楊園，谷亦平

(1.武漢藥品醫(yī)療器械檢驗所，武漢 430073；2.桂林醫(yī)學院公共衛(wèi)生學院，桂林 541199)

鹽酸右美托咪定(dexmedetomidine hydrochloride)化學名稱為(+)-4-(S)-[1-(2，3-二甲基苯基)乙基]-1H-咪唑鹽酸鹽，是Orion pharma/Abott公司研發(fā)的鎮(zhèn)靜催眠藥，2000年首次在美國上市。鹽酸右美托咪定是一種新型高選擇性α2-腎上腺素受體激動劑，半衰期短，主要作用于腦內負責覺醒與睡眠且α2-腎上腺素受體最密集的區(qū)域藍斑核，產生鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、抗焦慮作用，降低交感神經活性，降低機體應激反應程度，并對呼吸功能影響甚微，故其較傳統(tǒng)鎮(zhèn)靜鎮(zhèn)痛藥在臨床麻醉及重癥監(jiān)護室(ICU)應用中具有明顯優(yōu)勢[1-3]。不同的鹽酸右美托咪定合成工藝，會引入不同的有機溶劑，分別有甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、異丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、環(huán)己烷、二氧六環(huán)及甲苯。殘留溶劑又稱有機揮發(fā)性雜質，可能對人體的健康造成一定危害。根據《中華人民共和國藥典》2015年版[4]關于殘留溶劑的相關規(guī)定，應對鹽酸右美托咪定生產或純化中使用的溶劑進行檢測。關于鹽酸右美托咪定中殘留溶劑的檢測已有文獻報道[5]，但同時測定鹽酸右美托咪定中多種有機溶劑殘留量的文獻筆者尚未見報道。筆者在本實驗建立毛細管氣相色譜法配以頂空進樣，對鹽酸右美托咪定原料藥中11種有機溶劑殘留量分析進行系統(tǒng)性研究與確認，以期為鹽酸右美托咪定的質量控制提供參考。

1 儀器與試藥

1.1儀器 Agilent 7890B 氣相色譜儀，FID檢測器(氫火焰離子化檢測器)，Agilent G1888 頂空進樣器，DB-624毛細管色譜柱(美國Agilent公司)；XS105電子天平(梅特勒-托利多公司，感量：0.01 mg)；CLXXXUVM2純水機(ELGA公司)。

1.2試藥 乙醚、異丙醇、二氯甲烷、1，4-二氧六環(huán)(分析純，國藥集團化學試劑有限公司，批號分別為80059618，80109218，80047318，10008918)；甲醇、乙醇、甲苯、丙酮、N，N-二甲基甲酰胺、環(huán)己烷(色譜純，德國FISHER公司，批號分別為174486，1714869，134611，165605，1673620，106977)；四氫呋喃(色譜純，上海星可生化有限公司，批號：41161101)；乙酸乙酯(色譜純，美國TEDIA公司，批號：13040152)。鹽酸右美托咪定(廠家提供，批號：6601604012，6601604022，6601605012)。

2 方法與結果

2.1色譜條件 色譜柱為DB-624(30 m×0.32 mm，1.80 μm)毛細管柱；柱溫采取程序升溫，初始溫度35 ℃維持10 min，以0.5 ℃ ·min-1升溫至40 ℃，維持5 min，再以20 ℃ ·min-1升溫至65 ℃，維持1 min，再以60 ℃ ·min-1升溫至220 ℃，維持5 min；檢測器為 FID，檢測器溫度250 ℃；進樣口溫度 200 ℃ ；載氣為高純氮氣，分流進樣，分流比10：1，流速2 mL·min-1；氫氣流速30 mL·min-1；空氣流速300 mL·min-1；頂空進樣，平衡溫度85 ℃，平衡時間30 min，進樣體積：1 mL。

2.2溶液的配制

2.2.1空白溶液 精密量取N，N-二甲基甲酰胺5 mL，置50 mL量瓶，加水稀釋至刻度，即得。

2.2.2對照品儲備溶液 分別取甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、異丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、環(huán)己烷、二氧六環(huán)、甲苯適量，精密稱定，用N，N-二甲基甲酰胺溶解并定量稀釋成30 000，50 000，50 000，50 000，50 000，6 000，50 000，7 200，38 800，3 800，8 900 μg·mL-1，搖勻，作為各對照品儲備溶液。

2.2.3混合對照品儲備溶液和混合對照品溶液 精密量取各對照品儲備溶液1.00 mL，置50 mL 量瓶，純化水稀釋至刻度，搖勻，即為混合對照品儲備溶液。精密量取混合對照品儲備溶液5 mL，置10 mL 量瓶，用純化水稀釋至刻度，搖勻，即為混合對照品溶液。

2.2.4供試品溶液 精密稱取供試品1.0 g，置10 mL 量瓶，純化水溶解稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3方法學驗證

2.3.1系統(tǒng)適用性實驗 按“2.2”項方法制備混合對照品溶液、供試品溶液和空白溶液，按“2.1”項色譜條件分別進樣分析，色譜圖見圖1。色譜圖中各被測物色譜峰相互間分離度均符合要求。

2.3.2標準曲線的繪制與線性范圍考察 精密量取“2.2.3”項混合對照品儲備溶液10.0，5.0，2.5，1.0，0.5 mL，分別置10 mL量瓶，用純化水稀釋至刻度，精密量取1.00 mL，置 10 mL頂空瓶，加蓋密封，即得標準曲線溶液。按“2.1”項色譜條件測定，以標準曲線溶液濃度為橫坐標，被測物峰面積為縱坐標，進行線性回歸，回歸方程見表1。結果表明，甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、異丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、環(huán)己烷、二氧六環(huán)和甲苯在一定濃度范圍內線性關系良好。

表1 線性回歸方程及相關系數Tab.1 Linear regression equation and correlation coefficient

2.3.3精密度實驗 按“2.2”項方法配制混合對照品溶液，共6份，按“2.1”項色譜條件測定，計算得甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、異丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、環(huán)己烷、二氧六環(huán)和甲苯峰面積RSD分別為2.4%，1.2%，2.8%，2.2%，2.6%，2.9%，2.8%，2.9%，2.6%，2.7%，2.8%，表明所建立的色譜系統(tǒng)方法重復性良好。

1.甲醇；2.乙醇；3.乙醚；4.丙酮；5.異丙醇；6.二氯甲烷；7.乙酸乙酯；8.四氫呋喃；9.環(huán)己烷；10.二氧六環(huán)；11.甲苯。圖1 對照品溶液(A)、空白溶劑(B)與樣品溶液(C)氣相色譜圖1.methanol；2.ethanol；3.diethyl ether；4.acetone；5.isopropyl alcohol；6.dichloromethane；7.acetidin；8.tetrahydrofuran；9.cyclohexane；10.dioxane；11.toluene.Fig.1 Gas chromatograms of reference solution(A)，blank solvent(B) and sample solution (C)

2.3.4加樣回收率實驗 取鹽酸右美托咪定 (批號：6601604012) 約1.0 g，共2份，精密稱定。按“2.2”項方法配制供試品溶液，按“2.1”項色譜條件進行分析，外標法以峰面積計算供試品中各溶劑的本底殘留量。取同批次鹽酸右美托咪定1.0 g，共9份，精密稱定，置10 mL量瓶，其中3份精密加入“2.2.3”項混合對照品儲備溶液2.50 mL，3份精密加入混合對照品儲備溶液5.00 mL，另3份精密加入混合對照品儲備溶液7.50 mL，用純化水溶解并稀釋至刻度，搖勻，得相當于各殘留溶劑質量分數分別為50%，100%，150%水平的供試品溶液。按“2.1”項色譜條件進行分析，外標法以峰面積計算9份加樣鹽酸右美托咪定樣品中各溶劑的總殘留量，扣除供試品中各溶劑的本底殘留量，根據加入量計算回收率，結果見表2。結果符合殘留溶劑測定準確度的要求。

表2 鹽酸右美托咪定殘留溶劑回收率實驗結果Tab.2 Results of recovery test of residue organic solvents in dexmedetomidine hydrochloride %

2.3.5檢測限和定量限考察 取混合對照品溶液，逐級稀釋，分別進樣，以信噪比約為3計算檢測限，以信噪比約為10計算定量限。結果甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、異丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、環(huán)己烷、二氧六環(huán)和甲苯的檢測限分別為 0.34，0.31，0.027，0.12，0.23，0.13，0.14，0.15，0.20，2.4，0.081 μg·mL-1，相當于樣品的檢測限分別為3.4×10-7，3.1×10-7，0.27×10-7，1.2×10-7，2.3×10-7，1.3×10-7，1.4×10-7，1.5×10-7，2.0×10-7，24×10-7，0.81×10-7g·g-1；甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、異丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、環(huán)己烷、二氧六環(huán)和甲苯的定量限分別為1.13，1.05，0.09，0.39，0.78，0.43，0.46，0.48，0.68，8.00，0.27 μg·mL-1，相當于樣品定量限分別為11×10-7，10×10-7，0.9×10-7，3.9×10-7，7.8×10-7，4.3×10-7，4.6×10-7，4.8×10-7，6.8×10-7，8×10-6，2.7×10-7g·g-1。

2.3.6穩(wěn)定性考察 按“2.2”項方法配制混合對照品溶液6份，分別于0，2，4，6，8，10 h 取上述6份溶液，按“2.1”項色譜條件測定，記錄色譜峰面積。結果甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、異丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、環(huán)己烷、二氧六環(huán)和甲苯RSD分別為2.2%，1.5%，3.4%，2.5%，2.1%，3.1%，2.5%，2.7%，3.5%，2.6%，2.2%。結果表明，甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、異丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、環(huán)己烷、二氧六環(huán)和甲苯在該方法下10 h內穩(wěn)定。

2.4樣品測定 分別精密稱取3批樣品各1.0 g，按“2.2.4”項方法制備，按“2.1”項色譜條件檢測，結果見表3。3批鹽酸右美托咪定中有機溶劑殘留量均符合《中華人民共和國藥典》2015年版規(guī)定的限度。

表3 樣品檢測結果Tab.3 Test results of samples %，n=2

3 討論

3.1進樣方式選擇 使用氣相色譜法測定樣品中有機溶劑殘留量有直接進樣法和頂空進樣法[6-8]。通常情況下，低沸點溶劑建議采用頂空進樣法，高沸點溶劑可以采用溶液直接進樣法；但考慮到有機溶劑殘留量檢查時通常要同時檢測多種溶劑，為操作的可行性和簡便性，建議盡量采用同樣的檢測條件控制盡量多種類的殘留溶劑。故筆者在本實驗中選擇頂空進樣法測定鹽酸右美托咪定中11種有機溶劑殘留量。

3.2溶劑選擇 鹽酸右美托咪定是咪唑鹽酸鹽，極易溶于水，并且在選定的色譜條件下，各溶劑殘留均能達到良好的分離且不干擾樣品的測定，故選用純化水為溶劑。

3.3色譜柱選擇 鹽酸右美托咪定中需檢查有機溶劑種類較多，參考常見的有機溶劑檢查[9-12]，結合本品中需檢測的11種有機溶劑，選擇最常用中等極性毛細管柱DB-624作為分析的色譜柱。

3.4頂空條件的選擇 在頂空氣相分析中，各組分的相平衡會受到溫度的影響。在平衡時間設定為30 min條件下，測定11種有機溶劑在頂空平衡溫度為80，85和90 ℃時響應值。結果表明，隨著平衡溫度增加，各有機溶劑組分響應也逐漸增加，考慮到組分熱穩(wěn)定性等因素最終選擇85 ℃為頂空平衡溫度。另設定平衡溫度為85 ℃，測定有機溶劑在平衡時間為20，30，40 和50 min 時響應值。結果表明，各被測組分在30 min 后，響應值趨于穩(wěn)定，故選擇30 min為頂空平衡時間。

筆者在本實驗所建立的殘留溶劑檢測方法簡便、準確，能夠滿足實際樣品檢測的需要，可以為鹽酸右美托咪定殘留溶劑的藥典標準制定提供依據，并為鹽酸右美托咪定產品殘留溶劑檢測項目提供技術參考。