亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        基于指紋圖譜和一測多評的升降茶質量控制研究

        2021-07-03 06:37:56劉菊白明學張紅偉金云隆呂鵬高曉潔鄭州市中醫(yī)院鄭州450007河南省食品藥品檢驗所國家藥品監(jiān)督管理局中藥材及飲片質量控制重點實驗室鄭州45008
        中南藥學 2021年5期
        關鍵詞:號峰蘆薈黃素

        劉菊,白明學*,張紅偉,金云隆,呂鵬,高曉潔(.鄭州市中醫(yī)院,鄭州 450007;.河南省食品藥品檢驗所,國家藥品監(jiān)督管理局中藥材及飲片質量控制重點實驗室,鄭州 45008)

        升降茶由大黃、姜黃、僵蠶、蟬蛻4味中藥組成,具升清降濁、散風清熱之功,主治溫病表里三焦大熱,癥見低熱或未發(fā)熱、干咳、少痰、咽干咽痛、倦怠乏力、胸悶、脘痞、嘔惡、便溏等。該品種是2020年3月鄭州市中醫(yī)院在河南省食品藥品監(jiān)督管理局應急備案的中藥制劑,該方來源于經典名方升降散。

        中藥復方制劑成分復雜,其療效經多成分、多靶點協(xié)同作用。指紋圖譜技術對中藥制劑質量控制具有針對性和合理性[1]。單一成分的含量測定也無法全面、真實地評價其整體質量。王智民等[2-3]率先提出一測多評法(QAMS),即利用一種成分的對照品作為內參物,建立該成分與其他成分之間的相對校正因子,通過相對校正因子計算其他成分含量,來實現(xiàn)多個成分的同步測定,具有快速、簡便、成本低等優(yōu)點,近年來在中藥復方制劑質量評價中廣泛使用。為全面控制升降茶質量,本研究建立HPLC指紋圖譜,從中藥物質基礎角度出發(fā),系統(tǒng)、整體、穩(wěn)定地表征其共有成分及內在特征。并采用一測多評法,以穩(wěn)定易得、價格低廉的姜黃素為內標物,實現(xiàn)其他4種成分含量的同步測定。

        1 材料

        1.1 儀器

        LC-20A型高效液相色譜儀(日本島津公司);Agilent 1260型高效液相色譜儀(安捷倫科技有限公司);JA2003N電子天平(上海菁海儀器設備有限公司);AB265-5型電子天平(d=0.01 mg,梅特勒-托利多儀器有限公司);超聲波清洗機(昆山市超聲儀器有限公司);DZKW-4恒溫水浴鍋(河南天帝電子科技有限公司)。

        1.2 試藥

        升降茶(鄭州市中醫(yī)院,批號:200125、200126、200127、200203、200204、200205、200206、202007、200208、200209,編號分別為S1~S10)。姜黃素(批號:110823-201706,含量:98.7%)、蘆薈大黃素(批號:110795-201007,含量:98.0%)、大黃酸(批號:110757-201607,含量:99.3%)、大黃素(批號:110756-201913,含量:96.0%)、大黃酚(批號:110796-201922,含量:99.4%)對照品(中國食品藥品檢定研究院)。甲醇為色譜純,水為超純水,其余試劑均為分析純。

        2 方法與結果

        2.1 HPLC指紋圖譜的建立[4-9]

        2.1.1 色譜條件 色譜柱Phenomenex Lune C18(5 μm,4.6 mm×250 mm),流動相為甲醇(A)-0.1%磷酸溶液(B),梯度洗脫(0~5 min,60%~70%B;5~12 min,70%~79.5%B;12~20 min,79.5%B;20~25 min,60%B),流速為1.0 mL·min-1,檢測波長為254 nm,柱溫為25℃。

        2.1.2 對照品母液制備 分別取蘆薈大黃素、姜黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚對照品適量,精密稱定,加甲醇溶解稀釋制成每l mL含31.2 μg蘆薈大黃素、423.9 μg姜黃素、31.8 μg大黃酸、49.5 μg大黃素、39.6 μg大黃酚的混合對照品母液。

        2.1.3 供試品溶液的制備 取升降茶內容物0.25 g,精密稱定,加甲醇25 mL,超聲處理30 min,放冷,補足重量,過濾,取續(xù)濾液,即得。

        2.1.4 單味飲片溶液制備 分別單獨取大黃、姜黃、蟬蛻、僵蠶飲片0.1 g,按“2.1.3”項下方法分別制成大黃、姜黃、蟬蛻、僵蠶單味飲片溶液。

        2.1.5 精密度試驗 取樣品(批號:200125),按“2.1.3”項下方法制備供試品溶液,進樣測定6次,以6號峰(姜黃素)為參照峰,測得各共有峰相對保留時間RSD均小于0.65%(n=6),相對峰面積RSD均小于0.95%(n=6),表明儀器精密度良好。

        2.1.6 穩(wěn)定性試驗 取樣品(批號:200125),按“2.1.3”項下方法制備供試品溶液,于0、2、4、8、12、24 h進樣測定,以6號峰(姜黃素)為參照峰,測得各共有峰相對保留時間RSD均小于0.89%(n=6),相對峰面積RSD均小于0.68%(n=6),表明溶液在24 h內穩(wěn)定性良好。

        2.1.7 重復性試驗 取樣品(批號:200125),按“2.1.3”項下方法平行制備6份供試品溶液,進樣測定,以6號峰(姜黃素)為參照峰,測得各共有峰相對保留時間RSD均小于0.95%(n=6),相對峰面積RSD均小于1.1%(n=6),表明該方法重復性良好。

        2.1.8 相似度評價 取10批升降茶,按“2.1.3”項下方法制備供試品溶液,在“2.1.1”項色譜條件下進樣測定,采用中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)軟件(2012A版)進行分析,10批次指紋圖譜共有模式及生成對照圖譜見圖1。共標定出12個共有峰,由于6號峰(姜黃素)保留時間穩(wěn)定、峰面積較大,對稱度好,故選擇其作為參照峰(S)。測得10批樣品相似度分別為0.997、0.984、0.992、0.993、0.997、0.998、0.996、0.981、0.989、0.997,均大于0.98,表明各批次樣品之間的質量相對穩(wěn)定。

        圖1 10批樣品HPLC指紋圖譜共有模式及各成分對照圖譜Fig 1 HPLC fingerprints common model of 10 sample batches and reference chromatograms of various constituents

        圖2 單味藥HPLC指紋圖譜Fig 2 HPLC fingerprint of single herb

        2.1.9 共有峰指認歸屬 通過各峰保留時間并結合對照品溶液定位,確認出其中5個色譜峰,分別為5號峰蘆薈大黃素、6號峰姜黃素、7號峰大黃酸、9號峰大黃素、11號峰大黃酚。通過單味姜黃、大黃、僵蠶、蟬蛻圖譜比對,確認1~5、7、9、11號峰來源于大黃,6、8、10、12號峰來源于姜黃。

        2.1.10 聚類分析 以10批升降茶作為研究對象,應用SPSS 22.0軟件,以6號(姜黃素)峰為參照峰,將12個特征峰相對峰面積之和導入軟件,采用中位數聚類法,歐式距離平方為測量區(qū)間,樹狀結果見圖3,顯示10批升降茶聚為3類,S1、S2、S3、S8、S9、S10聚為一類,S5、S6聚為一類,S4、S7為一類。這說明升降茶不同批次之間相對峰面積之和有所差異,這可能與飲片來源廠家、產地、批號差異有關,這為本品質量標準限度制訂提供數據依據,也提示日后生產過程中,注意原料質量的穩(wěn)定性和均一性。

        圖3 升降茶指紋圖譜聚類分析樹狀圖Fig 3 Cluster analysis diagram of fingerprint for Shengjiang tea

        2.2 一測多評法測定5種成分含量[10-14]

        2.2.1 對照品溶液制備 取“2.1.2”項下對照品母液5 mL,加甲醇稀釋至10 mL,得混合對照品溶液。

        2.2.2 陰性樣品溶液制備 分別取缺大黃陰性制劑、缺姜黃陰性制劑,按照“2.1.3”項下方法進行處理,制成缺大黃、缺姜黃的陰性樣品溶液。

        2.2.3 專屬性 分別精密吸取“2.2.1”項下混合對照品溶液,“2.1.3”項下供試品溶液,“2.2.2”項下缺大黃陰性樣品溶液、缺姜黃陰性樣品溶液各10 μL,按“2.1.1”項下色譜條件測定,理論板數按姜黃素峰計不低于3000,分離度大于1.5,陰性樣品無干擾,見圖4。

        圖4 升降茶各成分HPLC色譜圖Fig 4 HPLC chromatogram of various constituents in Shengjiang tea

        2.2.4 線性關系考察 取“2.1.2”項下混合對照品母液,逐級稀釋后分別進樣測定,記錄峰面積。以質量濃度(μg·mL-1)為橫坐標(X),峰面積(mAU*s)為縱坐標(Y)繪制標準曲線,得5種成分的回歸方程、相關系數、線性范圍見表1,5種成分在各自范圍內與峰面積線性關系良好。

        表1 各成分線性關系Tab 1 Linearity of various constituents

        2.2.5 相對校正因子測定 將“2.2.4”項下不同濃度混合對照品溶液分別進樣10 μL,以姜黃素為內標,計算其他4種成分的相對校正因子,結果見表2。

        表2 各成分相對校正因子Tab 2 Relative correction factor of various constituents

        2.2.6 精密度驗證 取“2.2.1”項下混合對照品溶液,進樣測定6次,測得蘆薈大黃素、姜黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚面積RSD分別為0.12%、0.23%、0.54%、0.18%、0.27%,表明儀器精密度良好。

        2.2.7 重復性驗證 取樣品(批號:200125),按“2.1.3”項下方法平行制備6份供試品溶液,進樣測定,蘆薈大黃素、姜黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚含量RSD分別為0.54%、0.95%、1.1%、0.74%、0.89%(n=6),表明該方法重復性良好。

        2.2.8 穩(wěn)定性驗證 取樣品(批號:200125),于0、2、4、8、12 h進樣測定,測得蘆薈大黃素、姜黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚峰面積RSD分別為0.23%、0.31%、0.44%、0.37%、0.35%(n=5),表明溶液在12 h內穩(wěn)定性良好。

        2.2.9 加樣回收率驗證 取已知含量樣品(批號:200125)0.125 g平行6份,分別加入混合對照品溶液5 μL,按“2.1.3”項下方法進行制備,進樣測定,蘆薈大黃素、姜黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚加樣回收率分別為100.2%(RSD=1.1%)、99.8%(RSD=0.30%)、99.6%(RSD=0.53%)、99.9%(RSD=0.85%)、100.3%(RSD=1.2%)。

        2.2.10 相對校正因子耐用性考察 更換Agilent1260色譜儀、島津LC-2010 型色譜儀,更換 Agilent Extend-C18、Waters Symmetry C18、Phenomenex Lune C18色譜柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),調節(jié)柱溫25、30、35℃,調節(jié)流速0.8、1.0、1.2 mL·min-1,分別測定相對校正因子,蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚相對校正因子分別在0.1856~0.1925、0.1465~0.1532、0.2998~0.3141、0.2446~0.2546內,RSD均小于2.0%,表明儀器、色譜柱、柱溫、流速更改對相對校正因子無明顯影響。

        2.2.11 色譜峰定位考察 以相對保留時間為指標定位色譜峰,更換儀器、色譜柱考察對其的影響,結果見表3,可知儀器、色譜柱更改對相對保留時間均無明顯影響。

        表3 不同儀器、色譜柱對相對保留時間的影響(n=6)Tab 3 Effect of different instruments and columns on relative retention time (n=6)

        2.2.12 樣品含量測定 取3批樣品,按 “2.1.3”項下方法制備供試品溶液,分別精密吸取10 μL進樣測定,分別采用外標法和一測多評法計算含量,結果見表4,兩種方法所得結果無明顯差異(RSD<2%)。

        表4 各成分含量測定結果(mg·g-1,n=3)Tab 4 Content determination of various constituents (mg·g-1,n=3)

        3 討論

        3.1 質控指標選擇

        君藥指針對主病或主證起主要作用的藥物,其藥力居方中之首,用量較作為臣、佐藥大。所以現(xiàn)在部分學者認為升降散君藥為大黃。大黃瀉下、抗菌有效成分主要為蒽醌類化合物(大黃酸、大黃素、大黃酚、蘆薈大黃素、大黃素甲醚)。姜黃含姜黃素、雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素等成分。目前關于大黃、姜黃化學成分定性定量研究較為成熟。但僵蠶、蟬蛻化學成分研究多集中在氨基酸、蛋白質、微量元素類成分,《中國藥典》至今未收載其定性定量方法,也是目前含僵蠶、蟬蛻等動物藥的中藥制劑質量控制研究難點。因此本研究中升降茶含量測定僅選擇蘆薈大黃素、姜黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚作為質控指標開展研究。

        3.2 色譜條件優(yōu)化

        本研究考察了乙腈-0.1%磷酸溶液、乙腈-0.2%磷酸溶液、甲醇-0.1%磷酸溶液、甲醇-0.2%磷酸溶液四種流動相系統(tǒng),最終確定采用甲醇-0.1%磷酸溶液。對其梯度洗脫程序反復調試,確定了本文的洗脫條件。此條件下,各化學成分洗脫完全,色譜峰分離度及峰形較好,能夠滿足指紋圖譜建立要求。

        4 結論

        本研究首次建立升降茶HPLC指紋圖譜,并采用一測多評法同步測定蘆薈大黃素、姜黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚的含量,10批制劑相似度均大于0.98,相對校正因子在不同儀器、色譜柱、流速、柱溫條件下均較穩(wěn)定,且操作簡單,經濟成本低,可用于升降茶的質量控制與評價。

        猜你喜歡
        號峰蘆薈黃素
        止咳寶片的HPLC指紋圖譜研究
        我的植物朋友——蘆薈
        陰炎凈洗液標準湯劑的HPLC指紋圖譜研究*
        我愛蘆薈
        小讀者(2021年6期)2021-07-22 01:50:02
        穿越時光的黃素石樓
        海峽姐妹(2019年8期)2019-09-03 01:01:02
        感悟生命
        當藥黃素抗抑郁作用研究
        藏藥訶子化學成分的高效液相色譜-質譜聯(lián)用技術快速鑒定研究*
        當藥黃素對H2O2誘導PC12細胞損傷的保護作用
        漆黃素固體分散體的制備
        中成藥(2017年12期)2018-01-19 02:06:32
        中年熟妇的大黑p| 日本免费久久高清视频| 风韵丰满熟妇啪啪区老老熟妇| 久久精品免费一区二区三区| 国产精品久久国产精品99gif| 日本精品一区二区在线看| 毛片在线播放亚洲免费中文网| 专干老熟女视频在线观看| 少妇人妻在线视频| 无码国产一区二区色欲| 丝袜美足在线视频国产在线看| 精品国产三级a∨在线| 国产日韩欧美亚洲精品中字| 亚洲av综合日韩精品久久久| 99久久婷婷国产一区| 女人被弄到高潮的免费视频| 精品久久久久久无码中文野结衣| 特黄a级毛片免费视频| 2021亚洲色中文字幕| 激情五月开心五月啪啪| 亚洲av精品一区二区三区| 好男人视频在线视频| 少妇一级aa一区二区三区片| 日本a级免费大片网站| 国产av麻豆mag剧集| 国产精品视频流白浆免费视频| 69精品人妻一区二区| 日韩欧美中文字幕公布 | 免费黄网站久久成人精品| 在线亚洲精品中文字幕美乳色| 少妇久久久久久人妻无码| 欧美精品免费观看二区| 99精品国产成人一区二区在线| h视频在线播放观看视频| 中文乱码字慕人妻熟女人妻| 中文字幕在线久热精品| 女同亚洲一区二区三区精品久久 | 亚洲一区二区三区1区2区| 日本顶级metart裸体全部| 国产人澡人澡澡澡人碰视频| 亲少妇摸少妇和少妇啪啪|