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        國標(biāo)方法檢測特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方食品中部分B族維生素的基質(zhì)適用性

        2021-07-08 03:52:12郭美娟史國華李楊薇宇張?zhí)m天
        食品科學(xué) 2021年12期
        關(guān)鍵詞:用途實驗室檢測

        郭美娟,史國華,張 斌,李楊薇宇,張 巖*,張?zhí)m天*

        (河北省食品檢驗研究院,河北省食品安全重點實驗室,河北 石家莊 050200)

        我國每年新出生嬰兒有上千萬,其中一部分嬰兒由于各種疾病的影響,母乳或普通嬰兒配方奶粉不能滿足其營養(yǎng)需要。特殊醫(yī)學(xué)用途配方食品是這些嬰兒生命早期或相當(dāng)長時間內(nèi)賴以生存的主要食物來源,所以特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方食品的安全性、營養(yǎng)成分分析以及適用性等問題應(yīng)給予更多重視。常見的特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方食品包括無乳糖配方或低乳糖配方、乳蛋白部分水解配方、乳蛋白深度水解配方、氨基酸配方、早產(chǎn)/低出生體重嬰兒配方、嬰兒營養(yǎng)補(bǔ)充劑、氨基酸代謝障礙配方。每種特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方食品均有其自身的產(chǎn)品特點。本實驗選取在特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方食品較常見且比較有代表性的3 種配方。乳蛋白部分水解配方食品的主要技術(shù)要求此類食品是將牛奶蛋白經(jīng)過加熱和(或)酶水解為小分子乳蛋白、肽段和氨基酸,以降低大分子牛奶蛋白的致敏性。乳蛋白深度水解配方的主要技術(shù)要求應(yīng)用一定工藝手段將過敏原去除或不含過敏原,適用于牛奶蛋白過敏的嬰兒,另還需要根據(jù)嬰兒的代謝情況調(diào)整部分維生素和礦物質(zhì)。氨基酸配方的主要技術(shù)要求以氨基酸為主要原料,但不含或僅含少量與代謝障礙有關(guān)的氨基酸,滿足患者的部分蛋白質(zhì)(氨基酸)需求。GB 10765—2010《嬰兒配方食品》中將嬰兒配方食品分為乳基嬰兒配方食品和豆基嬰兒配方食品。乳基嬰兒配方食品是指以乳類及乳蛋白制品為主要原料,加入適量的維生素、礦物質(zhì)和/或其他成分,僅用物理方法生產(chǎn)加工制成的液態(tài)或粉狀產(chǎn)品。豆基嬰兒配方食品是指以大豆及大豆蛋白制品為主要原料得到的產(chǎn)品。因其以植物蛋白為主要原料,對乳糖不耐受、牛奶蛋白過敏、易腹瀉的敏感嬰兒更為適用。因此豆基配方在特殊醫(yī)學(xué)用途配方食品中更為常見??梢姡瑹o論從配方還是基質(zhì)看,特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方食品是一類既特殊又復(fù)雜的食品。

        特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方食品含有多種維生素和礦物質(zhì)等嬰兒生長不可缺少的營養(yǎng)成分。其中B族維生素是維持人體正常機(jī)能與代謝活動不可或缺的水溶性維生素,可以幫助維持心臟、神經(jīng)系統(tǒng)功能,維持消化系統(tǒng)及皮膚的健康,缺乏B族維生素,會導(dǎo)致代謝障礙,人體易出現(xiàn)怠滯和血壓升高等問題[1-5]。在嬰幼兒配方奶粉中常添加一定量的B族維生素,以保證嬰幼兒攝取的需要。但添加量必須控制在一定范圍,以免產(chǎn)生不良影響。因此檢測嬰幼兒配方奶粉以及特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方食品中的B族維生素含量有著重要的現(xiàn)實意義。常見的B族維生素有硫胺素(VB1)、核黃素(VB2)、煙酸/煙酰胺(VB3)、泛酸(VB5)、吡哆醇/吡哆醛/吡哆胺(VB6)、生物素(VB7)、葉酸(VB9)、鈷胺素(VB12)等。GB 25596—2010《特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方食品通則》中規(guī)定了在特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方食品中VB1、VB2、VB6、VB12、煙酸、泛酸、葉酸、生物素這8 種B族維生素的限量范圍[6]。

        目前國內(nèi)外關(guān)于檢測B族維生素的研究較多,文獻(xiàn)報道的檢測方法有毛細(xì)管電泳法[7]、酶聯(lián)免疫法[8]、電化學(xué)發(fā)光法[9]、液相熒光測定法[10]、液相色譜法[11-17]、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[18-21]、離子色譜法[22]、電感耦合等離子體質(zhì)譜法[23-24]等,各個方法均存在一定的優(yōu)缺點,且大多數(shù)方法主要針對部分基質(zhì)進(jìn)行方法的開發(fā)和應(yīng)用。

        我國有一系列食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)可用于對食品包括嬰幼兒配方奶粉中B族維生素的檢測[25-28],若檢測方法不適用于特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方食品,不利于特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方食品的研發(fā),同樣不利于監(jiān)管部門的監(jiān)督。特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方食品作為特殊食品,其基質(zhì)與普通食品區(qū)別較大,但國標(biāo)方法中并沒有專門針對特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方食品的檢測方法,國標(biāo)方法在特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方食品中的適用性有待研究。本研究聯(lián)合7 家實驗室按國標(biāo)方法分別對3 類不同配方的8 種特殊醫(yī)學(xué)用途配方奶粉中的VB1、VB2、VB6和煙酸進(jìn)行測定,分析國標(biāo)方法在特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方食品中的適用性,旨在推動我國特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方食品中成分檢測方法的完善。

        1 材料與方法

        1.1 材料、試劑與儀器

        選用特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方食品共3 類配方,8 種產(chǎn)品。分別為乳蛋白部分水解配方奶粉4 種,乳蛋白深度水解配方奶粉2 種,氨基酸配方奶粉2 種,樣品編號及配方信息見表1。

        表1 樣品信息Table 1Information about samples selected in this study

        儀器、試劑及標(biāo)準(zhǔn)溶液配制分別參照GB 5009.84—2016《食品中維生素B1的測定》第一法 高效液相色譜法、GB 5009.85—2016《食品中維生素B2的測定》第一法 高效液相色譜法、GB 5009.89—2016《食品中維生素?zé)熕岬臏y定》第二法 高效液相色譜法、GB 5009.154—2016《食品中維生素B6的測定》第一法 高效液相色譜法中要求進(jìn)行[25-28]。

        1.2 方法

        VB1的樣品前處理以及檢測分析:采用GB 5009.84—2016第一法 高效液相色譜法[25];VB2的樣品前處理以及檢測分析:采用GB 5009.85—2016第一法 高效液相色譜法[26];煙酸的樣品前處理以及檢測分析:采用GB 5009.89—2016第二法 高效液相色譜法[27];VB6的樣品前處理以及檢測分析:采用GB 5009.154—2016第一法 高效液相色譜法[28]。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 嬰兒配方奶粉參考樣品結(jié)果

        目前因無法得到特殊醫(yī)學(xué)用途產(chǎn)品的參考樣品,代以嬰兒配方奶粉參考樣品作為參考,參考值由具有ISO 17043資質(zhì)的實驗室基于EN 14122、EN 14152、EN 14164、EN 15652的內(nèi)部檢測方法依據(jù)能力驗證統(tǒng)計方法計算得出。本研究參加比對的7 家實驗室分別使用GB 5009.84—2016第一法、GB 5009.85—2016第一法、GB 5009.154—2016第一法、GB 5009.89—2016第二法對VB1、B2、B6和煙酸進(jìn)行檢測,檢測參考樣品結(jié)果,如表2、3所示。

        表2 嬰兒配方奶粉參考樣品含量檢測結(jié)果Table 2Results for the determination of B vitamins in reference samples of infant formula milk powder

        表3 嬰兒配方奶粉參考樣品Z值檢測結(jié)果Table 3Results obtained for the determination of B vitamins in reference samples of infant formula milk powder

        Z值用于衡量某一測試結(jié)果在一組數(shù)據(jù)中相對中位值的偏離程度,Z值絕對值越小,表明該結(jié)果的偏離程度越低。Z=(測試結(jié)果-中位值)/NIQR,其中NIQR為測試結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)四分位數(shù)間距。Z值的判定原則:|Z|≤2,為滿意結(jié)果;2<|Z|<3,為可疑或有問題結(jié)果;|Z|≥3,為不滿意結(jié)果。

        從以上數(shù)據(jù)可以看出,除VB1的檢測結(jié)果普遍偏高以外,其他檢測項目數(shù)值均與參考值相近,標(biāo)準(zhǔn)偏差比(standard deviation ratio,SDR)非常小,Z值小于2,證明檢測結(jié)果滿意。在VB1的測定中,參考樣品的結(jié)果使用EN 14122方法測定的,在鹽酸硫胺素?fù)Q算時選用系數(shù)1.26,而本研究采用的GB 5009.84—2016選用系數(shù)1.12。因此,本研究用各實驗室測定的結(jié)果普遍比參考樣品的參考值高。使用EN 14152與GB 5009.85—2016第一法測定VB2,使用EN 14164與GB 5009.154—2016第一法測定VB6,使用EN 15652的內(nèi)部方法與GB 5009.89—2016第二法測定煙酸,在嬰兒配方產(chǎn)品中檢測結(jié)果一致。驗證了國標(biāo)方法在嬰兒配方奶粉中的適用性以及7 家實驗室的檢驗?zāi)芰δ軌驖M足本研究的要求。

        2.2 特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方食品樣品中VB1測定結(jié)果

        表5 VB1 ZB值實驗結(jié)果(GB 5009.84—2016第一法)Table 5ZB value for vitamin B1in infant formula foods for special medical purposes determined by method I in the national standard GB 5009.84—2016 in seven laboratories

        實驗室間測量結(jié)果的Z值被定義為ZB值,用來衡量實驗室間測試結(jié)果的系統(tǒng)誤差。如表4、5所示,除實驗室3外,其他6 個實驗室的檢測結(jié)果精密度符合檢測要求,|ZB|值均不大于2。實驗室3有6 個偏高的離群結(jié)果,可能是由于選用了不合適的色譜柱,使目標(biāo)物VB1不能與干擾物完全分離造成的。根據(jù)GB/T 27404—2008《實驗室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢驗》中對于精密度的要求,被測組分含量為1 mg/kg時,實驗室內(nèi)變異系數(shù)為11%。從表4可以看出,所有樣品的實驗室間變異系數(shù)處于17.9%~39.2%之間,說明實驗室間結(jié)果有一定差異性。

        表4 VB1實驗結(jié)果(GB 5009.84—2016第一法)Table 4Results obtained for the determination of vitamin B1 in infant formula foods for special medical purpose by method I in the national standard GB 5009.84—2016

        Cm可以根據(jù)公差范圍和標(biāo)準(zhǔn)偏差得到。一般認(rèn)為,Cm≥1.67,為滿意結(jié)果,方法適用能力好;1.33<Cm<1.67,為有問題結(jié)果,方法能力有待進(jìn)一步確認(rèn);Cm<1.33,為不滿意結(jié)果,方法不適用。從表4看出,除深度水解配方的2 個樣品外,其余所有樣品的方法能力Cm值均小于1.33,認(rèn)為樣品與方法不適配。實驗室3幾乎所有樣品均為偏高的離群結(jié)果,剔除該實驗室的數(shù)據(jù)后重新計算,所有實驗室的方法能力Cm值均大于設(shè)定值1.67,認(rèn)為樣品與方法適配。

        2.3 特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方食品樣品中VB2測定結(jié)果

        表7 VB2 ZB值實驗結(jié)果(GB 5009.85—2016第一法)Table 7ZB values for vitamin B2in infant formula foods for special medical purposes determined by method I in the national standard GB 5009.85—2016 in seven laboratories

        從表6、7可以看出,除實驗室5的乳蛋白部分水解配方A和D、實驗室6的乳蛋白部分水解配方B和E、實驗室1的乳蛋白深度水解配方G的5 個檢測|ZB|值大于2,其余所有7 個實驗室的51 個檢測結(jié)果的|ZB|值不大于2,說明檢測結(jié)果精密度符合實驗要求。根據(jù)GB/T 27404—2008規(guī)定實驗室內(nèi)變異系數(shù)為11%,只有乳蛋白部分水解配方A樣品的變異系數(shù)為11.2%,略高于11%,其他樣品的實驗室間變異系數(shù)均小于11%,說明各實驗室間結(jié)果沒有差異性。所有樣品的方法能力Cm值均大于設(shè)定值1.67,認(rèn)為樣品與方法適配。

        表6 VB2實驗結(jié)果(GB 5009.85—2016第一法)Table 6Results for the determination of vitamin B2in infant formula foods for special medical purposes by method I in the national standard GB 5009.85—2016

        2.4 特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方食品樣品中VB6測定結(jié)果

        表9 VB6 ZB值實驗結(jié)果(GB 5009.154—2016第一法)Table 9ZB values for vitamin B6in infant formula foods for special medical purposes determined by method I in the national standard GB 5009.154—2016 in seven laboratories

        如表8、9所示,實驗室6 有5 個異常偏高的離群結(jié)果,剔除該實驗室數(shù)據(jù)后結(jié)果如表10、11所示。

        表8 VB6實驗結(jié)果(GB 5009.154—2016第一法)Table 8Results for the determination of vitamin B6in infant formula foods for special medical purposes by method I in the national standard GB 5009.154—2016

        表10 特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方食品樣品中VB6檢測結(jié)果分析(剔除離群數(shù)據(jù))Table 10Analysis of test results for vitamin B6in infant formula foods for special medical purposes (excluding outlier data)

        剔除實驗室6的數(shù)據(jù)后,從表11可以看出,除實驗室1的乳蛋白深度水解配方G、實驗室4的乳蛋白部分水解配方F的2 個檢測|ZB|值大于2,其余所有6 個實驗室的54 個檢測結(jié)果的|ZB|值不大于2,說明檢測結(jié)果精密度符合實驗要求。根據(jù)GB/T 27404—2008規(guī)定實驗室內(nèi)變異系數(shù)為11%,實驗室間結(jié)果差異性不大。除2 個乳蛋白部分水解配方樣品E、F和1 個氨基酸配方樣品H外,其余所有樣品的方法能力Cm值均大于1.67,認(rèn)為樣品與方法適配,樣品E、F和H與方法不適配。在樣品處理過程中發(fā)現(xiàn),C、D、H三個樣品的濾液不澄清,對檢測結(jié)果的影響還需進(jìn)一步研究。從配方上分析C、D、H三個樣品,發(fā)現(xiàn)這3 款產(chǎn)品的配方中都添加有經(jīng)預(yù)糊化處理的淀粉,這是其他配方和普通嬰兒配方奶粉所不具有的成分。在VB6的前處理過程中,將奶粉溶解后首先用淀粉酶進(jìn)行酶解,很有可能是經(jīng)預(yù)糊化處理的淀粉經(jīng)酶解后產(chǎn)生的渾濁導(dǎo)致濾液無法澄清。

        表11 特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方食品樣品中VB6檢測結(jié)果分析(剔除離群數(shù)據(jù))Table 11Analysis of test results for vitamin B6in infant formula foods for special medical purposes (excluding outlier data)

        實驗室6有5 個偏高的離群結(jié)果,此樣品吡哆胺附近有雜峰,積分有干擾,通過加標(biāo)確認(rèn)目標(biāo)峰。C、D、E、G樣品吡哆胺出峰位置有很大的雜峰,出峰時間與吡哆胺一致,容易被當(dāng)成吡哆胺積分。在現(xiàn)有色譜柱上進(jìn)行條件優(yōu)化后,除氨基酸配方D結(jié)果差異仍較大外,其他樣品均得到比較合理的結(jié)果。

        2.5 特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方食品樣品中煙酸測定結(jié)果

        表13 煙酸ZB值實驗結(jié)果(GB 5009.89—2016第二法)Table 13ZB values for niacin in infant formula foods for special medical purposes determined by method II in the national standard GB 5009.89—2016 in seven laboratories

        如表12、13所示,實驗室2有5 個偏高的離群結(jié)果,|ZB|值大于2,很可能是選用了不合適的色譜柱,使目標(biāo)物煙酸不能與干擾物完全分離造成,還需進(jìn)一步內(nèi)部調(diào)查原因。根據(jù)GB/T 27404—2008的要求,被測組分含量為10 mg/kg時,實驗室內(nèi)變異系數(shù)為7.5%。所有樣品的實驗室間變異系數(shù)處于10.6%~30.8%之間,實驗室間結(jié)果有一定差異性。所有樣品的方法能力Cm值均小于1.67,認(rèn)為樣品與方法不適配。剔除實驗室2的數(shù)據(jù)后,仍有一半樣品的方法能力Cm值小于1.67,認(rèn)為樣品與方法不適配。在樣品處理過程中發(fā)現(xiàn),同樣也是C、D、H三個樣品的濾液不澄清,除了與VB6的分析一樣考慮淀粉成分對濾液澄清度的影響,還考慮到可能是基質(zhì)的問題,導(dǎo)致國標(biāo)方法的前處理不適用于氨基酸配方和深度水解配方食品。VB1和VB2前處理都是用0.1 mol/L的鹽酸溶液溶解,經(jīng)高溫酸水解,調(diào)節(jié)pH值后用混合酶溶液酶解,取濾液。VB6和煙酸的前處理都是用水溶解后調(diào)pH值到1.7酸化再用氫氧化鈉溶液調(diào)pH值到4.5后進(jìn)行超聲過濾。很多的特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方食品的主要成分是乳糖、麥芽糊精、葡萄糖漿、玉米糖漿等,與普通的嬰兒配方奶粉以生牛乳為主要原料截然不同。說明該前處理方法不適用于特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方食品。

        表12 煙酸實驗結(jié)果(GB 5009.89—2016第二法)Table 12Results obtained for the determination of niacin in infant formula foods for special medical purposes by method II in the national standard GB 5009.89—2016

        2.6 加標(biāo)回收率結(jié)果

        分別對3 類不用基質(zhì)的特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方食品進(jìn)行回收率實驗,如表14所示。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)添加量基本與樣品含量一致進(jìn)行添加,從而驗證方法在特殊醫(yī)學(xué)用途產(chǎn)品基質(zhì)中的正確度。

        表14 各實驗室加標(biāo)回收率檢測結(jié)果Table 14Test results of spiked recovery rates in each laboratory

        根據(jù)GB/T 27404—2008《實驗室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢驗》中對回收率的要求,被測組分含量為1~100 mg/kg時,實驗室回收率范圍在90%~110%之間,被測組分含量在0.1~1 mg/kg時,實驗室回收率范圍在80%~110%之間。VB1回收率結(jié)果:除實驗室1、2、7外,其他4 家實驗室的回收率均不能達(dá)到國標(biāo)要求的80%~110%。實驗室3在3 個樣品類型上進(jìn)行的回收率實驗結(jié)果比參考范圍上限高出30%~80%。實驗室4~6的回收率結(jié)果整體偏低,實驗室7在乳蛋白深度水解配方和部分水解配方的回收率結(jié)果偏低,在氨基酸配方結(jié)果偏高。VB2回收率結(jié)果:實驗室2、5、6不能達(dá)到國標(biāo)要求的90%~110%,總體處于可接受范圍。最低的實驗室5在乳蛋白深度水解配方、氨基酸配方上分別達(dá)到-13%、-14%。VB6回收率結(jié)果:實驗室2、3、4外回收率偏高,其他實驗室的回收率均能達(dá)到國標(biāo)要求的80%~110%,總體處于可接受范圍。煙酸回收率結(jié)果:除實驗室4回收率均低于90%,實驗室2有1 個數(shù)據(jù)偏高,實驗室6有1 個數(shù)據(jù)偏低。其他實驗室的所有回收率都符合國標(biāo)要求的90%~110%。

        特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方食品回收率達(dá)不到國標(biāo)要求的原因可能是由于其基質(zhì)特殊,特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方食品基質(zhì)和普通嬰兒配方乳粉基質(zhì)有著很大區(qū)別,普通嬰兒配方乳粉中蛋白質(zhì)來源大多是乳蛋白或大豆蛋白,基質(zhì)相對簡單。特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方食品中蛋白質(zhì)等物質(zhì)來源多樣,基質(zhì)復(fù)雜。

        3 結(jié) 論

        特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方食品中部分水解配方、深度水解配方、氨基酸配方產(chǎn)品的基質(zhì)主要是由肽、氨基酸、部分整蛋白(氨基酸配方產(chǎn)品不含)構(gòu)成,不同于嬰幼兒配方乳粉全部為整蛋白的基質(zhì),而肽、氨基酸的物理化學(xué)性質(zhì)與蛋白質(zhì)不同,造成檢測過程中方法不適用的問題。其中,GB 5009.84—2016第一法基本適合檢測嬰兒配方產(chǎn)品及所檢測特殊醫(yī)學(xué)用途產(chǎn)品的VB1含量,但3 種配方都出現(xiàn)回收率偏低的情況。GB 5009.85—2016第一法適合檢測嬰兒配方產(chǎn)品以及特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方食品VB2含量,特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方食品產(chǎn)品中乳蛋白深度水解和氨基酸配方產(chǎn)品實驗中出現(xiàn)回收率低的現(xiàn)象,需要更多的實驗和數(shù)據(jù)進(jìn)行確認(rèn)。GB 5009.154—2016第一法適合檢測嬰兒配方產(chǎn)品和所檢測特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方食品中部分水解配方和深度水解配方產(chǎn)品,不適用于氨基酸配方產(chǎn)品中的VB6檢測。GB 5009.89—2016第二法適合檢測嬰兒配方產(chǎn)品中的煙酸,不適合特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方食品的檢測。

        食品中物質(zhì)的檢測,往往由于不同食品的基質(zhì)不同,其方法的適用性也有所不同,該方法是否適用于被測樣品,需進(jìn)行方法適用性驗證[29-30]。特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方食品中的VB1、VB2、VB6和煙酸在按照國標(biāo)方法進(jìn)行前處理時蛋白不易沉淀,出峰干擾較大,不同基質(zhì)的食品前處理及檢測分析的方法應(yīng)有差別,可對現(xiàn)有的國標(biāo)方法進(jìn)行改進(jìn),以適用于特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方食品中的VB1、VB2、VB6和煙酸的檢測[31]。

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