劉連為，隋宥珍，蔣日進(jìn)，徐開達(dá)，朱文斌，周永東

（浙江海洋大學(xué)海洋與漁業(yè)研究所，浙江省海洋水產(chǎn)研究所，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部重點(diǎn)漁場漁業(yè)資源科學(xué)觀測實(shí)驗(yàn)站，浙江省海洋漁業(yè)資源可持續(xù)利用技術(shù)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江舟山 316021）

舟山漁場自然環(huán)境優(yōu)良，魚類物種豐富，是我國重要的天然近海漁場。江河徑流的注入及沿岸流與臺灣暖流的交匯帶來豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，使該海域水質(zhì)肥沃、餌料生物豐富，成為多種水生生物的復(fù)合產(chǎn)卵場與育幼場。分布于產(chǎn)卵場、育幼場的魚卵、仔稚魚作為魚類資源的補(bǔ)充群體，是魚類資源可持續(xù)發(fā)展的根本，其種類組成和數(shù)量分布是評估該海域親魚資源量、魚類資源補(bǔ)充量最直接有效的數(shù)據(jù)資料。近幾十年來，隨著海洋捕撈強(qiáng)度的增大及產(chǎn)卵場、育幼場生態(tài)環(huán)境的破壞，舟山漁場重要經(jīng)濟(jì)魚類資源已經(jīng)嚴(yán)重衰退，幼魚資源破壞嚴(yán)重[1]。因此，開展產(chǎn)卵場、育幼場保護(hù)與重建、產(chǎn)卵親體及幼魚資源保護(hù)與恢復(fù)工作迫在眉睫，這也是舟山漁場修復(fù)振興的重要舉措，而摸清該海域魚卵、仔稚魚的種類組成及其數(shù)量分布是保障其順利實(shí)施的研究基礎(chǔ)。

目前，舟山漁場局部海域魚卵、仔稚魚群落結(jié)構(gòu)特征已有報道[2-5]，而魚卵、仔稚魚大范圍面上調(diào)查距今已有十多年[6]。為全面掌握舟山漁場魚卵、仔稚魚種類組成與數(shù)量分布現(xiàn)狀，本研究通過魚類產(chǎn)卵高峰期（春季）連續(xù)采集魚卵、仔稚魚樣本，采用DNA條形碼（DNA barcode）技術(shù)[7-9]，結(jié)合形態(tài)學(xué)方法及歷史調(diào)查資料對其鑒定，從而更加科學(xué)地評估該海域產(chǎn)卵親體與幼魚的現(xiàn)有資源量，為舟山漁場修復(fù)振興提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 調(diào)查站位及樣品采集

在舟山漁場4 個典型海域各設(shè)置3 個調(diào)查站位（表1、圖1），于2017-2019 年4-5 月進(jìn)行魚卵、仔稚魚調(diào)查，樣品采集及固定保存根據(jù)《海洋生物生態(tài)調(diào)查技術(shù)規(guī)程》進(jìn)行。采用口徑80 cm、長280 cm 的大型浮游生物網(wǎng)，在海域表層水平拖網(wǎng)10 min，拖速2 kn，網(wǎng)口系流量計(jì)以計(jì)算濾水量。

圖1 調(diào)查站位圖Fig.1 Sampling station of ichthyoplankton

表1 調(diào)查站位經(jīng)緯度Tab.1 Longitude and latitude of sampling station

1.2 樣品鑒定

樣品帶回實(shí)驗(yàn)室后分揀出魚卵、仔稚魚，在解剖鏡下根據(jù)魚卵、仔稚魚的形態(tài)特征進(jìn)行初步鑒定和計(jì)數(shù)，種類盡可能鑒定到最低分類等級。仔稚魚參考《日本產(chǎn)稚魚圖鑒》[10]進(jìn)行鑒定，魚卵及不確定種類的仔稚魚采用DNA 條形碼技術(shù)鑒定，PCR 引物為國際上通用的線粒體DNA CO I 基因片段擴(kuò)增引物，COIF：5'-TCAACCAACCACAAAGACATTGGCAC-3'；COIR：5'-TAGACTTCTGGGTGGCCAAAGAATCA-3'[7]。PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系參照陳永久等[11]，退火溫度為59 ℃，以ddH2O 代替模板DNA 做陰性對照。PCR 產(chǎn)物純化后連接到載體，轉(zhuǎn)化到大腸桿菌中，采用PCR 擴(kuò)增法篩選陽性克隆進(jìn)行測序。通過BioEdit 軟件對測序結(jié)果進(jìn)行人工校對后與NCBI 數(shù)據(jù)庫比對，結(jié)合形態(tài)學(xué)方法及歷史調(diào)查資料確定種類。

1.3 數(shù)據(jù)處理與分析

（1）相對重要性指數(shù)

魚卵與仔稚魚的優(yōu)勢種根據(jù)各個種的相對重要性指數(shù)IRI（index of relative importance）來確定：IRI=N%×F%×10 000。式中，N%為某一種魚卵與仔稚魚豐度占總豐度的百分比；F%為某一種魚卵與仔稚魚出現(xiàn)的站位數(shù)占總調(diào)查站位的百分比。定義IRI＞1 000 為優(yōu)勢種，100＜IRI＜1 000 為重要種。

（2）群落多樣性分析

采用馬格利夫多樣性指數(shù)（margalef diversity index，D）、香農(nóng)-維納多樣性指數(shù)（Shannon-Wiener Index，H′）、皮諾均勻度指數(shù)（pielou′s evenness index，J′）計(jì)算魚卵、仔稚魚群落多樣性，計(jì)算公式為：

式中：

S——為魚卵、仔稚魚種類總數(shù)；

N——為魚卵、仔稚魚總個體數(shù)；

ni——為第i 種魚卵、仔稚魚的個體數(shù)占群落中總個體數(shù)的比例。

2 結(jié)果

2.1 魚卵、仔稚魚種類組成

2017-2019 年4-5 月共采集魚卵4 144 粒，仔稚魚785 尾。共鑒定出魚卵、仔稚魚40 種，隸屬于10 目27 科，有1 種鑒定到目，1 種鑒定到科，9 種鑒定到屬（表2、表3）。其中，鱸形目種類最多，為12 科19 種，占47.50%；鰈形目次之，為3 科5 種，占12.50%；鯡形目為3 科4 種，鲉形目為2 科4 種，均占10.00%；鰻鱺目為2 科2 種，鯔形目為1 科2 種，均占5.00%；燈籠魚目、仙女魚目、鲀形目與鲀形目均為1 科1 種。鑒定出魚卵25 種，隸屬于7 目19 科，有5 種鑒定到屬；鑒定出仔稚魚21 種，隸屬于8 目16 科，有1 種鑒定到目，1 種鑒定到科，3 種鑒定到屬。

表2 2017-2019 年4-5 月舟山漁場魚卵、仔稚魚采集數(shù)量及鑒定種類數(shù)Tab.2 Abundance and species number of ichthyoplankton in Zhoushan fishing ground from April to May among 2017 and 2019

表3 2017-2019 年4-5 月舟山漁場魚卵、仔稚魚的種類組成Tab.3 Species composition of ichthyoplankton in Zhoushan fishing ground from April to May among 2017 and 2019

續(xù)表

2017 年4 月，共采集魚卵39 粒，仔稚魚473 尾。鑒定出魚卵、仔稚魚14 種，隸屬于6 目12 科，有2 種鑒定到屬。其中，魚卵6 種，隸屬于5 目6 科，2 種鑒定到屬；仔稚魚9 種，隸屬于5 目8 科。5 月，共采集魚卵355 粒、仔稚魚27 尾。鑒定出魚卵、仔稚魚13 種，隸屬于7 目12 科，有3 種鑒定到屬。其中，魚卵10 種，隸屬于6 目10 科，2 種鑒定到屬；仔稚魚3 種，隸屬于3 目3 科，有1 種鑒定到屬。

2018 年4 月，共采集魚卵12 粒、仔稚魚67 尾。鑒定出魚卵、仔稚魚12 種，隸屬于5 目11 科。其中，魚卵4 種，隸屬于3 目4 科；仔稚魚8 種，隸屬于5 目8 科。5 月，共采集魚卵1 641 粒、仔稚魚41 尾。鑒定出魚卵、仔稚魚18 種，隸屬于7 目15 科，有1 種鑒定到科，2 種鑒定到屬。其中，魚卵12 種，隸屬于5 目11科，有2 種鑒定到屬；鑒定出仔稚魚8 種，隸屬于5 目8 科，有1 種鑒定到科。

2019 年4 月，共采集魚卵38 粒、仔稚魚46 尾。鑒定出魚卵、仔稚魚16 種，隸屬于6 目12 科。其中，魚卵7 種，隸屬于4 目6 科；仔稚魚9 種，隸屬于4 目6 科。5 月，共采集魚卵2 059 粒、仔稚魚131 尾。鑒定出魚卵、仔稚魚22 種，隸屬于9 目16 科，有1 種鑒定到目，5 種鑒定到屬。其中，魚卵16 種，隸屬于7 目13科，3 種鑒定到屬；仔稚魚9 種，隸屬于6 目7 科，有1 種鑒定到目，2 種鑒定到屬。

2.2 魚卵、仔稚魚豐度時空分布

2017 年4 月，各站位魚卵豐度為0～3.15 ind·100-1·m-3，最高值出現(xiàn)在D3 站位，平均值為0.84 ind·100-1·m-3。各站位仔稚魚豐度為0.16～96.18 ind·100-1·m-3，最高值出現(xiàn)在C3 站位，平均值為9.04 ind·100-1·m-3。5月，各站位魚卵豐度為2.19～42.10 ind·100-1·m-3，最高值出現(xiàn)在C2 站位，平均值為11.68 ind·100-1·m-3。各站位仔稚魚豐度為0～4.13 ind·100-1·m-3，最高值出現(xiàn)在D2 站位，平均值為0.76 ind·100-1·m-3。

2018 年4 月，各站位魚卵豐度為0～0.79 ind·100-1·m-3，最高值出現(xiàn)在D3 站位，平均值為0.23 ind·100-1·m-3。各站位仔稚魚豐度為0～4.55 ind·100-1·m-3，最高值出現(xiàn)在C3 站位，平均值為1.02 ind·100-1·m-3。5月，各站位魚卵豐度為0～166.56 ind·100-1·m-3，最高值出現(xiàn)在B2 站位，平均值為28.39 ind·100-1·m-3。各站位仔稚魚豐度為0～4.37 ind·100-1·m-3，最高值出現(xiàn)在A1 站位，平均值為0.86 ind·100-1·m-3。

2019 年4 月，各站位魚卵豐度為0～4.46 ind·100-1·m-3，最高值出現(xiàn)在C1 站位，平均值為1.20 ind·100-1·m-3。各站位仔稚魚豐度為0～3.89 ind·100-1·m-3，最高值出現(xiàn)在A3 站位，平均值為1.06 ind·100-1·m-3。5月，各站位魚卵豐度為2.29～223.71 ind·100-1·m-3，最高值出現(xiàn)在C2 站位，平均值為47.85 ind·100-1·m-3。各站位仔稚魚豐度為0～12.08 ind·100-1·m-3，最高值出現(xiàn)在A3 站位，平均值為3.02 ind·100-1·m-3。

2017-2019 年4 月，魚卵、仔稚魚平均豐度差異均不顯著，呈現(xiàn)先降低而后略有回升。2017-2019 年5月，魚卵、仔稚魚平均豐度差異均不顯著，呈現(xiàn)逐年遞增趨勢。2017-2019 年4 月魚卵平均豐度明顯低于5月，差異顯著（P＜0.01），仔稚魚平均豐度與5 月相比差異不顯著（P＞0.05）。

表4 2017-2019 年4-5 月舟山漁場魚卵、仔稚魚平均豐度（ind·100-1·m-3）Tab.4 Average density of ichthyoplankton in Zhoushan fishing ground from April to May among 2017 and 2019

2.3 魚卵與仔稚魚優(yōu)勢種及其年度變化

2017-2019 年4-5 月魚卵與仔稚魚優(yōu)勢種和重要種組成見表5。2017 年4 月，魚卵與仔稚魚優(yōu)勢種為小黃魚Larimichthy spolyactis，重要種為六絲鈍尾蝦虎魚Amblychaeturichthys hexanema。5 月，魚卵與仔稚魚優(yōu)勢種為龍頭魚Harpodon nehereus，重要種為黃姑魚Nibea albiflora和鳀Engraulis japonicus；2018 年4月，魚卵與仔稚魚優(yōu)勢種為六絲鈍尾蝦虎魚，重要種為棱鮻Liza carinatus。5 月，魚卵與仔稚魚優(yōu)勢種為舌鰨屬未定種，重要種為黃姑魚和短吻紅舌鰨Cynoglossus joyneri；2019 年4 月，魚卵與仔稚魚重要種為六絲鈍尾蝦虎魚和鮻L.haematocheilus。5 月，魚卵與仔稚魚優(yōu)勢種為鳀和短吻紅舌鰨，重要種為黃姑魚和龍頭魚。六絲鈍尾蝦虎魚為2017-2019 年4 月共有重要種（優(yōu)勢種），黃姑魚為2017-2019 年5 月共有重要種，龍頭魚和鳀為2017 年與2019 年5 月共有重要種（優(yōu)勢種）。

表5 2017-2019 年4-5 月舟山漁場魚卵與仔稚魚優(yōu)勢種和重要種組成（IRI）Tab.5 Dominant and important species composition of ichthyoplankton in Zhoushan fishing ground from April to May among 2017 and 2019

2.4 魚卵與仔稚魚群落多樣性

2017-2019 年4-5 月魚卵與仔稚魚群落多樣性指數(shù)見表6。2017-2019 年4 月，物種豐富度指數(shù)、多樣性指數(shù)、均勻度指數(shù)呈逐年增長趨勢。2017-2019 年5 月，物種豐富度指數(shù)呈逐年增長趨勢，多樣性指數(shù)與均勻度指數(shù)呈先降低再回升趨勢。

表6 舟山漁場魚卵與仔稚魚群落多樣性指數(shù)Tab.6 Community diversity index of ichthyoplankton in Zhoushan fishing ground

3 討論

從2017-2019 年4-5 月優(yōu)勢種分布情況來看，春季舟山漁場魚卵與仔稚魚優(yōu)勢種主要為小黃魚、六絲鈍尾蝦虎魚、鳀、龍頭魚、舌鰨屬未定種及短吻紅舌鰨。通過對舟山漁場及其鄰近海域漁業(yè)資源調(diào)查，結(jié)果表明，與20 年代60 年代初相比，該海域魚類種類組成發(fā)生了很大的變化。春季，該海域魚類優(yōu)勢種為小黃魚、六絲鈍尾蝦虎魚、鳀、龍頭魚、七星底燈魚Benthosema pterotum 等種類[12-14]，這與本研究中魚卵與仔稚魚優(yōu)勢種基本一致。七星底燈魚魚卵、仔稚魚在東海分布水深主要為20～200 m，其中以40～80 m 較多[15]，本研究于2019 年5 月在表層調(diào)查水域僅采集到3 粒魚卵。

周永東等[6]于2008 年4-6 月對浙江中北部沿岸魚卵和仔稚魚進(jìn)行調(diào)查，結(jié)果表明，春季舟山漁場魚卵主要種類有小黃魚、銀鯧Pampus argenteus、黃姑魚，仔稚魚主要種類有鯔科未定種和蝦虎魚科未定種，但小黃魚、銀鯧的魚卵數(shù)量百分比較1960 年同期下降明顯，而本研究中銀鯧的魚卵數(shù)量百分比（1.00%）較2008 年同期亦下降明顯。調(diào)查海域所在的4 個典型海域均為銀鯧的產(chǎn)卵場，因此，舟山漁場銀鯧資源尤其產(chǎn)卵親體亟待加強(qiáng)保護(hù)。樊紫薇等[2]對岱衢洋產(chǎn)卵場的魚卵、仔稚魚群落結(jié)構(gòu)進(jìn)行研究，認(rèn)為春季（2010-2011 年）該海域魚卵優(yōu)勢種為小帶魚Eupleurogrammus muticus 與舌鰨科未定種，仔稚魚優(yōu)勢種為鮻、絲鰭Callionymus virgis、鳀、矛尾蝦虎魚Chaeturichthys stigmatias，本研究中岱衢洋海域仔稚魚優(yōu)勢種為小黃魚、六絲鈍尾蝦虎魚（魚卵數(shù)量較少，未分析）。印瑞等[3]對馬鞍列島人工魚礁區(qū)的魚卵、仔稚魚群落結(jié)構(gòu)進(jìn)行研究，認(rèn)為春季（2018 年）馬鞍列島人工魚礁區(qū)魚卵優(yōu)勢種為小黃魚，仔稚魚優(yōu)勢種為褐菖鲉Sebastiscus marmoratus 和花鱸Lateolabrax japonicus，本研究中嵊山洋海域魚卵優(yōu)勢種為舌鰨屬未定種（仔稚魚數(shù)量較少，未分析）。這可能與調(diào)查海域選擇的范圍大小不同有關(guān)。

本研究基本掌握了舟山漁場典型海域魚卵、仔稚魚的種類組成及數(shù)量時空分布，下一步應(yīng)繼續(xù)加強(qiáng)該海域魚卵、仔稚魚的調(diào)查，以期不斷豐富舟山漁場DNA 條形碼資源庫。同時，基于現(xiàn)有研究結(jié)果，不斷探索疑難種類鑒定方法，積極構(gòu)建主要種類魚卵、仔稚魚形態(tài)分類檢索表，為魚類早期補(bǔ)充機(jī)制、資源量評估、資源可持續(xù)利用等研究提供基礎(chǔ)資料。

致謝：本研究在魚卵、仔稚魚樣本采集過程中得到浙江省海洋水產(chǎn)研究所張洪亮、陳峰、畢遠(yuǎn)新、張亞洲、盧占暉、李振華、李德偉、王好學(xué)等同志給予的協(xié)助，特此表示感謝。