.50%的日糧就可以獲得較好的體重。母鵝高蛋白組的體重顯著高于低蛋白組母鵝的體重，高、中蛋白組之間體重?zé)o顯著差異，說明母鵝飼喂蛋白水平為14.50%日糧可獲得較好的體重?；硌垸Z公、母鵝對(duì)日糧粗蛋白需求量均比王信喜等[14]在揚(yáng)州鵝中的研究結(jié)果低，他們認(rèn)為5～10周齡揚(yáng)州鵝在日糧中粗蛋白水平為15%時(shí)可獲得最佳體重和屠宰性能。不同性別之間的結(jié)果不一致，這可能與公鵝對(duì)飼料中的蛋白質(zhì)利用率比母鵝高有關(guān)。高蛋白組鵝體重高于中等蛋白組的體重，但是差異不顯著，其原因可能是鵝對(duì)蛋白的利用率會(huì)隨著飼糧中粗蛋白水平的上升而降低。日糧高水平粗蛋白會(huì)引起血清中尿素氮含量增加，從而降低了鵝對(duì)蛋白的利用率[15]。

本試驗(yàn)表明，屠宰性能質(zhì)量指標(biāo)與體重指標(biāo)存在正相關(guān)，所以母鵝高蛋白組的活重、屠宰重、半凈膛重、全凈膛重顯著性高于低蛋白組母鵝，高、中蛋白組胸肌重顯著性高于低蛋白組。除了中蛋白組胸肌率顯著高于低蛋白組外，其他屠宰性能比例指標(biāo)在不同蛋白組之間無顯著差異，這與陳明君等[16]在8周齡四川白鵝屠宰性能測(cè)定的結(jié)果較一致：除胸肌率外，半凈膛率、全凈膛率和腿肌率不受粗蛋白水平的影響；但是與宋政等[4]報(bào)道太湖鵝中等蛋白質(zhì)水平日糧組的屠宰率、半凈膛率、全凈膛率高于高、低蛋白質(zhì)水平飼糧組的結(jié)果不同。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)GH基因在胸肌和腿肌中均表達(dá)，表達(dá)量的高低與日糧蛋白水平無顯著性相關(guān)；但是表達(dá)量與組織、周齡有顯著性關(guān)聯(lián)，同時(shí)期胸肌中的表達(dá)量會(huì)顯著高于腿肌，隨著周齡的增加表達(dá)量下降，這可能與肌肉的生長(zhǎng)發(fā)育時(shí)間有關(guān)，腿肌生長(zhǎng)發(fā)育時(shí)間比胸肌早，在8周齡時(shí)腿肌已經(jīng)得以充分的生長(zhǎng)發(fā)育，而胸肌此時(shí)還處在生發(fā)發(fā)育旺盛階段；隨著肌肉的生長(zhǎng)，到10周齡時(shí)，胸肌和腿肌的生長(zhǎng)發(fā)育已經(jīng)處于后期，相對(duì)增重速度都已經(jīng)發(fā)生大幅度降低，與8周齡相比，GH基因在肌肉組織中表達(dá)量都發(fā)生了大幅度降低，說明GH基因在肌肉生長(zhǎng)發(fā)育緩慢期所起作用會(huì)越來越小，從而導(dǎo)致表達(dá)量越來越低。

綜上所述，在5～10周齡期間，公、母鵝宜用粗蛋白水平分別為13.50%、14.50%的日糧，日糧蛋白水平不會(huì)顯著影響GH基因在肌肉組織中的表達(dá)。在生產(chǎn)中為了節(jié)約成本、獲得較好的養(yǎng)殖效益，一般需將公母分開飼養(yǎng)，根據(jù)營(yíng)養(yǎng)需要分別飼喂不用營(yíng)養(yǎng)水平的日糧。