鞏碧釧，胡秋輝，蘇安祥，徐 輝，劉建輝，裴 斐，楊文建*

（南京財(cái)經(jīng)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，江蘇省現(xiàn)代糧食流通與安全協(xié)同創(chuàng)新中心，江蘇高校糧油質(zhì)量安全控制及深加工重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇 南京 210023）

我國(guó)是農(nóng)業(yè)大國(guó)，每年的農(nóng)藥使用量約為30萬(wàn) t[1]。三嗪類(lèi)農(nóng)藥的分子結(jié)構(gòu)式如圖1所示，由于其除草活性高、價(jià)格低廉，被廣泛應(yīng)用于黃瓜、玉米、蘋(píng)果等農(nóng)作物生產(chǎn)中[2-3]。然而，三嗪類(lèi)農(nóng)藥屬水溶性農(nóng)藥，極易殘留于果蔬當(dāng)中，并且通過(guò)生物鏈的傳遞作用在人體內(nèi)富集，對(duì)人體生殖系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)造成極大損害[4-5]。

圖1 三嗪類(lèi)農(nóng)藥結(jié)構(gòu)式Fig.1 Triazine pesticide structure

固相萃取是三嗪類(lèi)農(nóng)藥樣品最常用的預(yù)處理方法，但是傳統(tǒng)的吸附劑穩(wěn)定性差、重復(fù)率低，甚至?xí)斐煞治鑫锖碗s質(zhì)化合物的共萃取，凈化效果并不理想，嚴(yán)重制約了對(duì)目標(biāo)農(nóng)藥的萃取效率、從而影響后期儀器分析結(jié)果[6-7]。因此，建立快速、精確、有效的食品中三嗪類(lèi)農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法極為重要。

分子印跡技術(shù)是以特定的目標(biāo)分子為模板分子，利用模板分子和功能單體之間通過(guò)分子間的共價(jià)作用力，非共價(jià)作用力合成具有三維空間結(jié)構(gòu)的高分子聚合物，此三維結(jié)構(gòu)的孔穴可以選擇性地重新與模板分子結(jié)合，具有較強(qiáng)的分子識(shí)別能力[8-9]。分子印跡聚合物（molecularly imprinted polymer，MIPs）作為新型固相萃取材料，對(duì)目標(biāo)物具有高選擇性的識(shí)別位點(diǎn)，而且制備簡(jiǎn)單、成本低，非常適合作為固相萃取柱的填料對(duì)痕量分析物進(jìn)行富集[10-11]，可以改善傳統(tǒng)食品安全檢測(cè)方法存在的弊端[12]。

目前制備MIPs使用的模板多為分析物本身，然而，用分析物作為模板時(shí)，很難在洗脫過(guò)程中從聚合物中完全去除模板，分析物可能會(huì)在洗吸過(guò)程中滲出，即所謂的“模板泄漏”[13-14]。采用與目標(biāo)物結(jié)構(gòu)相似的物質(zhì)作為虛擬模板，可以獲得與目標(biāo)物結(jié)構(gòu)相似的吸附位點(diǎn)，也能避免不完全洗脫的目標(biāo)物（即模板分子）對(duì)后續(xù)檢測(cè)造成的影響。劉博等[15]用腈菌唑?yàn)槟０宸肿?，采用虛擬模板分子印跡固相萃取技術(shù)對(duì)食品中的聯(lián)苯三唑醇與烯唑醇進(jìn)行分離富集，該聚合物顯示出在復(fù)雜的機(jī)制條件時(shí)，分離富集目標(biāo)物的優(yōu)越性能。陳靜鈺等[16]以煙酰胺作為吡蟲(chóng)啉和啶蟲(chóng)脒的結(jié)構(gòu)類(lèi)似物，制備虛擬模板MIPs，將其作為柱填充材料應(yīng)用于茶多酚中，其對(duì)吡蟲(chóng)啉和啶蟲(chóng)脒去除率達(dá)到95%以上，為茶提取物中農(nóng)藥殘留的脫除提供了一種新的思路和方法。Song Yiping等[17]合成了能同時(shí)識(shí)別8 種氟喹諾酮和8 種磺酰胺的雙虛擬模板MIPs，該方法可用作檢測(cè)肉類(lèi)中的氟喹諾酮類(lèi)和磺酰胺類(lèi)藥物殘留，使用該MIPs制備的色譜柱可重復(fù)使用80 次以上。上述方法使用結(jié)構(gòu)類(lèi)似物作為合成MIPs的虛擬模板，可以有效解決“模板泄露”的問(wèn)題，同時(shí)還保留了MIPs的高選擇性與良好的吸附效果。

三嗪類(lèi)農(nóng)藥的結(jié)構(gòu)相似，主要區(qū)別在于三嗪環(huán)上的取代基不同，且與氨基取代基相連的烷基不同。Chen Jianlei等[18]通過(guò)計(jì)算機(jī)模擬模板與功能單體之間的作用力，發(fā)現(xiàn)與其他三嗪類(lèi)化合物相比，滅蠅胺與功能單體間的結(jié)合能更高，表明滅蠅胺與單體復(fù)合物之間存在較穩(wěn)定的相互作用力。本實(shí)驗(yàn)選擇滅蠅胺作為虛擬模板，甲基丙烯酸（methacrylic acid，MAA）為功能單體，三羥甲基丙烷三甲基丙烯酸酯（trimethylolpropane triacrylate，TRIM）為三元交聯(lián)劑，乙腈為致孔劑，采用本體聚合法制備三嗪類(lèi)MIPs。對(duì)制備方法和萃取條件進(jìn)行優(yōu)化，建立三嗪類(lèi)農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法并應(yīng)用于蘋(píng)果、黃瓜、玉米檢測(cè)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

標(biāo)準(zhǔn)樣品（純度）：撲草凈（99%）、莠滅凈（98.8%）；西草凈（97%）、吡蟲(chóng)啉（98.5%）、滅蠅胺、阿特拉津（均為98%）、甲基丙烯酸（分析純）、乙二醇二甲基丙烯酸酯（分析純）、三羥甲基丙烷三甲基丙烯酸酯（分析純）、偶氮二異丁腈（分析純） 美國(guó)Sigma公司；乙腈（色譜純） 美國(guó)Tedia公司；三氯甲烷、甲醇、冰乙酸（均為分析純） 阿拉丁試劑（上海）有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

Cary630傅里葉紅外光譜儀 美國(guó)Thermo Fisher公司；1260高效液相色譜（high performance liquidchromatography，HPLC）儀 美國(guó)Agilent公司；DZF-6020真空干燥箱 常熟市中盛醫(yī)用儀表有限公司；DF-101S集熱式恒溫加熱磁力攪拌器 上海力辰邦西儀器科技有限公司；Allegra 64R離心機(jī) 美國(guó)Beckman Coulter公司；固相萃取裝置 美國(guó)Supelco公司；SU8010掃描電鏡 日本Hitachi公司。

1.3 方法

1.3.1 虛擬模板MIPs的制備與優(yōu)化

將1 mmol滅蠅胺模板分子和4 mmol功能單體MAA溶于15 mL乙腈中，將混合物通過(guò)超聲30 min進(jìn)行預(yù)聚合，然后將交聯(lián)劑4 mmol TRIM和30 mg偶氮二異丁腈添加到溶液中，超聲處理5 min，充氮?dú)? min，在60 ℃的水浴鍋中密閉反應(yīng)24 h。將得到的塊狀聚合物研磨過(guò)200 目篩，用體積分?jǐn)?shù)10%的乙酸-甲醇在索氏提取裝置中洗脫12 h，洗去模板分子，直至用HPLC法檢測(cè)不到提取液中模板分子的存在。將無(wú)模板分子的產(chǎn)物用甲醇和超純水重復(fù)洗滌至少3 次，并在60 ℃真空干燥12 h。

1.3.2 虛擬模板非印跡聚合物的制備與優(yōu)化

非印跡聚合物（non-imprinted polymers，NIPs）制備的第一步只需要加入4 mmol功能單體MAA溶于15 mL乙腈中，其余步驟與MIPs相同。

1.3.3 MIPs吸附性能

1.3.3.1 動(dòng)力學(xué)吸附實(shí)驗(yàn)

稱(chēng)取MIPs和NIPs各10 mg，加入5 mL離心管中，選擇撲草凈作為三嗪類(lèi)農(nóng)藥的代表農(nóng)藥，向離心管中加入80 mg/L的撲草凈標(biāo)準(zhǔn)溶液混合均勻，25 ℃左右的室溫將混合物在搖床上分別振蕩不同的時(shí)間（15、30、60、90、120、150、180、210、240 min），然后將混合物25 ℃、8 000 r/min離心10 min，取上清液，過(guò)0.22 μm的濾膜，通過(guò)HPLC測(cè)定其濃度。根據(jù)式（1）計(jì)算MIPs、NIPs的吸附量：

式中：Q為達(dá)到平衡時(shí)聚合物對(duì)目標(biāo)物的吸附量/（μg/g）；C0為撲草凈的初始質(zhì)量濃度/（mg/L）；C為撲草凈的平衡質(zhì)量濃度/（mg/L）；V為所加撲草凈溶液的體積/mL；M為MIPs或NIPs的添加量/mg。

1.3.3.2 靜態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)及Scatchard模型

稱(chēng)取MIPs和NIPs各10 mg，加入5 mL離心管中，向離心管中加入不同質(zhì)量濃度的1 mL撲草凈標(biāo)準(zhǔn)溶液（25、50、75、100、125、150、175、200 mg/L），混合均勻，25 ℃左右的室溫振蕩2 h后25 ℃、8 000 r/min離心10 min，取上清液，通過(guò)HPLC測(cè)定其濃度。根據(jù)式（1）計(jì)算MIP、NIP的吸附量。

利用式（2）所示的Scatchard方程，繪制Scatchard曲線，并計(jì)算MIPs的結(jié)合常數(shù)Kd和最大表現(xiàn)吸附量Qmax[19]。

式中：Q為聚合物對(duì)撲草凈的吸附量/（μg/g）；C為撲草凈的平衡質(zhì)量濃度/（mg/L）；Qmax為吸附位點(diǎn)的最大表觀結(jié)合量/（μg/g）；Kd為吸附位點(diǎn)的解離平衡常數(shù)/（μg/L）。

1.3.3.3 選擇性吸附

為了考察MIPs的特異性吸附能力，用MIPs對(duì)滅蠅胺、撲草凈、阿特拉津、莠滅凈、西草凈以及吡蟲(chóng)啉的吸附性能進(jìn)行了測(cè)試[20]。

1.3.4 4種三嗪類(lèi)農(nóng)藥液相色譜條件

色譜柱為C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相為甲醇-水（7∶3，V/V）；流速為0.8 mL/min，柱溫30 ℃，進(jìn)樣量為10 μL。

1.3.5 分子印跡固相萃取柱的制備及優(yōu)化

采用干法裝柱的操作：取1 根3 mL的固相萃取柱，用玻璃棒將孔徑為20 μm的小篩板放入底部，稱(chēng)取30 mg的MIPs，作為填料裝入固相萃取柱中，在填料上方放入1 塊篩板壓實(shí)填料，制成分子印跡固相萃取柱（molecularly imprinted solid phase extraction column，MISPE）。以撲草凈作為三嗪類(lèi)農(nóng)藥的代表，考察不同洗脫液條件的MISPE對(duì)撲草凈的提取能力。

活化：3 mL乙腈中加入3 mL水；上樣：1 mL的4 種三嗪類(lèi)農(nóng)藥混合溶液；淋洗：3 mL體積分?jǐn)?shù)為20%的乙腈水溶液；洗脫：3 mL醋酸：甲醇溶液（1∶9，V/V）。洗脫液氮?dú)獯蹈珊?，乙腈?fù)溶至1 mL。

1.3.6 方法學(xué)評(píng)價(jià)

分別稱(chēng)取5 g加入4 種三嗪類(lèi)農(nóng)藥的黃瓜（蘋(píng)果、玉米）樣品，切碎后置于50 mL離心管中，加入20 mL乙腈，旋渦振蕩1 min，25 ℃、5 000 r/min離心10 min，過(guò)濾，合并上清液后，再過(guò)濾1 次。取1 mL上清液，氮?dú)獯蹈?，? mL乙腈水溶液復(fù)溶。參照MISPE法優(yōu)化，根據(jù)HPLC檢測(cè)洗脫液。

1.4 數(shù)據(jù)處理

每組數(shù)據(jù)重復(fù)3 次，采用Origin 9軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和作圖，數(shù)據(jù)以3 次獨(dú)立樣品測(cè)定結(jié)果±s表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 模板分子、功能單體和交聯(lián)劑最佳比例的選擇

合成MIPs時(shí)，功能單體、交聯(lián)劑和致孔劑的種類(lèi)及其比例對(duì)聚合物的吸附能力有很大影響[21]。選取滅蠅胺作為虛擬模板，選擇常用的二元交聯(lián)劑乙二醇二甲基丙烯酸酯（ethylene glycol dimethacrylate，EGDMA）和三元交聯(lián)劑TRIM，并對(duì)其比例進(jìn)行優(yōu)化。致孔劑的選擇會(huì)影響聚合物的形態(tài)和分子之間的鍵合強(qiáng)度[22-23]，分別選擇乙腈和三氯甲烷作為致孔劑，合成一系列的聚合物。選擇撲草凈作為三嗪類(lèi)農(nóng)藥的代表，通過(guò)聚合物對(duì)撲草凈吸附量的大小，確定最佳聚合體系。如表1所示，盡管NIPs具有一定的吸附能力，所有的MIPs吸附能力均大于NIPs。當(dāng)交聯(lián)劑和致孔劑為T(mén)RIM和乙腈，模板分子滅蠅胺、功能單體MAA、交聯(lián)劑TRIM的物質(zhì)的量比為1∶4∶4為最佳聚合體系，此時(shí)聚合物對(duì)撲草凈的吸附量達(dá)到1 467 μg/g。這是因?yàn)橄啾扔贓GDMA，TRIM作為三元交聯(lián)劑極容易在聚合物中形成高聚合度的交聯(lián)、網(wǎng)狀三維結(jié)構(gòu)，極大地增加了聚合物對(duì)撲草凈的吸附量[24]。用乙腈作致孔劑時(shí)，對(duì)撲草凈的吸附能力要比以三氯甲烷作致孔劑的MIPs高，而且MIPs更容易洗脫，所以選擇乙腈作為致孔劑。

表1 聚合體系的設(shè)計(jì)和優(yōu)化Table 1Design and optimization of polymerization system

2.2 MIPs和NIPs的形態(tài)結(jié)構(gòu)表征

2.2.1 紅外圖譜分析

紅外吸收帶的波長(zhǎng)的變化可以分析MIPs內(nèi)印跡分子與功能單體結(jié)合過(guò)程中基團(tuán)的變化及結(jié)合位點(diǎn)的位置[25]。如圖2所示，NIPs具有O—H（3 446 cm－1）、C＝O（1 733 cm－1）、O—H（1 455 cm－1）、C—O—C（1 155 cm－1）的特征峰，這說(shuō)明了本體聚合反應(yīng)成功。與NIPs相比，MIPs在3 446 cm－1的特征峰強(qiáng)度高于NIPs，這是因?yàn)樵贜IPs中，O—H與C＝O生成氫鍵。而在MIPs中，O—H分別與C＝O和滅蠅胺印跡分子形成氫鍵，在滅蠅胺分子洗脫后，與滅蠅胺印跡分子形成氫鍵的C＝O又恢復(fù)到游離態(tài)，使O—H的特征峰強(qiáng)度更高[26]。

圖2 MIPs、NIPs和滅蠅胺的紅外光譜圖Fig.2 Infrared spectra of MIPs, NIPs and cyromazine

2.2.2 MIPs的掃描電鏡分析

MIPs和NIPs的分散情況及排列等表面形貌可以根據(jù)掃描電鏡觀察[27]。如圖3A所示，30 000 倍的放大倍數(shù)下，MIPs呈現(xiàn)出單體結(jié)合成團(tuán)狀聚合物的狀態(tài)，單個(gè)粒子呈現(xiàn)微球狀，直徑小，使得MIPs表面印跡位點(diǎn)較多。而圖3B中，NIPs表面空穴較少，導(dǎo)致相應(yīng)的吸附能力降低。

圖3 MIPs（A）和NIPs（B）的掃描電鏡結(jié)果（×30 000）Fig.3 Scanning electron micrographs of MIPs (A) and NIPs (B) (× 30 000)

2.3 MIPs和NIPs的吸附性能

2.3.1 靜態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)及Scatchard模型

圖4A展示了靜態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)測(cè)定的MIPs和NIPs對(duì)不同質(zhì)量濃度撲草凈的等溫吸附曲線。隨著撲草凈質(zhì)量濃度的增加，MIPs和NIPs對(duì)撲草凈的平衡吸附容量也隨之增加，并且在相同質(zhì)量濃度MIPs的平衡吸附容量遠(yuǎn)高于NIPs。這說(shuō)明在MIPs中形成了與撲草凈結(jié)構(gòu)相匹配的特異性結(jié)構(gòu)孔穴，所以對(duì)其親和性高，因此對(duì)其的特異性吸附能力強(qiáng)。

如圖4B所示，通過(guò)Origin軟件進(jìn)行擬合，得到2 個(gè)線性擬合方程：y=－0.018 68x+30.205 39（R2=0.987 02）和y=－0.006 37x+19.989 82（R2=0.922 04）。Scatchard方程能夠客觀地評(píng)價(jià)MIPs的結(jié)合特性[28]，Scatchard方程中有2 個(gè)線性相關(guān)的部分，說(shuō)明MIPs對(duì)模板分子主要存在2 類(lèi)吸附位點(diǎn)，其中y=－0.018 68x+30.205 39的Qmax（截距）和Kd（斜率絕對(duì)值的倒數(shù)）為1.6 mg/g和53.53 mg/L，y=－0.006 37x+19.989 82的Qmax和Kd為3.13 mg/g和156.99 mg/L。

圖4 MIPs和NIPs的靜態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)（A）及MIPs Scatchard模型（B）分析Fig.4 Isothermal adsorption curves of prometryn onto MIPs and NIPs (A)and MIPs Scatchard model analysis (B)

2.3.2 吸附動(dòng)力學(xué)及選擇性吸附

采用吸附動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)探究MIPs及NIPs對(duì)撲草凈的動(dòng)態(tài)吸附規(guī)律[29]，如圖5A所示，在前60 min，MIPs和NIPs對(duì)撲草凈的吸附速度很快；在60 min之后，MIPs和NIPs基本均達(dá)到吸附平衡狀態(tài)，吸附速度均下降。與NIPs相比，MIPs具有更快的吸附速度，并且達(dá)到吸附平衡狀態(tài)時(shí)的吸附容量也更高，因?yàn)樵谖匠跗?，MIPs表面存在更多的印跡點(diǎn)，能夠更快地吸附目標(biāo)物。而NIPs表面沒(méi)有供目標(biāo)物結(jié)合的印跡點(diǎn)，其吸附容量遠(yuǎn)低于MIPs。

圖5 MIPs和NIPs的吸附動(dòng)力學(xué)（A）和選擇性吸附圖（B）Fig.5 Adsorption kinetics (A) and selective adsorption (B) of MIPs and NIPs

MIPs和NIPs對(duì)6 種農(nóng)藥的選擇性吸附結(jié)果（圖5B）可以看出：MIPs對(duì)5 種三嗪類(lèi)農(nóng)藥具有良好的選擇性，其中，MIPs對(duì)滅蠅胺的吸附量最高，為1 131.35 μg/g，表明MIPs能夠較好地記住模板化合物的結(jié)構(gòu)，并能通過(guò)鍵合的方式識(shí)別模板結(jié)構(gòu)相同或者相似的化合物。MIPs和NIPs對(duì)作為三嗪類(lèi)農(nóng)藥中的含氮結(jié)構(gòu)類(lèi)似物，即吡蟲(chóng)啉的吸附量差別不大，說(shuō)明制備的MIPs對(duì)5 種三嗪類(lèi)農(nóng)藥具有良好的選擇性。

2.4 固相萃取條件的優(yōu)化

2.4.1 固相萃取淋洗條件的優(yōu)化

對(duì)比不同淋洗液的洗脫效果，其固相萃取加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖6。結(jié)果表明，甲醇和二氯甲烷的使用均會(huì)不同程度地將目標(biāo)物質(zhì)洗脫下來(lái)，因?yàn)榧状己投燃淄闀?huì)破壞模板分子與印跡聚合物之間的作用力。使用體積分?jǐn)?shù)為20%的乙腈溶液作為淋洗溶液，可以消除干擾物質(zhì)而且不會(huì)將待測(cè)物質(zhì)洗脫下來(lái)。

圖6 不同淋洗液對(duì)固相萃取回收率的影響Fig.6 Effects of different washing solvents on the recovery of solid phase extraction

2.4.2 固相萃取洗脫條件的優(yōu)化

對(duì)比乙腈、甲醇、體積分?jǐn)?shù)為10%的醋酸-乙腈、體積分?jǐn)?shù)為10%的醋酸-甲醇的洗脫效果，其固相萃取加標(biāo)回收率的實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖7。與僅用乙腈和僅用甲醇的洗脫組相比，體積分?jǐn)?shù)為10%的醋酸-乙腈和體積分?jǐn)?shù)為10%的醋酸-甲醇共2 個(gè)洗脫組對(duì)撲草凈的回收效率更高。體積分?jǐn)?shù)為10%的醋酸-甲醇和體積分?jǐn)?shù)為10%的醋酸-乙腈的回收率提高了約20%，其中體積分?jǐn)?shù)為10%的醋酸-甲醇回收率達(dá)到93.1%，因?yàn)榇姿崮軌蚪档拖疵撘旱膒H值，阻止pH值達(dá)到農(nóng)藥和MIPs結(jié)合的最理想pH值，從而降低農(nóng)藥分子與分子印跡孔穴的結(jié)合概率。因此增加了洗脫效率，提高了MIPs對(duì)目標(biāo)農(nóng)藥的回收率[30]。并且，甲醇沒(méi)有參與MIPs的制備，也不會(huì)與印跡模板形成氫鍵構(gòu)象，所以甲醇的吸附能力比乙腈弱，因而選擇體積分?jǐn)?shù)為10%的醋酸-甲醇作為洗脫液。

圖7 不同洗脫液對(duì)固相萃取回收率的影響Fig.7 Effects of different eluents on the recovery of solid phase extraction

2.5 方法學(xué)評(píng)價(jià)

2.5.1 線性范圍與檢出限

根據(jù)信噪比為3計(jì)算方法的檢出限[31]，結(jié)果見(jiàn)表2。4 種三嗪類(lèi)農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)性系數(shù)均在0.99以上，線性范圍均在0.05～1.00 μg/mL。阿特拉津和西草凈的檢出限均為0.03 ng/mL，撲草凈和莠滅凈的檢出限均為0.01 ng/mL。

表2 4 種三嗪類(lèi)農(nóng)藥線性關(guān)系與檢出限Table 2Linear relationships and detection limits of four triazine pesticides

2.5.2 黃瓜中4 種農(nóng)藥的檢測(cè)結(jié)果

根據(jù)優(yōu)化的條件對(duì)黃瓜中的4 種加標(biāo)農(nóng)藥（0.1 μg/mL）進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果如圖8所示，未經(jīng)任何處理的黃瓜提取液在2～4 min會(huì)出現(xiàn)面積較大的不規(guī)則雜峰，此現(xiàn)象可能是由于黃瓜本身含有色素[32]，從而嚴(yán)重影響了儀器的靈敏度，導(dǎo)致4 種農(nóng)藥的回收率降低。采用市場(chǎng)中最普遍的C18固相萃取柱測(cè)定4 種農(nóng)藥，一定程度地凈化了雜質(zhì)峰，平均回收率為87.6%。相比于C18固相萃取柱，采用MIPs所制備的MISPE柱大大降低了黃瓜提取物中雜質(zhì)峰的干擾，其對(duì)目標(biāo)農(nóng)藥的平均回收率最高可達(dá)98.9%。

圖8 加標(biāo)黃瓜樣品色譜圖Fig.8 Extracted ion chromatograms of spiked cucumber samples

2.5.3 樣品回收率和精密度實(shí)驗(yàn)

為了進(jìn)一步驗(yàn)證MIPs所制備的MISPE柱對(duì)食品中三嗪類(lèi)農(nóng)藥的檢測(cè)效果，分別對(duì)黃瓜、蘋(píng)果和玉米中4 種農(nóng)藥的平均回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（relative standard deviation，RSD）進(jìn)行測(cè)定。如表3所示，在0.10、0.25、0.50 μg/mL加標(biāo)水平，黃瓜中4 種農(nóng)藥的平均回收率在84.2%～98.1%，RSD在2.2%～4.2%之間；蘋(píng)果中4 種農(nóng)藥的平均回收率在89.8%～104.3%，RSD在2.4%～4.3%之間；玉米中4 種農(nóng)藥的平均回收率在81.5%～97.2%，RSD在1.3%～5.8%之間。綜上，本實(shí)驗(yàn)制備的MISPE柱在黃瓜、蘋(píng)果和玉米的回收率均大于81.5%，凈化效果好，說(shuō)明該方法可以用于蘋(píng)果、黃瓜、玉米中三嗪類(lèi)農(nóng)藥的殘留檢測(cè)。

表3 回收率和精密度實(shí)驗(yàn)（n=3）Table 3 Spiked recoveries and precision (n=3)

3 結(jié) 論

采用本體聚合法制備了虛擬模板MIPs，并優(yōu)化了制備條件，當(dāng)滅蠅胺、MAA、TRIM物質(zhì)的量比為1∶4∶4，加入15 mL乙腈，聚合物的吸附效果最好，以該聚合物作為固相萃取柱的填料，制備MISPE，用于樣品前處理，建立了檢測(cè)食品中阿特拉津、撲草凈、莠滅凈、西草凈共4 種三嗪類(lèi)農(nóng)藥的分子印跡固相萃取-HPLC的方法，對(duì)蘋(píng)果、玉米、黃瓜樣品做加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，平均回收率在81.5%～104.3%之間，RSD為1.3%～5.8%，基本滿足農(nóng)藥殘留分析方法。本實(shí)驗(yàn)提高了檢測(cè)效率與精確度，為建立三嗪類(lèi)農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法提供參考。