沙玉歡，毛曉英*，吳慶智，張 建，程衛(wèi)東

（石河子大學(xué)食品學(xué)院，新疆 石河子 832000）

核桃分心木（Diaphragma juglandis fructus），名核桃隔膜，簡稱分心木，是胡桃科核桃屬植物果核內(nèi)部的木質(zhì)隔膜，呈彎曲不規(guī)則的薄片狀，且質(zhì)地脆，一般是核桃總質(zhì)量的5%左右，是新疆傳統(tǒng)維吾爾族藥物之一，具有利尿清熱、健脾固腎、澀精等作用[1]。核桃分心木用水煮沸后飲用，具有治療腎虛遺精等功效。此外，長期喝分心木水泡物，對老年人的腰酸腿疼癥狀會有所緩解，并且有助于睡眠和提高免疫力[2-3]。核桃分心木中含有豐富的活性成分，包括黃酮、有機(jī)酸、酚類、生物堿、油脂、皂苷、揮發(fā)油、氨基酸、鞣質(zhì)、糖類、多肽和其他化合物[4-5]。大量研究結(jié)果表明分心木中含有較高的黃酮類物質(zhì)[1,4]。黃酮類物質(zhì)是以α-苯基苯并吡喃酮為主體的一系列物質(zhì)的總稱，在治療疾病和食品添加劑方面有較為廣泛的應(yīng)用，它不僅抑制各種自由基的產(chǎn)生，還可以清除人體內(nèi)過多的自由基，從而間接起到延緩衰老、預(yù)防心腦血管疾病和癌癥等作用[6]。目前，國內(nèi)外大多對多酚類化合物的抗氧化進(jìn)行研究[7]，并且以多酚混合體系研究為主，也對多酚類物質(zhì)單體的抗氧化能力以及多酚單體結(jié)構(gòu)與抗氧化能力的關(guān)系進(jìn)行了研究[8-9]，但研究相對較少。如王鵬等[10]研究發(fā)現(xiàn)黑米和蕎麥等雜糧多酚抗氧化能力是由多酚含量、結(jié)構(gòu)中羥基數(shù)量和構(gòu)型共同決定。槲皮苷和槲皮素是研究較多的黃酮物質(zhì)，二者對羥自由基、超氧陰離子自由基及1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）自由基有不同程度的清除作用，DPPH自由基的清除能力最強(qiáng)[11]。黃酮類化合物具有很強(qiáng)的抗氧化活性，其抗氧化活性與結(jié)構(gòu)有著密切的關(guān)系，不同結(jié)構(gòu)（如羥基數(shù)目及位置、羰基結(jié)構(gòu)和糖苷鍵位置等）的黃酮類化合物，表現(xiàn)出不同的抗氧化能力[12]。很多研究學(xué)者們對核桃分心木黃酮物質(zhì)進(jìn)行了研究，韓艷春[13]采用柱色譜法，從分心木中分離得到5,7,8,3’,4’-黃酮醇-3-O-鼠李糖苷。楊明珠等[14]采用硅膠柱色譜結(jié)合Sephadex LH-20柱色譜法從分心木中分離得到三種黃酮類物質(zhì)，分別為柚皮素、兒茶素和二氫槲皮素。景援朝[1]和趙煥新[15]等采用反復(fù)硅膠柱色譜、Sephadex LH-20柱色譜從分心木的石油醚提取物中首次分離得到胡桃苷A，從分心木的乙酸乙酯提取物中首次分離得到紫杉葉素-3-O-α-L-呋喃阿拉伯糖苷、二氫吐葉醇-9-O-β-D-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-(6’-沒食子?；?-α-D-半乳糖苷、槲皮苷。雖然很多研究學(xué)者對核桃分心木的化學(xué)成分進(jìn)行了研究，但是對分心木黃酮物質(zhì)的組分的系統(tǒng)性研究鮮見報道。本研究對核桃分心木黃酮物質(zhì)進(jìn)行分離純化并對其組分進(jìn)行組成分析，對其分離純化組分進(jìn)行抗氧化能力測定，以期鑒定出新的黃酮物質(zhì)，同時進(jìn)行黃酮物質(zhì)含量與抗氧化性指標(biāo)之間的相關(guān)性分析，并發(fā)現(xiàn)各種抗氧化指標(biāo)和黃酮組分的關(guān)系。研究結(jié)果將為核桃分心木黃酮物質(zhì)的組分抗氧化性及構(gòu)效關(guān)系奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

核桃分心木購于石河子農(nóng)貿(mào)市場。

柚皮素、蘆丁、異槲皮素、金絲桃苷、二氫槲皮素、兒茶素、槲皮苷、沒食子酸（屬多酚）標(biāo)準(zhǔn)品 北京索萊寶科技有限公司；無水乙醇 天津市富宇精細(xì)化工有限公司；NaOH、NaNO2、Al(NO3)3、FeSO4、FeCl2、FeCl3天津福晨化學(xué)試劑有限公司；鄰菲啰啉 上海弘順生物園科技有限公司；DPPH、硫代巴比妥酸（thiobarbituric acid，TBA） 上海源葉生物科技有限公司；鄰苯三酚、鐵氰化鉀、鹽酸、三氯乙酸（trichloroacetic acid，TCA）、鹽酸天津永晟精細(xì)化工有限公司；菲洛嗪 上海恒遠(yuǎn)生物技術(shù)發(fā)展有限公司；卵磷脂（lecithos，LLS） 北京奧博星生物技術(shù)有限公司；以上試劑皆為分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

752型紫外-可見分光光度計 上海光譜儀器有限公司；DK-8D型數(shù)顯恒溫水浴鍋 江蘇金怡儀器科技有限公司；XB 220A普利賽斯電子天平 普利賽斯國際貿(mào)易（上海）有限責(zé)任公司；GL21M型高速冷凍離心機(jī)長沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司；DFT-100型手提式高速中藥粉碎機(jī) 溫嶺市林大機(jī)械有限公司；KQ-200VDE型雙頻數(shù)控超聲波清洗機(jī)、標(biāo)準(zhǔn)分析篩 新鄉(xiāng)市雷蒙特機(jī)械有限公司；RE-3000型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 上海亞榮生化儀器廠；SCIENTZ-18N型冷凍干燥機(jī) 寧波新芝生物科技股份有限公司。

1.3 方法

1.3.1 分心木黃酮物質(zhì)的提取

取適量核桃分心木，置于烘箱中以55 ℃烘干2 h，再用粉碎機(jī)粉碎至粒狀，過60 目篩，得到分心木粉末。分別取8 g分心木粉于300 mL離心管中，60%乙醇溶液為溶劑，料液比1∶30（g/mL）、超聲功率200 W的條件下超聲提取1 h。將提取液5 000 r/min離心10 min，收集上清液并且用定量濾紙過濾。將濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸去乙醇，真空冷凍干燥得固體粉末備用。

1.3.2 AB-8大孔樹脂分離純化

在上樣液體積1 000 mL、上樣液質(zhì)量濃度2.1 mg/mL、流速1 mL/min條件下進(jìn)行上樣。在乙醇體積分?jǐn)?shù)60%、洗脫劑體積930 mL、流速1.78 mL/min條件下進(jìn)行洗脫。利用自動收集器以每10 mL為一管進(jìn)行收集，并得洗脫曲線。

1.3.3 總黃酮質(zhì)量濃度的測定

1.3.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

采用NaNO2-Al(NO3)3比色法[16]獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線。準(zhǔn)確稱量10 mg蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品，用60%乙醇溶液于50 mL容量瓶定容，得0.20 mg/mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液。分別吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液 0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，于10 mL容量瓶中，60%乙醇溶液定容，得到質(zhì)量濃度分別為0、0.01、0.02、0.03、0.04、0.05 mg/mL的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液。6 個容量瓶中分別加入0.3 mL 5 g/100 mL NaNO2溶液，室溫反應(yīng)6 min，再分別加入0.3 mL 10 g/100 mL Al(NO3)3溶液，繼續(xù)反應(yīng) 6 min，最后加入4 mL 4 g/100 mL NaOH溶液，用體積分?jǐn)?shù)30%乙醇溶液定容，室溫等待15 min，搖勻，507 nm波長處測定吸光度。以吸光度（A）為縱坐標(biāo)，蘆丁溶液質(zhì)量濃度（C）為橫坐標(biāo)，繪制蘆丁溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.3.2 分心木總黃酮的測定

分別取樣品液0.1 mL，按照1.3.3.1節(jié)的方法進(jìn)行反應(yīng)，于507 nm波長處測吸光度。由標(biāo)準(zhǔn)曲線的擬合方程得到黃酮物質(zhì)的質(zhì)量濃度。

1.3.4 抗氧化能力的測定

1.3.4.1 粗提物樣品預(yù)處理

分離純化收集到的6 管樣品，分別吸取0.1 mL于20 mL容量瓶中，將樣品稀釋200 倍進(jìn)行抗氧化能力測定。

1.3.4.2 DPPH自由基清除能力的測定

參照Cheng Zhihong等[17]的方法，略有改動。以維生素C（vitamin C，VC）為陽性對照。DPPH用無水乙醇溶液超聲溶解，配制成一定濃度（517 nm波長處吸光度為0.4～0.8）的溶液。4 mL DPPH溶液中加入4 mL樣品液在517 nm波長處的吸光度記為A1；4 mL無水醇溶液中加4 mL樣品液在517 nm波長處的吸光度記為A2；4 mL DPPH溶液中加入4 mL無水乙醇溶液在517 nm波長處的吸光度記為A。DPPH自由基清除率按式（1）計算：

1.3.4.3 羥自由基清除率的測定

采用鄰二氮菲-Fe2+法[18]。分別吸取0.75 mmol/L鄰菲羅啉和pH 7.4的磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）1.5 mL于試管中，充分混勻后吸取0.75 mmol/L硫酸亞鐵溶液1 mL于試管中，再向試管中加入粗提物溶液1 mL混勻置于37 ℃水浴鍋中反應(yīng)30 min，反應(yīng)結(jié)束后在波長536 nm波長處測定各管的吸光度為A1；其中陰性對照實(shí)驗用1 mL蒸餾水代替樣品溶液，再加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.01%的過氧化氫溶液反應(yīng)30 min測定吸光度記為A0；陽性對照實(shí)驗用1 mL的蒸餾水代替過氧化氫溶液，測定吸光度記為A2。1 mL樣品溶液同質(zhì)量濃度的VC作為陽性對照。羥自由基清除率按式（2）計算：

1.3.4.4 超氧陰離子自由基清除率的測定

采用鄰苯三酚法[19]。取5 mL PBS（pH 8.2）與1 mL樣品溶液于試管中混合，室溫（25 ℃）反應(yīng)15 min，然后分別加入0.2 mL的鄰苯三酚（45 mmoL/L）管中搖勻，繼續(xù)反應(yīng)4 min，最后用滴管加入1 滴10 mol/L鹽酸溶液終止反應(yīng)。在325 nm波長下測定吸光度，記為A1；0.2 mL的蒸餾水代替鄰苯三酚溶液測定的吸光度記為A2；用1 mL溶劑代替樣品溶液測定吸光度記為A3，實(shí)驗重復(fù)3 次，同質(zhì)量濃度的VC作陽性對照。超氧陰離子自由基清除率按式（3）計算：

1.3.4.5 ABTS陽離子自由基清除能力測定

采用黃尚榮等[20]的方法，并略有改動。提前一天配制7 mmol/L ABTS溶液與2.45 mmol/L過硫酸鉀溶液，將配好的ABTS溶液與過硫酸鉀溶液按1∶0.5體積比例在錐形瓶中混勻，室溫且避光反應(yīng)12 h，反應(yīng)產(chǎn)生ABTS陽離子自由基。使用前將ABTS溶液用無水乙醇稀釋至734 nm波長處的吸光度大約為0.700±0.020。1 mL樣品和6 mL稀釋的ABTS溶液，30 ℃反應(yīng) 6 min，于734 nm波長下測吸光度，記為A1。1 mL無水乙醇代替樣品溶液，吸光度記為A0。重復(fù)3 次，VC作陽性對照。ABTS陽離子自由基清除率按式（4）計算：1.3.4.6 鐵離子還原力的測定

參照高行恩等[21]的方法，取不同濃度的樣品中1 mL于試管中，分別加入2.5 mL磷酸緩沖液（0.2 mol/L，pH 6.6）和1%的鐵氰化鉀溶液2.5 mL，50 ℃水浴20 min，冷卻至室溫，繼續(xù)加入10 g/100 mL的TCA溶液2.5 mL反應(yīng)片刻，等待10 min，取2.5 mL上清液，加入2.5 mL去離子水和0.5 mL 0.1 g/100 mL的FeCl3溶液，靜置反應(yīng)10 min，并在700 nm波長處測定吸光度。吸光度表示鐵離子還原力。VC作陽性對照。

1.3.4.7 活性氧（reactive oxygen species，ROS）自由基清除率的測定

稱取300 mg LLS溶解于30 mL pH 7.4 PBS（10 mmol/L）中，冰浴超聲溶解，得到LLS溶液。于燒杯中加入100 mL蒸餾水，并依次加入15 g TCA、0.375 g TBA和2.1 mL濃鹽酸，得到TCA-TBA-HCl混液。于樣品管中依次加入1.0 mL TCA-TBA-HCl混液、1.0 mL FeCl3溶液（400 μmol/L）、1.0 mL抗壞血酸（400 μmol/L）和1.0 mL樣品，于37 ℃避光水浴60 min，再加入2.0 mL TCA-TBA-HCl混合液，100 ℃水浴15 min，冰水浴冷卻混合液至室溫，2 000 r/min離心10 min，取上清液在535 nm波長處測吸光度As。以1.0 mL重蒸水代替1.0 mL樣品做空白實(shí)驗，具體流程同樣品管，空白實(shí)驗的吸光度AC[22-23]。ROS自由基清除率由式（5）計算：

1.3.5 高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用法測定黃酮組分

1.3.5.1 標(biāo)準(zhǔn)品和樣品質(zhì)量濃度

8 個標(biāo)準(zhǔn)品（柚皮素、蘆丁、異槲皮素、金絲桃苷、二氫槲皮素、兒茶素、槲皮苷、沒食子酸（屬多酚））質(zhì)量濃度分別為1、10、25、50、100、150、200 ng/mL，樣品配制質(zhì)量濃度為0.1 mg/mL。上樣質(zhì)量濃度1 μg/mL。

1.3.5.2 色譜條件

ACQUITY超高效液相色譜儀，色譜柱BEH C18（50 mm×5 mm，1.7 μm），柱溫30 ℃，流速0.3 mL/min，進(jìn)樣量1.0 μL（10 μg/mL），最終優(yōu)化流動相：0.1%甲酸溶液（A）-乙腈（B）溶液，梯度洗脫：0～2.5 min，86% A，14% B；2.5～3.5 min，86%～70% A，14%～30% B；3.5～4.5 min，70%～58% A，30%～42% B；4.5～5.5 min，58%～5% A，42%～95% B；5.5～6 min，5%～86% A，95%～14% B；平衡2 min。

1.3.5.3 質(zhì)譜條件

采用XEVO三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀，配有電噴霧離子源，離子源溫度為200 ℃，毛細(xì)管電壓為2.0 kV，離子源補(bǔ)償電壓為50 V，脫溶劑氣溫度為450 ℃，脫溶劑氣流量為750 L/H，錐孔氣流量為150 L/H，霧化氣壓力為700 kPa，采用多反應(yīng)檢測模式掃描。

1.3.6 驗證實(shí)驗

由于樣品中槲皮苷含量最多，并且抗氧化指標(biāo)高于VC陽性對照。因此配制相同質(zhì)量濃度的槲皮苷標(biāo)準(zhǔn)品、8 種現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)品混樣以及VC溶液，測定羥自由基清除率、超氧陰離子自由基清除率、ROS自由基清除率，驗證某些黃酮物質(zhì)的抗氧化能力可能高于VC陽性對照或者黃酮物質(zhì)綜合作用高于單獨(dú)成分黃酮物質(zhì)的抗氧化能力。

1.4 數(shù)據(jù)處理

采用Origin 7.5繪圖，采用SPSS 25.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 黃酮標(biāo)準(zhǔn)曲線

由標(biāo)準(zhǔn)曲線法得到擬合方程為：Y=11.99X－0.005 7，R2=0.995 8，蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液在0.01～0.05 mg/mL范圍內(nèi)，呈良好的線性關(guān)系。

2.2 粗黃酮物質(zhì)測定結(jié)果

得到的核桃分心木粗黃酮物質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為（7.76±1.023）%。這與趙娟娟[24]研究結(jié)果相似，其在50%乙醇溶液、提取液料比1∶20.7、提取溫度50.3 ℃、提取時間4 h的條件下，核桃分心木黃酮物質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為6.693%。

2.3 分離純化洗脫曲線

由圖1可知，分離純化后收集到的黃酮物質(zhì)質(zhì)量濃度有明顯差異。因此將第6～10管各收集為1 管，第11～15管合并收集，共收集6 管。

圖1 洗脫曲線Fig.1 Elution curve

2.4 抗氧化能力測定結(jié)果

如表1所示，6 管樣品中的ABTS陽離子自由基清除率、羥自由基清除率以及ROS自由基清除率出現(xiàn)高于VC陽性對照，原因可能與黃酮物質(zhì)的組分有關(guān)，不同組分的黃酮物質(zhì)之間的組合提高抗氧化能力。6 管樣品中槲皮苷為主要成分，這與呂曉玲等[25]研究得出的結(jié)論相似，槲皮苷可有效清除體內(nèi)超氧化物及羥自由基等，抑制脂質(zhì)過氧化。

表1 分離純化得到的6 管樣品的抗氧化能力測定結(jié)果Table 1Antioxidant capacity of six flavonoid fractions

2.5 高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用法測定黃酮組分

如表2所示， 6 管樣品測定結(jié)果顯示樣品中均含有柚皮素、異槲皮素、金絲桃苷、二氫槲皮素、兒茶素、槲皮苷，其中，槲皮苷含量最多。4號管含有少量的蘆丁，1號和4號管含有少量的多酚。如圖2～4所示，樣品中除已知的柚皮素、異槲皮素、金絲桃苷、二氫槲皮素、兒茶素、槲皮苷外，還含有槲皮素、黃芪苷和表兒茶素沒食子酸酯，這3 種黃酮物質(zhì)首次在核桃分心木中發(fā)現(xiàn)并證實(shí)。如表3所示，柚皮苷含量與DPPH自由清除率和ABTS陽離子自由基清除率有顯著負(fù)相關(guān)性，兒茶素含量與ROS清除率呈正相關(guān)。黃酮物質(zhì)的自由基清除能力的大小與其供氫體、供氧質(zhì)子等有關(guān)[26-27]。這是由于具有B—4’—OH、B—3’—OH和A—7—OH，B環(huán)具有臨位酚羥基，這些結(jié)構(gòu)可以提供了供氫體和供氧質(zhì)子，阻斷自由基的鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，因此這類黃酮物質(zhì)具有較高的抗氧化能力。如圖5柚皮素結(jié)構(gòu)式，B環(huán)無鄰位酚羥基，無B—3’—OH結(jié)構(gòu)、C3—OH和C2＝C3結(jié)構(gòu)。因此柚皮素對自由基清除率相對于其他黃酮類物質(zhì)并不高，尤其是對DPPH自由基和ABTS陽離子自由基清除率的貢獻(xiàn)并不顯著，甚至產(chǎn)生促氧化的作用。兒茶素類物質(zhì)對體內(nèi)的超氧陰離子自由基、脂質(zhì)自由基及脂質(zhì)氫過氧自由基有較好的清除率，而對DPPH自由基清除率較弱[28]。本研究對抗氧化能力和黃酮組分相關(guān)性分析結(jié)果也證實(shí)了這一點(diǎn)。

表2 樣品中主要物質(zhì)組分質(zhì)量濃度Table 2Concentrations of eight flavonoids in six samples

圖2 標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中槲皮素的質(zhì)譜圖Fig.2 Mass chromatograms of quercetin standard and sample

圖5 柚皮素化學(xué)結(jié)構(gòu)式Fig.5 Chemical structure formula of naringin

表3 6 管樣品中各個組分與抗氧化指標(biāo)相關(guān)性分析Table 3Correlation analysis between flavonoid contents and antioxidant properties

圖3 標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中表兒茶素沒食子酸酯的質(zhì)譜圖Fig.3 Mass chromatograms of epicatechin gallate standard and sample

圖4 標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中黃芪苷的質(zhì)譜圖Fig.4 Mass chromatograms of astragaloside standard and sample

2.6 驗證實(shí)驗

如表4所示，槲皮苷的ABTS陽離子自由基清除率高于8 個標(biāo)準(zhǔn)品混合樣（混樣），高于陽性對照VC。而槲皮苷的羥自由基清除率和ROS自由基清除率略高于陽性對照VC和混樣，差異不顯著。通過驗證實(shí)驗發(fā)現(xiàn)，槲皮苷有很強(qiáng)的ABTS陽離子自由基清除能力。黃酮類化合物具有很強(qiáng)的抗氧化活性，其抗氧化活性與結(jié)構(gòu)有著密切的關(guān)系，不同結(jié)構(gòu)（如羥基數(shù)目及位置、羰基結(jié)構(gòu)和糖苷鍵位置等）的黃酮類化合物，表現(xiàn)出不同的抗氧化能力。一般而言，體外和細(xì)胞抗氧化實(shí)驗證實(shí)具有3’,4’-鄰二羥基、C3—OH、C2＝C3和C—4羰基構(gòu)的黃酮化合物要比沒有這些結(jié)構(gòu)的黃酮物質(zhì)的抗氧化能力強(qiáng)[29]。圖6是槲皮苷的分子結(jié)構(gòu)式，槲皮苷具有3’,4’-鄰二羥基、C2＝C3和C—4羰基結(jié)構(gòu)，因此槲皮苷具有很好的自由基清除能力的實(shí)驗結(jié)果合理。

表4 8 種黃酮標(biāo)品混樣抗氧化能力的測定Table 4Antioxidant capacity of mixture of eight flavonoid standards

圖6 槲皮苷分子結(jié)構(gòu)式Fig.6 Molecular structure formula of quercetin

3 結(jié) 論

本研究對分心木黃酮物質(zhì)進(jìn)行提取及分離純化，對分離純化的核桃分心木黃酮物質(zhì)進(jìn)行收集，并對收集到的6 管樣品進(jìn)行組分分析以及6 種抗氧化指標(biāo)的測定。組分分析發(fā)現(xiàn)除文獻(xiàn)已報道的黃酮類物質(zhì)柚皮素、蘆丁、異槲皮素、金絲桃苷、二氫槲皮素、兒茶素、槲皮苷，沒食子酸（屬多酚）外，還含有槲皮素、黃芪苷、表兒茶素沒食子酸酯，其中6 管樣品中槲皮苷含量最多，蘆丁與沒食子酸含量最少甚至不存在?？寡趸芰y定結(jié)果與黃酮組分和含量相關(guān)性分析結(jié)果顯示，柚皮苷含量與DPPH自由基和ABTS陽離子自由基清除率呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)，即柚皮素組分對DPPH自由基和ABTS陽離子自由基的清除活性較低，由于自身結(jié)構(gòu)原因，可能反而產(chǎn)生促氧化的作用。兒茶素對ROS自由基有很好的清除效果，對DPPH自由基清除效果不好。并且槲皮苷有很強(qiáng)的ABTS陽離子自由基清除率。實(shí)驗結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了具有B—4’—OH、B—3’—OH和A—7—OH，B環(huán)具有臨位酚羥基，3’,4’-鄰二羥基、C3—OH、C2＝C3和C—4羰基等結(jié)構(gòu)可以提高黃酮化合物抗氧化活性。研究結(jié)果為柚皮苷、兒茶素和槲皮苷的抗氧化能力及其構(gòu)效關(guān)系的研究奠定基礎(chǔ)，也為核桃副產(chǎn)物的加工利用提供提供了理論依據(jù)。