沙金平 薛 萌 謝媛媛

結(jié)直腸癌又稱大腸癌，屬于人體最常見的惡性腫瘤之一，晚期結(jié)直腸癌的治療以化療為主，鉑類藥物是其常用化療藥物[1-2]。研究表明，RPA1基因與鉑類等化療藥物耐藥性的產(chǎn)生息息相關(guān)，其基因多態(tài)性與多種腫瘤化療后臨床療效與總體生存期密切相關(guān)[3-4]。在上述研究背景下，本研究探討了RPA1基因多態(tài)性與晚期結(jié)直腸癌鉑類藥物臨床療效的相關(guān)性，為臨床制定結(jié)直腸癌患者個(gè)性化治療方案提供一定的理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

將2015年8月至2017年8月本院的晚期結(jié)直腸癌患者92例作為研究對(duì)象，納入標(biāo)準(zhǔn)：均符合《臨床腫瘤內(nèi)科手冊(cè)》中晚期結(jié)直腸癌的病理學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并除結(jié)直腸癌外其他惡性腫瘤者；對(duì)本研究所用藥物過敏及不耐受者；非首次治療者；適宜手術(shù)治療者；臨床病理資料不全者。本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)會(huì)議表決通過。

1.2 方法

基因分型：在給予鉑類藥物化療前采集所有患者外周靜脈血5 ml，置于抗凝管內(nèi)靜置1.5 h，用離心機(jī)(德國Hettich，ROTOFIX32A)離心10 min，轉(zhuǎn)速3 000 r/min，用移液槍抽取上清液置入微型離心管中，-80 ℃保存?zhèn)溆?。取出備用血清，用水浴鍋預(yù)熱5 min，溫度37 ℃，預(yù)熱畢取血清200 μl，用DNA提取試劑盒提取患者外周血清總DNA，用基因分型試劑盒、熒光定量試劑盒、PCR儀(美國ABI，QuantStudio3)對(duì)RPA1基因進(jìn)行標(biāo)記、擴(kuò)增，用SDS軟件對(duì)擴(kuò)增后產(chǎn)物進(jìn)行基因分型。相關(guān)試劑盒操作流程均嚴(yán)格參照試劑和儀器說明書。藥物治療：對(duì)所有患者給予奧沙利鉑注射液靜脈滴注2 h，每次劑量130 mg/m2，每3周給藥1次。整個(gè)療程為3個(gè)月。分組：根據(jù)RPA1基因型的不同將患者分為CC組、CT組、TT組。

1.3 觀察指標(biāo)

(1)觀察所有患者RPA1基因分型結(jié)果。(2)療程結(jié)束后，參照《RECIST療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)》[6]，對(duì)所有患者進(jìn)行療效評(píng)定，以腫瘤病灶消失視為完全緩解(complete remission，CR)；以腫瘤病灶最大直徑縮小30%以上視為部分緩解(partial remission，PR)；以腫瘤最大直徑縮小30%以下或增大20%以下視為病情穩(wěn)定(stable Disease，SD)；以腫瘤最大直徑增大20%以上視為病情惡化(progression disease，PD)?？傆行?CR+PR+SD。比較CC組、CT組、TT組之間的療效差異。(3)將CR、PR、SD患者劃分為有效組，將PD患者劃分為無效組，比較2組一般資料差異，并對(duì)相關(guān)影響因素進(jìn)行Logistic回歸分析，觀察晚期結(jié)直腸癌鉑類藥物臨床療效的獨(dú)立影響因素。(4)對(duì)患者進(jìn)行為期2年的門診、電話隨訪，第1年前6個(gè)月每半月1次，后6個(gè)月每月1次，第2年每2個(gè)月1次，記錄CC+CT組、TT組的總生存期(overall survival，OS)情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 RPA1基因分型結(jié)果

本研究92例晚期結(jié)直腸癌患者中，RPA1基因116為密碼子中第二位堿基共存在3種等位基因型，分別為CC型(n=38)、CT型(n=28)、TT型(n=26)，基因出現(xiàn)頻率分別為41.31%、30.43%、28.26%。

2.2 CC組、CT組、TT組治療后臨床療效比較

CC組、CT組、TT組總體臨床療效與治療總有效率比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；組間比較，CC組、CT組治療總有效率明顯高于TT組(P<0.05)，CC組與CT組治療總有效率無明顯差異(χ2=0.001，P>0.05)。見表1。

表1 CC組、CT組、TT組治療后臨床療效比較(例，%)

2.3 有效組與無效組一般資料比較

單因素分析結(jié)果顯示，有效組與無效組在有無癌栓、RPA1基因分型上差異明顯(P<0.05)。見表2。

表2 有效組與無效組一般資料比較

2.4 影響化療療效的Logistic多因素回歸分析

將晚期結(jié)直腸癌患者化療療效作為因變量，將單因素分析中差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的因素(有無癌栓、RPA1基因分型)作為自變量，并進(jìn)行賦值，晚期結(jié)直腸癌患者化療療效(有效=0，無效=1)，有無癌栓(無=0，有=1)、RPA1基因分型(CC型或CT型=0，TT型=1)，將上述數(shù)據(jù)納入Logistic回歸模型，結(jié)果顯示，RPA1基因分型是晚期結(jié)直腸癌患者鉑類藥物臨床療效的獨(dú)立影響因素(OR=1.570，P<0.05)。見表3。

表3 晚期結(jié)直腸癌患者化療療效的Logistic多因素回歸分析

2.5 不同RPA1基因型患者用藥后的生存分析

CC+CT組中位OS為18個(gè)月，TT組中位OS為6個(gè)月；CC+CT組2年內(nèi)生存率92.42%，TT組2年內(nèi)生存率為57.69%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=32.212，P<0.05)。生存曲線分析結(jié)果顯示，CC+CT組2年內(nèi)生存情況明顯優(yōu)于TT組，經(jīng)Log-rank檢驗(yàn)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=33.590，P<0.05)。見圖1。

圖1 不同RPA1基因型患者用藥后的生存曲線

3 討論

結(jié)直腸癌早期多無明顯癥狀，晚期可表現(xiàn)為大便性狀改變、腹痛、腹脹、發(fā)熱、貧血、消瘦、腹部包塊、腸梗阻等，可因腫瘤轉(zhuǎn)移而累及其他器官，導(dǎo)致多器官功能障礙，嚴(yán)重威脅患者生命健康[7]。鉑類藥物是臨床用于治療晚期結(jié)直腸癌的常用化療藥物，但其臨床療效具有個(gè)體差異性，其差異形成原因尚且不明[8]。據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，RPA1基因可參與多種惡性腫瘤疾病的發(fā)生發(fā)展，與多種惡性腫瘤患者化療后的無進(jìn)展生存率相關(guān)[9]。現(xiàn)為探討RPA1基因多態(tài)性與晚期結(jié)直腸癌鉑類藥物臨床療效的相關(guān)性，特做此研究。

本研究結(jié)果顯示，CC組、CT組、TT組總體臨床療效與治療總有效率比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；兩組間比較，CC組、CT組治療總有效率明顯高于TT組，而CC組與CT組治療總有效率無明顯差異，提示整體上，不同RPA1基因型的晚期結(jié)直腸癌患者用鉑類藥物治療的效果存在明顯差異，其中CC型、CT型患者臨床療效要優(yōu)于TT型患者。究其原因，鉑類化療藥物的藥理機(jī)制主要是通過產(chǎn)生水化衍生物靶向作用于DNA，與DNA雙鏈共價(jià)結(jié)合，易形成鏈內(nèi)或鏈間的相互交聯(lián)，從而干擾腫瘤細(xì)胞DNA結(jié)構(gòu)的正常復(fù)制[10]。研究表明，RPA1基因可合成一種具有高度保守蛋白序列的RPA1蛋白，此蛋白可與啟動(dòng)子上游含大量GATA序列的順式作用元件相結(jié)合，能抑制腫瘤細(xì)胞惡性增殖所需蛋白的表達(dá)，同時(shí)可促進(jìn)鉑類藥物與腫瘤細(xì)胞DNA的靶向結(jié)合，與鉑類藥物發(fā)揮協(xié)同抑癌作用[11]。而研究表明，CC型、CT型RPA1基因均可正常合成RPA1蛋白，TT型RPA1基因由于密碼子發(fā)生無義突變，RPA1蛋白表達(dá)缺失，因此抑癌作用明顯弱于CC型、CT型[12]。

本研究Logistic多因素回歸分析結(jié)果顯示，RPA1基因分型是晚期結(jié)直腸癌患者鉑類藥物臨床療效的獨(dú)立影響因素(OR=1.570，P<0.05)；生存曲線分析結(jié)果顯示，CC+CT組2年內(nèi)生存情況明顯優(yōu)于TT組，提示RPA1基因多態(tài)性與晚期結(jié)直腸癌鉑類藥物臨床療效的密切相關(guān)，TT型RPA1基因是晚期結(jié)直腸癌患者鉑類藥物治療無效的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。探究其機(jī)制，研究表明，DNA修復(fù)功能是人體保持基因穩(wěn)定性的重要保障，鉑類化療藥物通過破壞腫瘤細(xì)胞DNA正常雙鏈結(jié)構(gòu)，抑制其DNA復(fù)制過程，從而發(fā)揮抑癌效應(yīng)，因此DNA修復(fù)功能的個(gè)體化差異是晚期結(jié)直腸癌患者用鉑類藥物治療后出現(xiàn)療效差異的關(guān)鍵因素[13-14]。相關(guān)研究表明，RPA1基因CC型、CT型患者由于10號(hào)外顯子密碼子發(fā)生突變，導(dǎo)致氨基酸編碼序列變化，從而影響DNA修復(fù)功能，導(dǎo)致其對(duì)鉑類藥物的耐藥性要低于RPA1基因TT型患者[15]，因此RPA1基因CC型、CT型晚期結(jié)直腸癌患者鉑類藥物的臨床療效優(yōu)于RPA1基因TT型患者。

綜上所述，TT型RPA1基因是晚期結(jié)直腸癌患者鉑類藥物治療無效的獨(dú)立危險(xiǎn)因素；RPA1基因多態(tài)性與晚期結(jié)直腸癌鉑類藥物臨床療效密切相關(guān)，有望成為預(yù)測(cè)臨床療效的新指標(biāo)。