韋潔玲，顧紅蕊，崔洪振，成信明

（廣西田園生化股份有限公司 南寧市 530007）

植物經(jīng)常面臨多種脅迫，其中低溫脅迫是作物栽培中經(jīng)常遇到的一種災(zāi)害。低溫影響植物的生長代謝，引起植物相關(guān)生理指標(biāo)變化，導(dǎo)致植物生長發(fā)育受損，表現(xiàn)出如矮化、萎蔫、黃化及葉片畸形等特征［1-3］，繁殖階段發(fā)生冷害，對(duì)產(chǎn)量品質(zhì)影響更大［4］，冷害嚴(yán)重可造成植株死亡。植物抗冷害措施主要通過提高植株的光合速率、降低質(zhì)膜的過氧化作用、穩(wěn)定膜的結(jié)構(gòu)與功能，加強(qiáng)膜的抵御能力；提高抗氧化酶活性，防止細(xì)胞溶質(zhì)外滲等來實(shí)現(xiàn)的。耐冷性鑒定的評(píng)價(jià)指標(biāo)分為形態(tài)指標(biāo)和生理生化指標(biāo)兩類，其中形態(tài)指標(biāo)包括葉齡、葉色、葉片卷曲程度、死苗率、葉赤枯度、生長量等；生理生化指標(biāo)包括電解質(zhì)滲出率、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活性、過氧化物酶（peroxidase，POD）活性、過氧化氫酶（catalase，CAT）活性、丙二醛含量、葉綠素含量、凈光合速率、飽和脂肪酸含量、脯氨酸含量等[5-7]。

實(shí)際應(yīng)用中，提高植物防寒抗凍途徑有：抗寒育種、耐低溫鍛煉、使用耐低溫砧木、施用植物營養(yǎng)產(chǎn)品（磷酸二氫鉀，海藻肥等）［8-11］、噴施植物生長調(diào)節(jié)劑（水楊酸、甜菜堿，ABA、油菜素內(nèi)酯）[1，12-15]，或噴施氨基寡糖素[16-17]等具有誘導(dǎo)抗逆免疫激活作用的殺菌劑。目前抗冷的新藥劑品種比較少，毒氟磷具有一定的誘導(dǎo)抗逆性，通過上調(diào)過氧化物酶（POD）、活性氧（ROS）、水楊酸（SA）等激活系統(tǒng)獲得抗性（SAR）形成大量病程相關(guān)蛋白（PR）[18-20]，因此，試驗(yàn)擬鑒定毒氟磷誘導(dǎo)作物的抗冷效果，探索一種周期短，操作簡單，便于觀察的抗冷害效果初篩方法，為抗冷藥劑的快速評(píng)價(jià)提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試藥劑

30%毒氟磷WP（廣西田園生化股份有限公司，市購）；5%氨基寡糖素AS（海南正業(yè)中農(nóng)高科股份有限公司，市購）。

1.2 試驗(yàn)基本情況

作物：采用食葉紅薯品種，臺(tái)農(nóng)71號(hào)。

試驗(yàn)地：廣西田園生化股份有限公司溫室大棚。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)1：30%毒氟磷WP1 000倍液，清水對(duì)照2個(gè)處理，每個(gè)處理13個(gè)重復(fù)，初步驗(yàn)證該試驗(yàn)方法測(cè)量抗冷效果。

試驗(yàn)2：設(shè)30%毒氟磷WP1 000倍液，對(duì)照藥劑5%氨基寡糖素AS 1 000倍液，清水對(duì)照3個(gè)處理，每個(gè)處理15個(gè)重復(fù)。

1.4 試驗(yàn)方法

采摘紅薯嫩梢枝條（15～30 cm，頂端留3～4片葉，去除下部葉片，留下1 cm的葉梗），枝條扦插到試管中，試管中保留10 cm左右高度的清水，每個(gè)處理10～15株。

相關(guān)藥劑根據(jù)設(shè)計(jì)的濃霧，葉片噴霧后常溫25℃下培養(yǎng)3 d，使藥劑充分吸收，誘導(dǎo)植株抗冷功能，然后放入4℃冰箱中2 d，冷害結(jié)束后取出在溫室內(nèi)25℃培養(yǎng)1～6 d，觀察恢復(fù)情況，同時(shí)根據(jù)冷害的不同嚴(yán)重程度分級(jí)調(diào)查，分級(jí)如下。

0級(jí)：健康，沒有明顯的冷害斑點(diǎn)；

1級(jí)：生長點(diǎn)輕微耷拉或者只有1個(gè)小枯斑，枯斑面積小于葉片面積的10%；

3級(jí)：生長點(diǎn)有多個(gè)枯斑，單片葉子枯斑面積小于50%或整體枯斑面積小于葉片面積的50%；

5級(jí)：生長點(diǎn)葉片多個(gè)枯斑，整體枯斑面積大于葉片面積的50%；

7級(jí)：生長點(diǎn)枯死，或者葉片全部焦枯、脫落。

冷害指數(shù)=∑（各級(jí)株數(shù)×對(duì)應(yīng)株數(shù)）／（調(diào)查總株數(shù)×7）×100

抗冷效果（%）=（對(duì)照冷害指數(shù)-處理冷害指數(shù)）/對(duì)照冷害指數(shù)×100

2 結(jié)果與分析

紅薯枝條扦插后藥劑處理，常溫培養(yǎng)3 d，在4℃下冷害2 d后，枝條整株萎蔫耷拉，冷害嚴(yán)重的植株會(huì)出現(xiàn)失水狀墨綠色的枯斑，心葉出現(xiàn)少量焦黑狀冷害斑。25℃常溫下恢復(fù)培養(yǎng)1 d后，冷害焦枯斑顏色加深變黑褐色，部分葉片枯死脫落（圖1）。試驗(yàn)表明，清水對(duì)照凍傷明顯，冷害枯斑出現(xiàn)早，新葉焦枯嚴(yán)重。30%毒氟磷WP1 000倍液處理冷害相對(duì)較輕（圖1、2、3）。經(jīng)過分級(jí)調(diào)查統(tǒng)計(jì)，噴施30%毒氟磷WP1 000倍液，對(duì)紅薯葉片的抗冷具有比較好的效果，冷害恢復(fù)1 d抗冷防效分別為68%（表1）。

表1 30%毒氟磷WP處理紅薯的抗冷害效果（冷害恢復(fù)1 d）

圖1 對(duì)照植株冷害癥狀

圖2 藥劑處理植株冷害癥狀（30%毒氟磷WP 1 000倍液）

圖3 30%毒氟磷WP 1 000倍液處理與對(duì)照冷害恢復(fù)2 d后整體效果

研究表明，氨基寡糖素具有強(qiáng)誘導(dǎo)抗逆，提升作物抵抗冷害的效果[16-17]。本次試驗(yàn)對(duì)氨基寡糖素和毒氟磷抗冷效果進(jìn)行比較，結(jié)果表明（表2），在抗冷防效上，30%毒氟磷WP1 000倍液（恢復(fù)1 d、6 d防效分別為70%和69%）優(yōu)于5%氨基寡糖AS 1 000倍液（恢復(fù)1 d、6 d防效分別為42%和50%）。對(duì)冷害指數(shù)進(jìn)行Duncan方差分析，冷害恢復(fù)1 d，30%毒氟磷WP1 000倍液處理冷害指數(shù)最輕，與對(duì)照比差異顯著（0.05水平）；冷害恢復(fù)6 d，30%毒氟磷WP1 000倍液處理的冷害指數(shù)同清水對(duì)照冷害指數(shù)比也具有顯著差異（0.05水平）。30%毒氟磷WP 1 000倍液處理與5%氨基寡糖AS 1 000倍液處理，5%氨基寡糖AS 1 000倍液處理與對(duì)照處理，冷害指數(shù)（冷害恢復(fù)1 d、6 d）差異均不顯著。

表2 不同藥劑處理對(duì)紅薯的抗冷效果對(duì)比

3 討論與結(jié)論

采用紅薯嫩梢扦插水培，葉面噴施相關(guān)的藥劑后，常溫25℃培養(yǎng)3 d。而后放入4℃冰箱中冷害2 d，取出常溫25℃培養(yǎng)1 d、6 d，查看冷害情況，根據(jù)冷害嚴(yán)重度分級(jí)調(diào)查，計(jì)算出冷害指數(shù)和抗冷效果。該方法具有比較好的重現(xiàn)性，癥狀差異明顯，利于直接觀察及分級(jí)調(diào)查，試驗(yàn)的周期短（為6～11 d），試驗(yàn)材料獲取方便，直接采購市場(chǎng)銷售的食葉紅薯嫩梢即可。該方法可以作為抗冷害新藥劑快速初篩的評(píng)價(jià)方法。

本次試驗(yàn)中，30%毒氟磷WP 1 000倍液噴霧，對(duì)作物抗冷害有較好的效果。在實(shí)際推廣應(yīng)用中，毒氟磷不僅可以有效防控病毒病，還具有抗冷效果，值得推廣。毒氟磷誘導(dǎo)激發(fā)作物抗冷功能的各項(xiàng)生理指標(biāo)變化及作用機(jī)理，有待進(jìn)一步研究。