亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        HPLC-MS/MS法同時測定人血漿中利培酮和帕利哌酮的濃度

        2021-07-03 08:18:48何秀玲譚金華宋天云唐霞夏小容溫預關暨南大學附屬江門中醫(yī)院期臨床研究中心廣東江門529000廣州醫(yī)科大學附屬腦科醫(yī)院藥學部廣州50370
        中南藥學 2021年6期
        關鍵詞:帕利哌酮藥動學利培

        何秀玲,譚金華,宋天云,唐霞,夏小容,溫預關(.暨南大學附屬江門中醫(yī)院Ⅰ期臨床研究中心,廣東 江門 529000;2.廣州醫(yī)科大學附屬腦科醫(yī)院藥學部,廣州 50370)

        利培酮(risperidone)作為精神分裂癥的一線治療藥物,具有較強的中樞5-羥色胺(5-HT)和多巴胺(D2)受體拮抗作用,口服吸收快,椎體外系不良反應發(fā)生率較低[1],被臨床廣泛使用。帕利哌酮是利培酮經細胞色素P450(CYP)同工酶代謝后的活性產物,有研究表明CYP2D6是利培酮最主要的代謝酶,其代謝表型分為超強代謝型、強代謝型和弱代謝型,利培酮在不同的代謝表型人群中的藥動學參數(shù)有差異[2-3]。德國神經精神藥理學與精神病藥理學會推薦在使用利培酮、帕利哌酮等藥物治療時進行藥物濃度監(jiān)測[4],制訂個體化給藥方案,以期提高藥物治療療效和安全性。目前國內采用HPLC-MS/MS法測定人血漿中利培酮和帕利哌酮的報道較少,現(xiàn)有的研究方法存在樣品前處理復雜、分析時間較長、基質效應明顯、定量限過高等不足[5-6]。為此,本研究在已有文獻[7-9]的基礎上,采用穩(wěn)定同位素作為內標,建立同時測定人血漿中利培酮和帕利哌酮的方法,并進行方法學驗證。

        1 儀器與試藥

        1.1 儀器

        LC-30AD高效液相色譜聯(lián)用質譜儀Triple Quad TM 5500(日本島津公司)和Applied Biosystems/(Sciex公司);XW-80A型旋渦混合器(原上海醫(yī)科大學儀器廠);Milli-Q超純水系統(tǒng)(美國Millipore公司);BP110S型電子分析天平(德國Sartorius公司);LC-456R型低速冷凍離心機(安徽中佳科學儀器有限公司);100~1000 μL手動移液器(Thermo公司)。

        1.2 試藥

        利培酮對照品(批號:20180918,純度:99.9%,中國食品藥品檢定研究院);帕利哌酮對照品(批號:20181015,純度:99.6%,USP);內標:利培酮-d4(批號:20190220)、帕利哌酮-d4(批號:20190324)(TPC公司);甲醇、乙腈(色譜純,德國Merk公司);甲酸(色譜純,Adamas公司);醋酸銨、英脫利匹特-20%(Sigma公司);水為超純水。

        2 方法與結果

        2.1 色譜條件

        色譜柱為Waters Atlantis T3(2.1 mm×50.0 mm,5.0 μm),預柱型號:Security Guard Cartridges C18(4 mm×2.0 mm,Phenomenex);流動相A為含0.1%甲醇和5.00 mmol·L-1醋酸銨的水溶液,B為含0.1%甲醇的乙腈,梯度洗脫(0~3 min,22%B,3.0~3.1 min,22%~90%B;3.1~3.6 min,90%B;3.6~3.7 min,90%~22%B;3.7~5.0 min,22%B);流速為 0.4 mL·min-1。

        2.2 質譜條件

        電噴霧離子源(ESI),噴霧電壓(IS)為4000 V,渦旋離子噴霧溫度為550℃,氣簾氣(Cur)為35 psi(1 psi=6.895 kPa),霧化氣(Gas1)為50 psi,輔助加熱氣(Gas2)為50 psi,碰撞氣(CAD)為9 Unit,正離子多離子反應檢測(MRM)。利培酮和帕利哌酮的定量離子對分別為m/z411.2→191.1和m/z427.0→207.0,去簇電壓(DP)分別為95 V、100 V,入口電壓(EP)均為10 V,碰撞能(CE)分別為39 V、35 V,內標利培酮-d4定量離子對為m/z415.2→195.1,帕利哌酮-d4定量離子對為m/z431.2→211.1。其二級質譜子離子掃描見圖1。

        圖1 利培酮(A)、帕利哌酮(B)、利培酮-d4(C)和帕利哌酮-d4(D)的二級質譜子離子掃描圖Fig 1 Secondary mass spectrum product ion scan of risperidone(A),paliperidone(B),risperidone-d4(C)and paliperidone-d4(D)

        2.3 對照品溶液和內標溶液的制備

        2.3.1 對照品溶液的制備 用甲醇溶解利培酮和帕利哌酮對照品,得到0.500 mg·mL-1的對照品儲備液。儲備液存于透明玻璃瓶,在-20℃條件下長期保存。

        2.3.2 內標溶液的制備 用甲醇溶解利培酮-d4對照品(2.5 mg/支)和帕利哌酮-d4對照品(1 mg/支),得到2.00 mg·mL-1的利培酮-d4儲備液和1.00 mg·mL-1的帕利哌酮-d4儲備液。儲備液存于透明玻璃瓶,在-20℃條件下長期保存。

        2.4 血漿樣品處理

        取50.0 μL的血漿樣品加入預先加了內標工作溶液50.0 μL的96孔板,將96孔板振搖約1 min,再加入200 μL的甲醇,振搖約10 min,室溫條件下4000 r·min-1離心10 min,取100 μL上清液轉移至干凈的96孔板中,用200 μL超純水稀釋,將96孔板充分振搖10 min后置于自動進樣器進行HPLC-MS/MS分析。

        2.5 方法學驗證

        2.5.1 專屬性 取來自不同健康者的空白血漿6份,其中3份加入0.500 mg·mL-1的儲備液和內標溶液,其中3份不做處理,除不加內標按“2.4”項下方法處理,進行分析,得色譜圖2A、B;取服用利培酮劑量2 mg患者的血漿樣品,按“2.4”項下方法處理,進行分析,得色譜圖2C。利培酮和利培酮-d4的保留時間約為1.9 min,帕利哌酮和帕利哌酮-d4的保留時間約為1.4 min。在分析物和內標相應保留時間的地方,無干擾峰出現(xiàn)。血漿中無內源性物質干擾測定,專屬性強。

        2.5.2 標準曲線及定量限 將“2.3”項下配制好的溶液分別加入到空白血漿中制備成質量濃度為利培酮0.0500(LLOQ)、0.100、0.500、1.00、3.00、5.00、15.0、30.0 ng·mL-1;帕利哌酮0.0500(LLOQ)、0.100、0.500、1.00、3.00、5.00、10.0、15.0 ng·mL-1的溶液。按照“2.4”項下方法處理后進樣,以分析物質量濃度為橫坐標,分析物與內標物的峰面積比值為縱坐標,用加權(W=1/χ2)最小二乘法進行回歸運算,得利培酮回歸方程:y=0.9121x+0.001 274(r=0.9985),定量限為0.05 ng·mL-1,在0.05~30 ng·mL-1與峰面積線性關系良好;帕利哌酮回歸方程:y=0.9495x+0.015 92(r=0.9983),定量限為0.05 ng·mL-1,在0.05~15 ng·mL-1與峰面積線性關系良好。

        2.5.3 回收率及精密度試驗 將定量限、低、中和高質量濃度質控工作溶液各6份分別與空白血漿渦旋混勻,按“2.4”項下方法處理后進樣,連續(xù)測定3批,計算批內、批間的準確度與精密度。同法以空白血漿、除不加標準系列溶液和內標外,按“2.4”項下方法處理后,再加入相應質量濃度的利培酮和帕利哌酮,以0.2 mL流動相溶解,離心后取2 μL進樣,以每一濃度兩種處理方法的峰面積比值計算提取回收率,結果見表1。

        2.5.4 基質效應 收集6個不同來源的空白人血漿,各取0.1 mL空白血漿,加入低、中、高質量濃度的工作液5 μL和內標20 μL,混勻,每個濃度平行制備3份。通過計算基質存在下的峰面積(由空白人血漿提取后加入待測物和內標測得),與不含基質的相應峰面積(待測物和內標的純溶液)比值,計算每一待測物和內標的基質因子。進一步通過待測物的基質因子除以內標的基質因子,計算經內標歸一化的基質因子。結果利培酮低、中、高3個質量濃度水平的內標歸一化因子的RSD在1.7%~4.5%,帕利哌酮在2.0%~5.2%,基質效應對濃度測定的干擾極小,可忽略不計。

        2.5.5 溶血效應和高脂效應 將2%的冷凍后全血加入空白基質中得到溶血基質,將一定比例的脂肪乳(脂含量為20 mg·mL-1)加入空白基質中得到高脂基質,用溶血血漿和高脂血漿分別配制低、中、高質量濃度的質控樣品(每個濃度水平3個重復),處理后進樣分析。結果利培酮溶血質控樣品平均測定值與其理論值的偏差在1.12%~4.44%,帕利哌酮在2.52%~4.81%,認為在質量濃度測定時溶血和高脂的影響可以忽略不計。

        2.5.6 穩(wěn)定性試驗 分別制備低、中、高3種質量濃度利培酮和帕里哌酮血漿樣品,考察分別經過室溫放置16 h、-70℃凍融5次和-70℃凍存61 d處理后血漿樣品的穩(wěn)定性。得到利培酮和帕里哌酮血漿樣品的準確度均在±15%,穩(wěn)定性符合相關要求,結果見表2。

        表2 血漿中帕利哌酮和利培酮的穩(wěn)定性(n=6)Tab 2 Stability of paliperidone and risperidone in the plasma (n=6)

        2.6 質控藥品的監(jiān)控

        按“2.5.2”項下方法分別配制低、中、高3種質量濃度血漿樣品,置-20℃凍存,備用,作為質控樣品。制作隨行標準曲線及檢測低、中、高3種質量濃度雙份質控樣品,如果相對回收率均在85%~115%(低濃度可在80%~120%),即可認為儀器檢測正常,否則須檢查整個操作過程以及儀器原因。本文的結果符合相關要求。

        2.7 藥動學應用

        6名健康受試者,男女各半,體質量(54.33±7.76)kg,年齡(30.33±7.06)歲,身高(168.08±7.09)cm。試驗采用2周期的二重2×2拉丁方自身對照試驗設計,6例受試者口服劑量均為2 mg,清洗期14 d。受試者于前一晚開始禁食至少10 h,給藥前抽取空白血樣4 mL,單次給藥用200 mL溫水送服,給藥后0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、4、6、8、12、24、48、72、96 h分別采集靜脈血4 mL,裝入肝素鈉試管,3000 r·min-1離心10 min后,分離血漿,置-70℃儲藏備用,測定后計算得主要藥動學參數(shù)見表3。

        表3 6名健康受試者口服利培酮2 mg后的主要藥動學參數(shù)(±s)Tab 3 Main pharmacokinetic parameters of 6 healthy subjects after the oral administration of 2 mg risperidone (±s)

        表3 6名健康受試者口服利培酮2 mg后的主要藥動學參數(shù)(±s)Tab 3 Main pharmacokinetic parameters of 6 healthy subjects after the oral administration of 2 mg risperidone (±s)

        藥動學參數(shù)利培酮帕利哌酮Cmax /(ng·mL-1)15.74±7.1111.80±3.55 tmax / h 1.1±0.4 4.5±3.2 t1/2 / h 3.67±1.5620.54±2.65 AUC(0~48)/(h·ng·mL-1) 79.56±46.23311.22±78.96 AUC(0~∞)/(h·ng·mL-1) 80.66±60.36325.55±86.23

        3 討論

        本研究曾選用ESI-MS,參照文獻[2]采用甲醇直接沉淀蛋白的方法處理血樣,但是方法學考察發(fā)現(xiàn)存在一定的基質效應?;|效應主要是由血漿內源性極性物質引起,在高比例有機相等度洗脫時,內源性物質和藥物出峰時間較近,基質效應較為明顯[10]。而在梯度洗脫方法研究中,首先采用較低比例的有機相沖洗,讓極性物質先流出色譜柱,保證了極性物質和藥物先后流出,大大降低了基質效應。此外梯度洗脫縮短了分析時間,同時壓縮了色譜峰,使得色譜峰尖銳,提高了檢測靈敏度?;|效應的消除方法中,使用穩(wěn)定同位素內標是一個快速而有效的辦法[7-9]。本研究選用穩(wěn)定同位素標記內標,內標同位素純度均在99%以上,選擇合適的內標濃度,可對整個分析環(huán)節(jié)帶來的誤差進行有效控制,結果表明內標與分析物直接的交叉信號響應值低。與已有文獻相比[1-3],本研究增加了對高脂效應和溶血效應的考察,結果兩者均不影響濃度的測定,消除了藥物臨床試驗中高脂餐和溶血效應對分析檢測的干擾。本研究中利培酮和帕利哌酮LLOQ均為0.05 ng·mL-1,與已有文獻[11]相比,方法靈敏度更高,能滿足臨床血藥濃度檢測和藥動學研究。

        帕利哌酮是利培酮在體內經CYP2D6和CYP3A酶轉化生成的代謝物[12]。有研究表明AUC的個體[2-3]差異大與CYP2D6和ABCB1的基因多態(tài)性有關。本研究中利培酮和帕利哌酮的藥動學參數(shù)AUC的標準差較大,與文獻報道一致[11],為后續(xù)研究提供依據(jù)。

        猜你喜歡
        帕利哌酮藥動學利培
        帕利哌酮與氟哌啶醇治療兒童抽動障礙對照研究
        大黃酸磷脂復合物及其固體分散體的制備和體內藥動學研究
        中成藥(2019年12期)2020-01-04 02:02:24
        帕利哌酮與氟哌啶醇治療精神分裂癥患者的臨床效果比照觀察
        鳶尾苷元在兔體內的藥動學
        中成藥(2017年10期)2017-11-16 00:49:54
        白楊素磷脂復合物的制備及其藥動學行為
        中成藥(2017年5期)2017-06-13 13:01:12
        帕利哌酮在精神分裂臨床治療中的安全性和有效性
        帕利哌酮血藥濃度與血清泌乳素的相關性研究
        呼替奇在雞體內的藥動學研究
        認知行為與利培酮聯(lián)合治療精神分裂癥殘留型的臨床療效分析
        利培酮治療精神分裂癥22例臨床觀察
        在线观看免费午夜大片| 无码中文字幕久久久久久| 日韩成精品视频在线观看| 亚洲日本人妻少妇中文字幕| 亚洲国产美女精品久久久久∴| 亚洲欧美牲交| 亚洲日韩一区二区三区| 中文字幕亚洲情99在线| 国产99页| 亚洲中文字幕免费精品| 国产自拍高清在线观看| 欧美怡红院免费全部视频| 久久久久亚洲精品美女| 亚洲综合天堂一二三区| 精品一区二区三区芒果| 黑人巨大无码中文字幕无码| 天天狠天天透天干天天| 国产av一区麻豆精品久久| 一本到在线观看视频| 少妇装睡让我滑了进去| 天天干夜夜躁| 久久狼人国产综合精品| 国产乱人对白| 精品亚洲aⅴ在线观看| 亚洲国产一区久久yourpan| 亚洲自拍偷拍色图综合| 亚洲熟妇无码久久精品| 自慰无码一区二区三区| 天堂在线观看av一区二区三区| 国产精品国产三级国产an不卡| 夜夜高潮夜夜爽国产伦精品| 精品久久久久久无码国产| 强d漂亮少妇高潮在线观看 | 99久久婷婷国产精品综合网站| 超碰97人人射妻| 亚洲精品成人网久久久久久| 丰满少妇高潮在线观看| 亚洲一区二区三区特色视频| 香港日本三级亚洲三级| 亚洲va在线va天堂va四虎| 激情视频在线观看免费播放|